p47phox, the phagocyte NADPH oxidase/NOX2 organizer: structure, phosphorylation and implication in diseases

Phagocytes such as neutrophils play a vital role in host defense against microbial pathogens. The anti-microbial function of neutrophils is based on the production of superoxide anion (O2(.-)), which generates other microbicidal reactive oxygen species (ROS) and release of antimicrobial peptides and proteins. The enzyme responsible for O2(.-) production is called the NADPH oxidase or respiratory burst oxidase. This multicomponent enzyme system is composed of two transmembrane proteins (p22phox and gp91phox, also called NOX2, which together form the cytochrome b(558)) and four cytosolic proteins (p47phox, p67phox, p40phox and a GTPase Rac1 or Rac2), which assemble at membrane sites upon cell activation. NADPH oxidase activation in phagocytes can be induced by a large number of soluble and particulate agents. This process is dependent on the phosphorylation of the cytosolic protein p47phox. p47phox is a 390 amino acids protein with several functional domains: one phox homology (PX) domain, two src homology 3 (SH3) domains, an auto-inhibitory region (AIR), a proline rich domain (PRR) and has several phosphorylated sites located between Ser303 and Ser379. In this review, we will describe the structure of p47phox, its phosphorylation and discuss how these events regulate NADPH oxidase activation.

Adesão de fagócitos monucleares ao conjuntivo na leishmaniose: papel de integrinas Beta sub 1, e receptores de quimiocinas / Monocuclear phagocyte-connective tissue adhesion in leishmaniasis: role of Beta sub 1-integrin and chemokine receptors

Parasitos do gênero Leishmania podem causar lesões na pele, mucosas ou vísceras. Os mecanismos que regulam o tropismo do parasito não estão bem esclarecidos, mas moléculas na superfície de fagócitos infectados podem ter um papel importante. Nosso grupo demonstrou anteriormente que a infecção por Leishmania reduz a adesão de fagócitos mononucleares ao tecido conjuntivo inflamado. Uma vez que a perda de adesão ao tecido conjuntivo é o primeiro passo para a migração celular, este fenômeno pode estar relacionado com a habilidade destas células em deixar o tecido inflamado em direção ao linfonodo drenante. Nesta dissertação, nós examinamos o papel de moléculas de adesão e de receptores de quimiocinas na perda de adesão de fagócitos mononucleares ao tecido conjuntivo inflamado. Para isso nós empregamos análises de citometria de fluxo de moléculas de adesão em fagócitos infectados com Leishmania marcada com fluorocromo. Além disso, realizamos ensaios de adesão celular e análise de expressão de RNAm para receptores de quimiocinas através de RT-PCR em tempo real. Nós observamos que a porcentagem de células infectadas (r=-0,826; P=0,003) e o número de parasitos por célula infectada (r=-0,917; P=0,028) se correlacionaram negativamente com a adesão ao tecido conjuntivo. A redução na adesão celular induzida pela infecção por Leishmania (58,7 à 75,0%; P=0,005) ocorreu tão cedo quanto duas horas após a infecção e foi mantida por pelo menos 24 horas. A infecção com apenas 0,6 parasito por célula reduziu a adesão em 27,9 a 44,6% (P<0,00l). O bloqueio na adesão celular foi mantido pela infecção por Leishmania, mas pela fagocitose de parasitos mortos (adesão celular variou de 15,2% abaixo a 24.0% acima do controle; P>0,05). A infecção por Leishmania também reduziu a adesão celular a fibronectina (54,1 a 96,2%, P<0,0l), colágeno (15,7 à 83,7%, P<0,05) ou laminina (59,1 à 82,2%, P<0,05). Não houve modulação da expressão de VLA4, VLA5, LFA-1, Mac-1, L-Selectina,...

Adecuación de la técnica de separación de heterófilos y monocitos aviares de sangre completa, utilizando gradientes discontínuos de Ficoll-Hypaque / Standardization of separation of avian heterophils and monocytes from whole blood using Ficoll-Hypaque discontinuous gradients

Se realizó la adecuación de la técnica de gradientes discontinuos de Ficoll-Hypaque, para la obtención de monocitos y heterófilos aviares puros y viables a partir sangre completa de pollos sanos de entre 8 y 9 semanas de edad. Al final de 10 repeticiones la cuenta total de monocitos obtenida fue de 0.25 X 10 6 a 0.46 X 10 6 por ml, con un porcentaje promedio de viabilidad y pureza de 97.65 ñ 1 para la primera y 95.17 ñ 0.97 para la segunda. La cuenta total de heterófilos fue de 0.41 X 10 6 a 1.15 X 10 6 por ml, con un porcentaje promedio de viabilidad y pureza de 99.4 ñ 0.4 para la primera y 96.77 ñ 1.88 para la segunda. Mediante esta técnica se pueden obtener monocitos y heterófilos viables, puros y cultivos in vitro para determinar mecanismos de quimiotaxis, fagocitosis y lisis contra bacterias

Paracoccidioidomicose na criança / Paracoccidioidomycosis in children

No presente trabalho estuda-se a Paracoccidioidomicose na criança, que tem sido assunto frequente de estudo nomeio universitário, devido a sua incidência relativamente elevada, constituindo-se, mesmo numa patologia regional de destaque. O objetivo principal foi situar a real participação da criança segundo a concepção atual da história natural da doença. Para tanto fez-se uma abrangente revisão da literatura, comparando-se os aspectos epidemiológicos, clínicos e imunopatológicos com o estudo retrospectivo dos prontuários de 30 pacientes menores de 12 anos de idade, portadores de paracoccidioidomicose, confirmada pelo encontro do parasito em exames diretos e internados em 3 hospitais de referência de Goiânia, no período de janeiro de 1970 a julho de 1990. Os dados dos prontuários foram sintetizados em 17 tabelas. Dos resultados definiram-se 3 grupos de formas clínicas: Linfático abdominal; Linfático hepatoesplênica e Linfática; dos exames específicos: no hemograma a anemia e a eosinofilia foram achados marcantes, na eletroforese de proteínas séricas a hipoalbuminemia e hiperglobulinemia às custas de gama foram evidenciadas; as sorologias e as intradermorreações foram provas que denunciaram o envolvimento do sistema imune com elevação da imunidade humoral e depleção da imunidade celular; dos exames radiológicos (torax, trânsito e enema)e ultrossonográficos do abdomen verifica-se que o pulmão é raramente comprometido dos RX do torax realizados; o trânsito intestinal detecta lesões da mucosa, sugestivas do envolvimento dos linfáticos da parede; a USG é um recurso diagnóstico não invasivo as massas intrabdominais e pode sugerir fibrose hepática

Caracterizaçäo morfológica e funcional de células aderentes de baço de camundongo / Morphological and functional characterization of adherent splenic cells of mice

A separaçäo, caracterizaçäo e ensaio funcional das células inflamatórias presentes no local de lesäo têm se tornado imperiosos no estudo de diversas doenças. Através da utilizaçäo de métodos histoquímicos para esterase e fosfatase ácida, bem como do Teste de Fagocitose e da coloraçäo pelo Giemsa, realizados nas células esplénicas de dez camundongos, foi possível se caracterizar bem os componentes do Sistema Fagocítico Mononuclear e distinguir os outros tipos de células presentes, além de permitir a quantificaçäo diferencial das mesmas