Padronização de multiplex PCR para detecção de dermatófitos em pelos e crostas de cães e gatos / Standardization of a PCR multiplex for the detection of dermatophytes in dogs and cats fur and crusts

Objetivou-se padronizar uma reação do tipo multiplex PCR (mPCR) para detectar Microsporum canis, Microsporum gypseum e o complexo Trichophyton mentagrophytes em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. 250 amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos foram analisadas por meio de exame direto e cultura, o DNA das mesmas foi extraído para mPCR. Primers foram desenhados e como controle positivo da reação utilizou-se o DNA extraído de colônias de M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) e T. mentagrophytes (URM 6211), provenientes da Coleção de Culturas (Micoteca URM), Departamento de Micologia, Centro de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Pernambuco (CCB/UFPE). Como controles negativos de reação, utilizou-se água destilada esterilizada e DNA extraído de Alternaria sp. para verificar a especificidade dos primers. Do total de amostras analisadas, 15 (6%) foram identificadas, em cultura, como dermatófitos, e destas, 10 foram M. canis, três M. gypseum e dois T. mentagrophytes (complexo). Destas 15 amostras positivas, 11 (73,3%) foram detectadas por meio da mPCR. Além destas, seis outras, negativas em cultura, foram identificadas como M. gypseum. Verificou-se uma boa concordância entre os resultados da cultura e mPCR (Kappa: 0,66). O protocolo padronizado neste estudo pode ser utilizado como um método de triagem, por apresentar uma sensibilidade maior que a da cultura, usado paralelamente aos exames de rotina, permitindo um diagnóstico em menor tempo.(AU)

The aim of this study was to standardize a multiplex PCR (mPCR) reaction to detect Microsporum canis, Microsporum gypseum and the Trichophyton mentagrophytes complex in dog and cat fur and/or crusts. 250 fur and/or crusts samples from dogs and cats were analyzed by direct examination and culture, DNA from them was extracted for mPCR. Primers were designed and the DNA extracted from colonies of M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) and T. mentagrophytes (URM 6211) from the Collection of Cultures - URM Micoteca - Department of Mycology, Biological Sciences Center of the Federal University of Pernambuco (CCB / UFPE). As negative controls, sterile distilled water and DNA extracted from Alternaria sp., were used to verify the specificity of the primers. Of the total samples analyzed, 15 (6%) were identified in culture as dermatophytes, and of these, 10 were M. canis, three M. gypseum and two T. mentagrophytes (complex). Of these 15 positive samples, 11 (73.3%) were detected by mPCR. Besides these, six others, negative in culture, were identified as M. gypseum. There was good agreement between culture results and mPCR (Kappa: 0.66). The protocol standardized in this study can be used as a screening method, because it has a sensitivity greater than that of the culture, used in parallel to the routine exams, allowing a diagnosis in a shorter time.(AU)

Chemical composition and antifungal activity of essential oil from Eucalyptus smithii against dermatophytes

ABSTRACT INTRODUCTION: In this study, we evaluated the chemical composition of a commercial sample of essential oil from Eucalyptus smithii R.T. Baker and its antifungal activity against Microsporum canis ATCC 32903, Microsporum gypseum ATCC 14683, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533, T. mentagrophytes ATCC 11480, T. mentagrophytes ATCC 11481, and Trichophyton rubrum CCT 5507. METHODS: Morphological changes in these fungi after treatment with the oil were determined by scanning electron microscopy (SEM). The antifungal activity of the oil was determined on the basis of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) values. RESULTS: The compound 1,8-cineole was found to be the predominant component (72.2%) of the essential oil. The MIC values of the oil ranged from 62.5μg·mL−1 to >1,000μg·mL−1, and the MFC values of the oil ranged from 125μg·mL−1 to >1,000μg·mL−1. SEM analysis showed physical damage and morphological alterations in the fungi exposed to this oil. CONCLUSIONS: We demonstrated the potential of Eucalyptus smithii essential oil as a natural therapeutic agent for the treatment of dermatophytosis.

In vitro susceptibility testing of dermatophytes isolated in Goiania, Brazil, against five antifungal agents by broth microdilution method / Teste de suscetibilidade in vitro de dermatófitos isolados em Goiânia, Brasil, contra cinco agentes antifúngicos pelo método de microdiluição em caldo

The antifungal activities of fluconazole, itraconazole, ketoconazole, terbinafine and griseofulvin were tested by broth microdilution technique, against 60 dermatophytes isolated from nail or skin specimens from Goiania city patients, Brazil. In this study, the microtiter plates were incubated at 28 ºC allowing a reading of the minimal inhibitory concentration (MIC) after four days of incubation for Trichophyton mentagrophytes and five days for T. rubrum and Microsporum canis. Most of the dermatophytes had uniform patterns of susceptibility to the antifungal agents tested. Low MIC values as 0.03 µg/mL were found for 33.3 percent, 31.6 percent and 15 percent of isolates for itraconazole, ketoconazole and terbinafine, respectively.

Atividades antifúngicas de fluconazol, itraconazol, cetoconazol, terbinafina e griseofulvina foram testadas pelo método de microdiluição em caldo contra 60 isolados de dermatófitos. Os resultados mostraram que todos os isolados produziram crescimento claramente detectável a 28 ºC e a concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada após quatro dias de incubação para Trichophyton mentagrophytes e cinco dias para T. rubrum e Microsporum canis. A maioria dos isolados teve um padrão uniforme de suscetibilidade para os agentes antifúngicos testados. Baixos valores de CIM como 0,03 µg/mL foram encontrados para 33,3 por cento, 31,6 por cento e 15 por cento dos isolados para itraconazol, cetoconazol e terbinafina, respectivamente.

Anti dermatophytic activity of Azardirachta indica (neem) by invitro study.

The leaf and seed extracts of the Plant Azardirachta indica were tested for antidermatophytic activity against dermatophytes such as Trichophyton ruberum, Trichophyton, Mentagrophytes, Trichophyton violaceum, Microsporum nanum and Epidermophyton floccosum by tube dilution technique. The minimum Inhibitory concentration (MIC) of neem seed extract was found to be lower tan that of neem leaf when tested against different species of Dermatophytes.

Micosis cutáneas y mucosas en niños: estudio retrospectivo de 314 casos

Se presentan 314 casos de micosis cutáneas en niños, que fueran diagnosticados en la Corporación para Investigaciones Biológicas (CIB), durante los años de 1987 a 1993. Se hace énfasis en la frecuencia de dermatofitosis, candidiasis y micosis superficiales. Las dermatofitosis fueron diagnosticadas en 210 pacientes (67 por ciento), con mayor frecuencia de tinea capitis y tinea corporis, 88 (42 por ciento) y 81 (38.5 por ciento) casos, respectivamente. La tinea pedis también ocupó lugar importante con 27 casos (13 por ciento). Entre los agentes etiológicos, Microsporum canis fue aislado de 94 pacientes con predominio de las lesiones de cuero cabelludo, 75 casos (80 por ciento). El M.gypseum ocupó el segundo lugar con 52 casos (25 por ciento) y fué además el principal causante de tinea corporis (20.7 por ciento) en este grupo de pacientes. La candidiasis se diagnosticó en 89 pacientes (28 por ciento); la localización más común fue la de la piel glabra (35 por ciento). Candida albicans fue la especie aislada con mayor frecuencia (50.5 por ciento), seguido por C.parapsilosis, 19 casos (21 por ciento). Entre las micosis superficiales, la pitiriasis versicolor se observó en 14 casos (4 por ciento), mientras que la piedra negra fue encontrada sólo en una oportunidad. Los resultados anotados permiten señalar la importancia de las micosis dérmicas en la población pediátrica