Diagnostic value of pediatric blood culture bottles for acute postoperative endophthalmitis

OBJECTIVE: To report our experience using conventional culture methods (CM) and pediatric blood culture bottles (PBCBs) for vitreous sample culture of acute postoperative endophthalmitis. METHODS: A retrospective study was conducted at the Department of Ophthalmology, Hospital das Clinicas, HCFMUSP, Faculdade de Medicina, Universidade de Sao Paulo, Sao Paulo, BR, from January 2010 to December 2015, and it included 54 patients with clinically suspected acute postoperative endophthalmitis. Vitreous samples were obtained by vitreous tap or vitrectomy. Samples from January 2010 to December 2011 were cultivated in CM, whereas samples from January 2012 to December 2015 were inoculated in PBCBs. The measured outcome was the yield of positive cultures. RESULTS: Twenty cases were included in the CM group, and 34 cases were included in the PBCB group. The yield of positive cultures in PBCBs (64.7%) was significantly higher than that in conventional CM (35%, p=0.034). Staphylococcus epidermidis and Streptococcus viridans were the two most commonly found agents. CONCLUSION: PBCBs can be used successfully in clinically suspected endophthalmitis. The method showed a higher yield of positive cultures than the conventional method. This technique appears to have several advantages over the traditional method: it saves time, as only one medium needs to be inoculated; transportation to a laboratory is easier than in the traditional method, and there is no need to maintain a supply of fresh agar media. The use of PBCBs may be recommended as the primary method for microbiological diagnosis and is especially suitable for office settings and remote clinics.

Quality control of culture media in a microbiology laboratory.

The nature of reporting of a microbiology laboratory depends upon the quality of the culture media used. Quality of media directly affects the observations and inferences drawn from the cultural characteristics of microorganisms. Checking of different parameters of media such as growth supporting characteristics, physical characteristics, gel strength and batch contamination can help to assess their quality. There are different methods to check all these parameters systematically. The meticulous performance of quality control of culture media can assure precision in reporting.

Microbiología en endocarditis infecciosa: análisis crítico de la bacteriología en Chile: el desafío de los hemocultivos negativos / Microbiology in infectious endocarditis: critical analysis of bacteriology in Chile: the challenge of the negative hemocultures

El diagnóstico etiológico de la EI (Endocarditis Infecciosa) se realiza fundamentalmente con el hemocultivo, el cual permite conocer el agente etiológico y su patrón de susceptibilidad para una adecuada antibioterapia. Esta técnica tradicionalmente manual, se automatizó en la década de los ochenta, logrando ampliar el espectro de agentes aislados, acortar los tiempos de detección y disminuir las tasas de contaminación. Desafortunadamente el acceso a esta tecnología no es uniforme en nuestro país lo que genera gran variabilidad en el rendimiento de los hemocultivos. Las EI con hemocultivos negativos representan un gran desafío clínico y microbiológico: el uso de antimicrobianos constituye la primera causa de hemocultivos negativos, sin embargo existen microorganismos fastidiosos o de nulo crecimiento que deben sospecharse en estos casos y con una buena comunicación con el laboratorio, evaluar el empleo de otras herramientas diagnósticas, como serología y PCR del hemocultivo y/o de vegetaciones en busca de ADN bacteriano, tecnología que ya se está evaluando en nuestro país. Por otro lado, el estudio microbiológico e histopatológico de válvulas removidas por EI debe ser obligatorio y constituye también un aporte, con resultados positivos aun bajo antibioterapia, dadas las dificultades para erradicar un microorganismo a ese nivel. Mejorar el diagnóstico etiológico de EI en Chile requiere educación, fundamentalmente para disminuir el empleo indiscriminado de antimicrobianos y cumplir con las normas de toma de muestras de hemocultivos. Además, implementar sistemas automatizados en todo el país constituiría un enorme avance, con beneficios innegables en el diagnóstico microbiológico.

single step method for rapid isolation and identification of Mycoplasma pneumoniae

A simple monophasic-diphasic culture set-up was developed to provide efficient isolation and identification of Mycoplasma pneumoniae. The set-up consisted of a slant medium, the bottom covered with 1 mL of broth, establishing a diphasic solid-liquid environment at the bottom of the test tube surmounted by a monophasic solid one. The specimen was directly inoculated into the liquid phase, mixed, and tilted once or twice to cover the upper slanted portion prior to incubation. The method had several advantages over other techniques including rapid results, elimination of transport medium, and use of two separate environments to accomplish both the detection and identification of M. pneumoniae

Métodos de conservación de cultivos bacterianos / Bacterial culture preservation methods

Se dispone de una amplia variedad de técnicas para la preservación de cultivos bacteriano. Sin embargo puede resultar dificultoso elegir el método apropiado para la preservación de una determinada cepa, que no sólo asegure la viabilidad sino que también preserve el genotipo y en consecuencia, las características particulares de la misma. Este trabajo provee un compendio de los aspectos más importantes de los métodos disponibles, con referencias a investigaciones y aplicaciones recientes

Evaluation of different media used for recovery of campylobacter spp

The capacity of five Campylobacter selective plating media [Campylobacter blood free, Preston, Blood agar plus Blasser-Wang supp., Brucella agar plus Blasser-Wang supp. and Columbia agar plus Blasser-Wang supp.] and 3 selective enrichment broth [brain heart infusion broth either supplemented with Preston or Blasser-Wang or cefoperazone] were tested for their sensitivity to recover the different Campylobacter biotypes [C. jejune and C. fetus] from artificially contaminated milk. Columbia agar with Blasser-Wang supplement proved to be the best selective medium for isolation of Campylobacters. While Campylobacter blood free was the poorest medium. The confirmed technique of enriched milk samples in BHI broth plus cefoperazone [32 mg/L] and its incubation microaerobically at 42C for 2 days, followed by plating on Columbia agar selective basal medium with Blasser-Wang supplement and incubated for 2 days at 42C proved to be more productive for recovery of Campylobacters from contaminated materials

Medios de cultivos caseros para la identificación de hongos de interés médico / The home-made culture media for the identification of medically important fungi

Se presenta el estudio de la utilidad de tres medios de cultivo caseros para la identificación de hongos de interés médico. El medio agar-banana (banana-avena y leche) y el agar-V8 (V8 y levadura) fueron empleados para el estudio macro y micromorfológico de una diversidad de especies de hongos y actinomicetos (49 y 4 respectivamente). El tercer medio, agar-leche (agar con 1 por ciento de leche y tween 80), fue utilizado para la formación de tubos germinativos, seudomicelios y clamidosporos de C. albicans y sus hallazgos fueron comparados con los obtenidos en agar-harina de maíz y suero estéril. Los resultados observados indican que, tanto el agar-banana como el agar-V8 son útiles para el desarrollo de un amplio espectro de hongos patógenos y que en ambos la esporulación es rápida permitiendo la identificación de las especies estudiadas a los 7 días de incubación a 28§C. El agar-banana produjo un buen número de cleistotecios y el agar-V8 resultó muy eficaz para mostrar ascos en las levaduras perfectas. El agar-leche fue superior al agar-harina de maíz para la formación de clamidosporos de C.albicans

Aislamiento de corynebacterium urealyticum de muestras clínicas: identificación bioquímica y sensibilidad a 10 antibióticos / Corynebacterium urealyticum isolation from clinical specimens: biochemical identification and sensibility to ten antibiotics

Fueron estudiadas 21 cepas de Corynebacterium urealyticum aisladas de distintos pacientes: 19 (90,5 por ciento) de infecciones urinarias, 1 de un cálculo renal y la restante de un absceso retroperitoneal. Sobre 15 cepas tomadas al azar, se determinó la CIM de 10 antibióticos: vancomicina, ciprofloxacina, rifampicina, penicilina, cefalotina, ceftriaxona, imipenem, amikacina, gentamicina y cotrimoxazol. En 18 (85,7 ciento por ciento) pacientes los cultivos fueron monomicrobianos y en 3 (14,3 por ciento), asociados a otras bacterias. La totalidad de las cepas fueron catalasa y ureasa positivas. Ninguna redujo los nitratos ni fermentó los hidratos de carbono. Las 15 cepas sobre las que se determinó la CIM fueron totalmente sensibles a vancomicina y parcialmente sensibles a ciprofloxacina y rifampicina. La producción de ureasa y la no fermentación de la glucosa, asociadas a la multirresistencia, conforman elementos de inestimable valor para la identificación presuntiva del C. urealyticum

Una técnica para preparaciones permanentes de levaduras / A technique for permanent slides of yeasts

Modificando una técnica indicada por Arta-gaveitía-Allende para microcultivos de levaduras, se obtuvieron entre lamina y laminilla, preparaciones teñidas permanentes que mantienen su integridad por largo tiempo

Variación en cepas de microsporum canis bodin, aisladas de infecciones humanas en áreas geográficas limitadas / Variation in microsporum canis bodin strains isolated from human infections in limited geographic areas

En una área geografica que incluye la ciudad de Santiago y Valparaíso, analizamos 31 cepas de Microsporum canis aisladas desde niños prepuberes con dermatofitosis (24 desde cuero cabelludo y 7 de piel), con la finalidad de analizar su variación fenética en 5 medios de cultivo sólidos (Sabouraud, Lactritmel, Papa dextrosa, Czapek y Nitrito sucrosa agar). Se seleccionaron 19 características macro y microscópicas, 9 de ellas consideradas de valor taxonómico primario, las que se estudiaron en todos los medios a los 14 días de incubación a 27ºC, a partir de subcultivos provenientes de su primer aislamiento clínico. Los datos obtenidos de los 3 primeros medios de cultivos básicos, se analizaron estadísticamente. Solo se observaron coincidencias en estos tres medios, al considerar cada parámetro por separado, principalmente: presencia de microconidios (8/31), forma del macroconidio (10/31) y color del reverso (23/31). El medio que más discrimina es el Sabouraud, al producir las mayores diferencias entre cepas; en segundo lugar Papa dextrosa y, finalmente Lactritmel, que por su menor discriminación permite obtener más agrupaciones. En agar nitrito de sodio, se apareció la conidiogénesis más estable. Se determinó la presencia de 2 cepas de Microsporum canis sub. sp. pulverulentum, situación no registrada anteriormente en nuestro medio ambiente

Micromorfología de algunas especies de fusarium en PDA modificado III / Micromorphology of some fusarium species in modified PDA III

Se estudia el comportamiento de 20 cepas de Fusarium pertenecientes a 9 especies, aisladas de diversos ambientes (suelo, material clínico, alimentos y vegetales), mediante sus características macroscópicas de cultivo en PDA (standard) y su micromorfología en microcultivos en lámina en PDA modificado con 5 g/l de dextrosa, 4 g/l de KCL y 0,002 g/l de Dichlorán. Esta última metodología permitió observar las principales características microscópicas tales como: clamidio, micro, meso y macroconidios, además de sus celulas conidiógenas (mono, polifiálides y fiálides poliblásticas. Esto permitió la identificación tentativa o final de las cepas estudiadas y la confección de una clave. Las cepas estables en la producción de microestructuras fueron: F. avenaceum, F. chlamydosporum, F. sambucinum y F. solani

A comparison of three media for isolation of Nocardia species from clinical specimens.

The study was carried out to compare the efficacy of three media namely Modified Thayer Martin medium, McClung's carbon free broth with paraffin bait and paraffin agar in isolating Nocardia species from clinical specimens. Two hundred and seventy six clinical specimens from 245 cases were studied which included cases of bronchopulmonary and systemic infections and cases of mycetoma. Paraffin agar was found to be an inexpensive and selective medium for isolation of Nocardia species when compared with Modified Thayer Martin medium and paraffin bait techniques.

Histochemical stainings, biological cultures and therapeutic responses of granulomatous lymphadenitis in Ramathibodi Hospital-prospective study of 57 cases.

The study was designed to delineate the etiology of granulomatous lymphadenitis which is one of the most common lesions encountered in our routine surgical pathology practice. Fifty-seven lymph nodes diagnosed histopathologically as granulomatous lymphadenitis were cultured and stained by special histochemical stains for tuberculosis, fungus, anaerobic and aerobic bacteria. M.tuberculosis was isolated in 60-70 per cent of lesions. The remaining 30-40 per cent of the lesions failed to demonstrate any infectious agent but most of the available follow-up cases showed satisfactory response to antituberculous drugs. Ziehl-Neelsen's stain showed very low sensitivity but excellent specificity and is still recommended for use to differentiate from other infectious agents in the areas where infectious agents are prevalent.

An effective axenic culture system for Trypanosoma brucei rhodesiense blood stream forms in vitro.

An effective axenic culture system for Trypanosoma brucei rhodesiense (ILRAD 1501) bloodstream forms is demonstrated. Bloodstream forms were continuously grown in 25 mM HEPES-buffered D-MEM supplemented with 10 microM bathocuproine sulfonate (BCS), 100 microM cysteine, and 20% heat-inactivated fetal bovine serum at 37 degrees C in vitro. At the initiation of the culture, T. b. rhodesiense bloodstream forms required the presence of 0.2 IU/ml insulin and 1 mM pyruvate, while bloodstream forms were grown in the culture medium without these supplements 4 days after initiation of the culture. Under this culture condition, T. b. rhodesiense bloodstream forms increased in number to 7 to 8 x 10(6) trypanosomes/ml, by day 4 after initiation of the culture. The trypanosomes cultured in this axenic system for 150 days were typically long and slender and retained their virulence for mice. This axenic culture system is extremely useful for in vitro cloning of T. b. rhodesiense bloodstream forms in vitro.

Growth study of a nonpathogenic strain of Leishmania donovani with different nutrients.

The studies on growth pattern of a nonpathogenic Leishmania donovani, strain UR6, in different media showed that it can be regularly cultivated amd maintained in modified Ray's Medium (Agar) and three other liquid media, namely DME Medium, Medium 199 and RPMI-1640 which are manufactured in India. The well known N.N.N. Medium provided quantitatively poorer growth in comparison to these medium. Measurement of L. donovani cell concentration by optical density in a spectrophotometer has been worked out for expressing immunochemical observations on antigens in terms of cells per mililitre.