Análise crítica da injeçäo intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) / Critical analysis of intracytoplasmatic sperm injection (ICSI)

Recentes estudos propiciaram um melhor entendimento da fisiologia reprodutiva, com conseqüente evoluçäo das técnicas de reproduçäo assistida. Após a fertilizaçäo in vitro (FIV) surgiram outras técnicas de fertilizaçäo assistida tais como a injeçäo intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI), introduzida em 1992, que consiste na injeçäo de um único espermatozóide no citoplasma de um oócito com o auxílio de uma micropipeta. Esta nova técnica aumentou dramaticamente as taxas de sucesso nos casos de infertilidade masculina e tornou-se em todo mundo a técnica de micromanipulaçäo de escolha. De acordo com a literatura, näo há diferenças nas taxas de fertilizaçäo e gravidez entre a ICSI e a FIV quando esta é realizada na ausência do fator masculino de infertilidade. Entretanto, na presença de qualquer fator masculino de infertilidade, a ICSI tem se mostrado nitidamente superior. O desenvolvimento da ICSI levantou inúmeras questöes no que se refere aos riscos genéticos envolvidos. Evidências recentes demonstram que a evoluçäo das gestaçöes e a taxa de malformaçöes congênitas pós-ICSI parecem ser semelhantes às obtidas com outras técnicas de reproduçäo assistida. Somente o seguimento cuidadoso e contínuo das gravidezes e dos neonatos poderá responder definitivamente esta questäo.

Punçäo testicular com agulha fina seguida de injeçäo intracitoplasmática de espermatozóide e gravidez: relato de caso / Fine needle biopsy of the testis followed by intracytoplasmic injection of the sperm and pregnancy: case report

Nos últimos anos, com o grande avanço das técnicas de reproduçao assistida, já se tornou possível a obtençao de gravidez utilizando-se apenas um espermatozóide, o qual pode ser injetado diretamente no interior do citoplasma do oócito (ICSI). Recentemente, a obtençao de espermatozóides através de punçao testicular com agulha fina nos mostrou que estes, apesar de imóveis e imaturos, sao capazes de fertilizar e resultar em gestaçao viável. Com isto, os pacientes portadores de fator masculino severo adquiriram uma nova esperança terapêutica. Apresentamos a seguir um caso de gravidez viável obtida com espermatozóide aspirado com agulha fina diretamente do testículo e ICSI.

Embarazo con espermatozoides testiculares / Pregnacy with testicular spermatozoa

En un paciente con diagnóstico de agenesia de vías espermáticas se propuso afectuar una aspiración epididimaria asociada a FIV (fertilización in vitro). En la exploración excrotal no se encontró epidídimo (debido probablemente a antecedente quirúrgico de biopsia epididimaria) por lo que se efectuó una biopsia testicular. Este material fue procesado obteniéndose escasos espermatozoides (algunos cientos). Estos espermatozoides fueron inyectados en el citoplasma de los ovocitos de la esposa (técnica de ICSI).De los 18 ovocitos inyectados, 3 se dañaron durante el procedimiento y a las 16 horas se observaron signos de fertilización normal en 6 de ellos, prosiguiendo el desarrollo 4 de embriones que fueron transferidos al útero por vía transcervical, 3 en estado de 8 células y uno de 6 células, habiéndosele efectuado previamnete en la zona pelúcida de cada uno de los embriones un orificio de 20 micrones con solución ácida de Tyrode. A los 15 días de la transferencia (2-1-95) el resultado de la subunidad beta de HCG fue positiva, detectándose al mes (2-2-95) por ecografía un embrión de 19 mm, cursando un embarazo normal

Gravidezes com micromanipulaçäo a partir de ovocitos e pré-embriöes transportados para laboratório central especializado / Pregnancies obtained after micromanipulation of oocytes and embryos transported to a specialized center

OBJETIVOS: Avaliar os resultados obtidos com a injeçao intracitoplasmática de espermatozóides em ovocitos que tenham sido submetidos a transporte de centro de fertilizaçao em vitro clássica, para outro especializado em micromanipulaçao. MATERIAL E MÉTODOS: 18 pacientes foram submetidas a superovulaçao com GnRH(a), FSH e HCG. Foram obtidos 145 ovocitos,os quais foram transportados em câmara especial, para centro especializado em micromanipulaçao. O sêmen foi preparado pela técnica de gradiente descontínuo de Percoll. Os ovocitos foram denudados com 80U/ml de hialuronidase. A injeçao intracitoplasmatica foi realizada em microgotas sob óleo mineral, utilizando equipamento Narishige. RESULTADOS: Após a injeçao intracitoplasmática, 35 dos 145 ovocitos fertilizaram (2 pró-nucleos), 37 sofreram lise, 73 evoluíram de forma atípica e houve 5 gestaçoes clínicas. CONCLUSOES: A micromanipulaçao é restrita a alguns centros devido às dificuldades técnicas e custo elevado do equipamento. Sendo o transporte fator que nao interfere de maneira significativa nos resultados deste procedimento, sugerimos a criaçao de serviços centralizados, especializados em micromanipulaçao, fazendo com que pelo menos os pacientes com fator masculino grave se beneficiem com estas técnicas.

Fertilizaçäo assistida pela micromanipulaçäo de ovócitos: primeira gestaçäo no C.B.R.H., Santa Casa, Santa Isabel de Säo Paulo / Assisted fertilization by oocytes micromanipulation: first pregnancy in C.B.R.H, Santa Casa, Santa Isabel de Säo Paulo

O autor apresenta 1ª gestaçäo em evoluçäo clínica obtida a partir da micromanipulaçäo de ovócitos na C.B.R.H. (Centro Biológico de Reproduçäo Humana Santa Casa - Santa Isabel de Säo Paulo). Pela técnica denominada PZD ("partial zona dissection") säo feitas duas perfuraçöes na zona pelúcida de ovócitos antes submetidos a soluçäo de sucrose 0,05M ou 0,1M em meio Ham-F-10 e depois "inseminados in vitro". Embora näo se possa afirmar que a penetraçäo dos espermatozóides ocorre pelos orifícios provocados na zona pelúcida tendo havido a gestaçäo referida, prova-se que a técnica permite a evoluçäo das divisöes do ovo, näo o tendo lesado. Seria técnica alternativa aplicável em casos de oliastenospermias graves com insucessos anteriores por outras técnicas e assim também em casos de ESCA, esterilidade sem causa aparente. Indica o autor o uso de ovócitos guardados humanos ou de animais, em soluçöes salinas fatores para testes de penetraçäo diagnósticas, sempre na dependência e possibilidades que atendam a ética e a relaçäo risco-benefício em respeito a vida, os direitos particulares e universais näo voluptuosos. Indica também a adiçäo das provas de potencial de aderência e penetraçäo de espermatozóides. Isto é, além dos testes de Humster (interaçäo de espermatozóides com ovócitos depelucidados), avaliaçöes de membranas (soluçäo hiposmótica, "Swelling test"), a HZA provas com zonas ou hemizonas pelúcidas humanas

A protocol used for splitting mouse embryos into two halves.

8-16 cell embryos and early blastocysts were obtained from the oviducts and anterior portion of uterine horns of albino mice at 70 and 90 hr after LH injection respectively. Splitting of embryos was done by using two microtools attached to a micromanipulator unit (Research Instruments Ltd, UK). After bisection, each pair of the half embryos is transferred to a dish containing 2 ml of T-6 medium and cultured in CO2 incubator (at 39 degrees C, 95% RH and 5% CO2 in air mixture). Splitting of blastocysts as compared to 8-16 cell embryos was found difficult (35.48% vs 52.44%, respectively). 38.88% of bisected 8-16 cell embryos and 11.36% of bisected blastocysts developed on 48 hr culture. Information on splitting mouse embryos and their subsequent development in culture are significant in view of using the technique for commercial application and for research in developmental biology of animal embryos.

Measurement of total iron binding capacity in Thai Blood donors by a micro-technique.

A micro-method with a high percentage of reproducibility and recovery was used to determine TIBC in 207 Thai blood donors. The mean values of TIBC were found to be 312 mu-g per 100 ml (S.D. = 46) in 149 male and 339 mu-g per 100 ml (S.D. = 58) in 58 female subjects respectively. There was a good relationship between these values and those obtained from the macro-technique using bathophenathroline in 105 samples. The corresponding results determined by the macro-technique were 328 mu-g per 100 ml (S.D. = 59) and 328 mu-g per 100 ml (S.D. = 74) in 106 male and 40 female subjects respectively. These results were fond to be in accordance with the result reported previously by other authors using different methods. The micro-method used in the present studies needed only 0.2 ml of serum. Determination of TIBC by this method and serum iron by the ultra-micro technique would be very valuable in the investigation of anaemia in the field studies particularly in infants.