Role of heat-shock proteins in infection of human adenocarcinoma cell line MCF-7 by tumor-adapted rotavirus isolates / Papel de las proteínas de choque térmico en la infección de la línea celular de adenocarcinoma humano MCF-7 por aislados de rotavirus adaptados a tumores

Abstract Background: Viruses are being used as alternative and complementary tools for treating cancers. Oncolytic viruses exhibit tumor tropism, ability to enhance anti-tumor immunity and ability to be used in combination with conventional chemotherapy and radiotherapy. We have recently selected some rotavirus isolates which are adapted to efficiently infect and kill tumor cell lines. Aim: We tested five tumor cell-adapted rotavirus isolates for their ability to infect the human adenocarcinoma cell line MCF-7. Methods: Cell surface membrane-associated proteins mediating virus particle attachment were characterized using ELISA, immunoprecipitation, FACS analysis, and antibody blocking. Results: It was found that heat shock proteins (HSPs) such as Hsp90, Hsp70, Hsp60, and Hsp40 are expressed on the cell surface forming complexes with protein disulfide isomerase (PDI), integrin β3, and heat shock cognate protein 70 (Hsc70) in lipid raft microdomains. Interaction of rotavirus isolates with these cellular proteins was further confirmed by a competition assay and an inhibition assay involving the HSPs tested. Conclusion: Our findings suggest that the tumor cell-adapted rotavirus isolates studied here offer a promising tool for killing tumor cells, thus encouraging further research into this topic, including animal models.

Resumen Antecedentes: Los virus se utilizan como herramientas alternativas y complementarias para el tratamiento del cáncer. Los virus oncolíticos exhiben tropismo por tumores, capacidad para intensificar la inmunidad antitumoral y la capacidad para utilizarse en combinación con quimioterapia y radioterapia convencionales. Recientemente, hemos seleccionado algunos aislamientos de rotavirus que están adaptados para infectar y eliminar de manera eficiente líneas de células tumorales. Objetivo: Se ensayaron cinco aislamientos de rotavirus adaptados a células tumorales para determinar su capacidad para infectar la línea celular de adenocarcinoma humano MCF-7. Métodos: Las proteínas asociadas a la membrana de la superficie celular que median la unión de partículas de virus se caracterizaron mediante ELISA, inmunoprecipitación, análisis FACS y bloqueo de anticuerpos. Resultados: Se encontró que las proteínas de choque térmico (HSPs) como Hsp90, Hsp70, Hsp60 y Hsp40 se expresan en la superficie celular formando complejos con la proteína disulfuro isomerasa (PDI), la integrina β3 y la proteína análoga de choque térmico 70 (Hsc70) en microdominios lipídicos (rafts). La interacción de los aislamientos de rotavirus con estas proteínas celulares se confirmó adicionalmente mediante un ensayo de competición y un ensayo de inhibición que incluía las HSP ensayadas. Conclusión: Nuestros hallazgos sugieren que los aislamientos de rotavirus adaptados a las células tumorales estudiados aquí ofrecen una herramienta prometedora para eliminar las células tumorales, lo que estimula más investigaciones sobre este tema, incluidos los modelos animales.

Assessing the oncolytic potential of rotavirus on mouse myeloma cell line Sp2/0-Ag14 / Evaluación del potencial oncolítico del rotavirus en la línea celular Sp2/0-Ag14 de mieloma de ratón

Introduction: Cancer is the second leading cause of death in the United States, surpassed only by cardiovascular disease. However, cancer has now overtaken cardiovascular disease as the main cause of death in 12 countries in Western Europe. The burden of cancer is posing a major challenge to health care systems worldwide and demanding improvements in methods for cancer prevention, diagnosis, and treatment. Alternative and complementary strategies for orthodox surgery, radiotherapy, and chemotherapy need to be developed. Objective: To determine the oncolytic potential of tumor cell-adapted rotavirus in terms of their ability to infect and lysate murine myeloma Sp2/0-Ag14 cells. Materials and methods: We inoculated rotaviruses Wt1-5, WWM, TRUYO, ECwt-O, and WTEW in Sp2/0-Ag14 cells and we examined their infectious effects by immunocytochemistry, immunofluorescence, flow cytometry, and DNA fragmentation assays. Results: Rotavirus infection involved the participation of some heat shock proteins, of protein disulfide isomerase (PDI), and integrin ß3. We detected the accumulation of viral antigens within the virus-inoculated cells and in the culture medium in all the rotavirus isolates examined. The rotavirus-induced cell death mechanism in Sp2/0-Ag14 cells involved changes in cell membrane permeability, chromatin condensation, and DNA fragmentation, which were compatible with cytotoxicity and apoptosis. Conclusions: The ability of the rotavirus isolates Wt1-5, WWM, TRUYO, ECwt-O, and WTEW to infect and cause cell death of Sp2/0-Ag14 cells through mechanisms that are compatible with virus-induced apoptosis makes them potential candidates as oncolytic agents.

Introducción. El cáncer es la segunda causa de muerte en los Estados Unidos, solamente superado por la enfermedad cardiovascular. Sin embargo, el cáncer aventaja a la enfermedad cardiovascular como primera causa de muerte en doce países de Europa occidental. Se requieren mejores métodos de prevención, diagnóstico y tratamiento para afrontar el gran desafío que el cáncer representa mundialmente para los sistemas de salud, y se necesita desarrollar estrategias alternativas y complementarias a la cirugía, la radioterapia y la quimioterapia convencionales. Objetivo. Evaluar el potencial oncolítico de rotavirus adaptados a células tumorales por su capacidad para infectar y lisar células Sp2/0-Ag14 de mieloma de ratón. Materiales y métodos. Los aislamientos de rotavirus Wt1-5, WWM, TRUYO, ECwt-O y WTEW se inocularon en células Sp2/0-Ag14 y se examinaron sus efectos infecciosos mediante inmunocitoquímica, inmunofluorescencia, citometría de flujo y ensayos de fragmentación del ADN. Resultados. La infección con los rotavirus Wt1-5, WWM, TRUYO, ECwt-O y WTEW implicó la participación de algunas proteínas de choque térmico, la proteína disulfuro isomerasa y la integrina ß3. La acumulación de antígenos virales intracelulares y extracelulares se detectó en todos los virus utilizados. Los mecanismos de muerte inducidos por los rotavirus en células Sp2/0-Ag14 indujeron cambios en la permeabilidad de la membrana celular, la condensación de cromatina y la fragmentación de ADN, los cuales fueron compatibles con citotoxicidad y apoptosis. Conclusiones. La capacidad de los rotavirus estudiados para infectar y causar la muerte de células Sp2/0-Ag14 mediante mecanismos compatibles con la apoptosis inducida viralmente los convierte en candidatos potenciales para ser utilizados como agentes oncolíticos.

Virus de Zika: se expande su culpabilidad por asociación / Zika virus: Growing guilt from association

The Zika virus (ZIKV) is part of the Flaviviridae family and is transmitted by mosquitoes of the Aedes genus, as is the case with other members of that family, including the dengue virus (DENV), the yellow fever virus (YFV), the Japanese encephalitis virus (JEV), and the Western Nile virus (WNV). The ZIKV genome consists of an RNA molecule (ribonucleic acid) that encodes for a polyprotein which, following processing, results in the production of three structural proteins (C, prM and E) and seven non-structural proteins (NS). Studies about its molecular evolution point to three main ZIKV lineages: one from Asia and two from Africa. Recent studies have shown that it has undergone several recombination events since it emerged in Uganda early in the 20th century, and then after it moved towards Western Africa and Asia. Phylogenetic tree analyses have shown that the Surinam ZIKV strains belong to the Asian genotype and are intimately related to the strain that circulated in the French Polynesia in 2014, with which they share 99.7% of the genetic information and 99.9% of their identity in the amino acid sequences that make up the protein.

Protein disulfide isomerase and heat shock cognate protein 70 interactions with rotavirus structural proteins using their purified recombinant versions / Interacciones de las proteínas disulfuro isomerasa y de choque térmico Hsc70 con proteínas estructurales recombinantes purificadas de rotavirus

Introduction. Rotavirus entry into cells seems to be mediated by sequential interactions between viral structural proteins and some cell surface molecules. However, the mechanisms by which rotavirus infects target cell are still not well understood. There is some evidence showing that rotavirus structural proteins VP5* and VP8* interact with some cell surface molecules. The availability of recombinant rotavirus structural proteins in sufficient quantity has become very important for the identification of the specific virus-cell receptor interactions during the early events of the infectious process. Objective. The aim of the present work is to perform an analysis of the interactions between recombinant rotavirus structural proteins VP5*, VP8* and VP6, and cellular proteins Hsc70 and PDI using their purified recombinant versions. Materials and methods. Rotavirus recombinant VP5* and VP8*, and cellular recombinant proteins Hsc70 and PDI were expressed in E. coli BL21(DE3) while VP6 was expressed in recombinant vaccinia virus-transfected MA104 cells. The interaction between rotavirus and cellular proteins was studied using ELISA, co-immunoprecipitation and SDS-PAGE/Western blotting analysis. Results. The optimal conditions for expression of recombinant proteins were determined and antibodies were raised against them. The findings suggested that viral proteins rVP5* and rVP6 interact with Hsc70 and PDI in vitro. These viral recombinant proteins were also found to interact with raft-associated Hsc70 in a cell culture system. The treatment of cells with either rVP6 or DLPs produced significantly inhibition of rotavirus infection. Conclusion. The results allow us to conclude that rVP5* and rVP6 interact with Hsc70 and PDI during the rotavirus infection process.

Introducción. La entrada de rotavirus a las células parece estar mediado por interacciones secuenciales entre las proteínas estructurales virales y algunas moléculas de la superficie celular. Sin embargo, los mecanismos por los cuales el rotavirus infecta la célula diana aún no se comprenden bien. Existe alguna evidencia que muestra que las proteínas estructurales de rotavirus VP5* y VP8* interactúan con algunas moléculas de la superficie celular. La disponibilidad de las proteínas estructurales de rotavirus recombinantes en cantidad suficiente se ha convertido en un aspecto importante para la identificación de las interacciones específicas de los receptores virus-célula durante los eventos tempranos del proceso infeccioso. Objetivo. El propósito del presente trabajo es realizar un análisis de las interacciones entre las proteínas estructurales de rotavirus recombinante VP5*, VP8* y VP6, y las proteínas celulares Hsc70 y PDI utilizando sus versiones recombinantes purificadas. Materiales y métodos. Las proteínas recombinantes de rotavirus VP5* y VP8* y las proteínas recombinantes celulares Hsc70 y PDI se expresaron en E. coli BL21 (DE3), mientras que VP6 se expresó en células MA104 con virus vaccinia recombinante transfectada. La interacción entre el rotavirus y las proteínas celulares se estudió mediante ELISA, co-inmunoprecipitación y SDS-PAGE/ Western. Resultados. Las condiciones óptimas para la expresión de proteínas recombinantes se determinaron y se generaron anticuerpos contra ellas. Los resultados sugirieron que las proteínas virales rVP5* y rVP6 interactúan con Hsc70 y PDI in vitro. También se encontró que éstas proteínas virales recombinantes interactúan con Hsc70 en las balsas lipídicas ("Rafts") en un cultivo celular. El tratamiento de las células, ya sea con DLP o rVP6 produjo significativamente la inhibición de la infección por rotavirus. Conclusión. Los resultados permiten concluir que rVP5 * y rVP6 interactúan con Hsc70 y PDI durante el proceso de la infección por rotavirus.

Interacción de rotavirus con la proteína disulfuro-isomerasa in vitro y en sistemas celulares / Interaction of rotavirus with protein disulfide isomerase in vitro and cell system

Introducción. La entrada del rotavirus a la célula implica un mecanismo de múltiples pasos; las proteínas virales externas interaccionan con cuatro diferentes integrinas y Hsc70. Recientemente reportamos que la infección por rotavirus disminuye cuando se bloquea la proteína disulfuro-isomerasa de la superficie celular, lo que sugiere su interacción con el rotavirus en el proceso de entrada. Objetivo. Establecer la interacción del rotavirus con la proteína disulfuro-isomerasa en un sistema in vitro utilizando la proteína aislada de hígado bovino y, en un sistema celular, utilizando vellosidades intestinales de ratón y células MA104. Materiales y métodos. Se aisló la proteína disulfuro-isomerasa a partir de un homogenizado de hígado bovino utilizando anticuerpos anti-proteína disulfuro-isomerasa acoplados a agarosa mediante enlace hidrazona. La proteína disulfuro-isomerasa purificada se examinó por SDS-PAGE y Western blot y se utilizó para estudiar su interacción in vitro con rotavirus. Esta interacción se comparó con aquella observada en células MA104 y en las vellosidades intestinales de ratón. Resultados. La proteína disulfuro-isomerasa purificada mostró homogeneidad electroforética y fue capaz de unirse a rotavirus en un sistema in vitro. La interacción proteína-rotavirus fue detectada por ELISA de captura usando la proteína disulfuro-isomerasa bovina purificada y rotavirus de las cepas RRV y silvestre ECwt. La interacción de partículas de rotavirus purificadas con la proteína disulfuro-isomerasa celular se evidenció con ELISA, usando lisado celular después de la inoculación viral. Conclusión. La interacción rotavirus-proteína disulfuro-isomerasa fue demostrada in vitro, en células MA104 y en vellosidades intestinales de ratón lactante.

Introduction. Rotavirus entry process involves a multi-step mechanism, the first of which is when the outermost viral proteins interact with four different integrins and Hsc70. Recently, rotavirus infection reportedly has been decreased after blocking cell surface protein disulfide isomerase (PDI). This suggested that this protein interacts with rotavirus during the entry process. Objectives. The aim was to establish the rotavirus-PDI interaction in an in vitro system using PDI isolated from bovine liver, and in a cell system consisting of MA104 cells and mouse small intestinal villi. Materials and methods. Protein disulfide isomerase was isolated from a bovine liver homogenate using anti-PDI antibodies coupled to agarose through hydrazone bonds. Purity of purified protein was assessed by SDS-PAGE and Western blot. The purified PDI was used to study its in vitro interaction with the rotavirus particles. This interaction was compared with that taking place in MA104 cells and small intestinal villi isolated from sucking mice ICR. Results. The purified PDI showed an electrophoretic homogeneity and was able to bind rotavirus particles in vitro. Rotavirus-PDI interaction was detected by capture ELISA using purified protein and rotavirus strains RRV and wild-type ECwt. Interaction between rotavirus particles and cellular PDI was detected by ELISA using cell lysates after virus inoculation. Conclusions. Rotavirus-PDI interaction was demonstrated in vitro as well as in MA104 cells and intestinal villi from suckling mice.

Bone resorptive activity of osteoclast-like cells generated in vitro by PEG-induced macrophage fusion

Normal bone remodeling is maintained by a balance between osteoclast and osteoblast activity, whereas defects in osteoclast activity affecting such balance result in metabolic bone disease. Macrophage-macrophage fusion leading to multinucleated osteoclasts being formed is still not well understood. Here we present PEG-induced fusion of macrophages from both U937/A and J774 cell lines and the induced differentiation and activation of osteoclast-like cells according to the expression of osteoclast markers such as tartrate resistant acid phosphatase (TRAP) and bone resorptive activity. PEG-induced macrophage fusion, during the non-confuent stage, signifcantly increased the osteoclastogenic activity of macrophages from cell lines compared to that of spontaneous cell fusion in the absence of PEG (polyethylene glycol). The results shown in this work provide evidence that cell fusion per se induces osteoclast-like activity. PEG-fused macrophage differential response to pretreatment with osteoclastogenic factors was also examined in terms of its ability to form TRAP positive multinucleated cells (TPMNC) and its resorptive activity on bovine cortical bone slices. Our work has also led to a relatively simple method regarding those previously reported involving cell co-cultures. Multinucleated osteoclast-like cells obtained by PEG-induced fusion of macrophages from cell lines could represent a suitable system for conducting biochemical studies related to basic macrophage fusion mechanisms, bone-resorption activity and the experimental search for bone disease therapeutic alternatives.

Biocombustibles, seguridad alimentaria y cultivos transgénicos / Biofuels, food security and transgenic crops

El alza mundial de precios de los alimentos está amenazando con precipitar más pobres bajo la línea de pobreza, esto probablemente se agravará por el desafío que la creciente población y el cambio climático están presentando a la seguridad alimentaria. Existe evidencia de que las actividades humanas que consumen combustibles fósiles y usan tierras están contribuyendo a las emisiones de gases de invernadero y al cambio climático global. La naturaleza agotable de las reservas de combustibles fósiles y el cambio climático están suscitando preocupaciones sobre la seguridad energética, generando interés en la utilización de energías renovables como los biocombustibles. Existen preocupaciones por la producción de biocombustibles a partir de cultivos alimenticios por la posible competencia con su utilización para alimento humano y animal. Pero los biocombustibles pueden ser producidos de otras materias primas como ligno-celulosa de pastos perennes, forestales y deshechos vegetales. El contenido energético de los biocombustibles no debe exceder la energía de los combustibles fósiles utilizados en su producción, para asegurar su sostenibilidad energética, competitividad económica y aceptación ambiental. El cambio climático y los biocombustibles están desafiando los esfuerzos de la FAO para erradicar la hambruna del mundo en la próxima década. Los cultivos utilizados actualmente en la producción de biocombustibles no han sido domesticados para este fin; la tecnología transgénica de plantas puede ofrecer una enorme contribución al mejoramiento económico y ambiental de los cultivos para biocombustibles. En el presente artículo se presentan críticamente algunas de las relaciones entre biocombustibles, seguridad alimentaria y tecnología transgénica de plantas.

Soaring global food prices are threatening to push more poor people back below the poverty line; this will probably become aggravated by the serious challenge that increasing population and climate changes are posing for food security. There is growing evidence that human activities involving fossil fuel consumption and land use are contributing to greenhouse gas emissions and consequently changing the climate worldwide. The finite nature of fossil fuel reserves is causing concern about energy security and there is a growing interest in the use of renewable energy sources such as biofuels. There is growing concern regarding the fact that biofuels are currently produced from food crops, thereby leading to an undesirable competition for their use as food and feed. Nevertheless, biofuels can be produced from other feedstocks such as lingo-cellulose from perennial grasses, forestry and vegetable waste. Biofuel energy content should not be exceeded by that of the fossil fuel invested in its production to ensure that it is energetically sustainable; however, biofuels must also be economically competitive and environmentally acceptable. Climate change and biofuels are challenging FAO efforts aimed at eradicating hunger worldwide by the next decade. Given that current crops used in biofuel production have not been domesticated for this purpose, transgenic technology can offer an enormous contribution towards improving biofuel crops' environmental and economic performance. The present paper critically presents some relevant relationships between biofuels, food security and transgenic plant technology.

Genetically modffied food crops and public health / Cultivos alimenticios genéticamente modificados y salud pública

The progress made in plant biotechnology has provided an opportunity to new food crops being developed having desirable traits for improving crop yield, reducing the use of agrochemicals and adding nutritional properties to staple crops. However, genetically modified (GM) crops have become a subject of intense debate in which opponents argue that GM crops represent a threat to individual freedom, the environment, public health and traditional economies. Despite the advances in food crop agriculture, the current world situation is still characterised by massive hunger and chronic malnutrition, representing a major public health problem. Biofortified GM crops have been considered an important and complementary strategy for delivering naturally-fortified staple foods to malnourished populations. Expert advice and public concern have led to designing strategies for assessing the potential risks involved in cultivating and consuming GM crops. The present critical review was aimed at expressing some conflicting points of view about the potential risks of GM crops for public health. It was concluded that GM food crops are no more risky than those genetically modified by conventional methods and that these GM crops might contribute towards reducing the amount of malnourished people around the world. However, all this needs to be complemented by effective political action aimed at increasing the income of people living below the poverty-line.

El progreso de la biotecnología de plantas ha hecho posible ofrecer una oportunidad para desarrollar nuevos cultivos alimenticios con características deseables para el mejoramiento de la producción, la reducción del uso de agroquímicos y la incorporación de propiedades nutricionales en cultivos básicos. No obstante, los cultivos GM se han convertido en un objeto de intenso debate, en el cual los opositores argumentan que los cultivos GM representan una amenaza para la libertad individual, el medio ambiente, la salud pública y las economías tradicionales. A pesar de los avances en la agricultura de los cultivos alimenticios, la situación actual a nivel mundial está caracterizada por una hambruna masiva y por una desnutrición crónica, lo cual constituye un importante problema de salud pública. Los cultivos GM biofortificados se han considerado como una estrategia importante y complementaria para suministrar alimentos básicos naturalmente fortificados a las poblaciones con desnutrición. Las recomendaciones de los expertos y las preocupaciones públicas han conducido al diseño de estrategias para la evaluación de los riesgos potenciales de la producción y el consumo de los cultivos GM. El objetivo de la presente revisión crítica es la exposición de algunos puntos de vista en conflicto sobre los riesgos potenciales de los cultivos GM para la salud pública. Se concluye que los cultivos alimenticios GM no son más riesgosos que aquellos modificados genéticamente con los métodos convencionales, y que estos cultivos GM podrían contribuir a la reducción de la población con desnutrición en el mundo, pero se necesita que esto sea complementado con acciones políticas efectivas dirigidas a incrementar los ingresos de la población que vive por debajo de la línea de pobreza.

Tipificacion del polimorfismo VNTR en el gen de apolipoproteina B en pacientes con enfermedad coronaria e hipercolesterolemia / Tipyfication of VNTR polymorphism in gene of apolipoproteina B for patient with coronary disease and hypercholesterolemia

La enfermedad coronaria es principal causa de morbilidad y mortalidad en el mundo. En Colombia la enfermedad coronaria, con los accidentes cerebrovasculares y la hipertensión arterial, es la segunda causa de mortalidad y discapacidad. El colesterol LDL (lipoproteína de baja densidad) elevado es factor de riesgo importante en el desarrollo de esta enfermedad. Un componente principal de las LDL es la apolipoproteína B cuyo gen contiene una región altamente polimórfica constituida por un número variable de repeticiones en tándem (VNTR). En este estudio mediante técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) se estimaron frecuencias alélicas y distribución de este polimorfismo, se establecieron diferencias específicas del polimorfismo en asociación a enfermedad coronaria e hipercolesterolemia. Se realizó estudio de casos y controles. Se evaluaron 50 pacientes con enfermedad coronaria e hipercolesterolemia y 50 individuos sanos. Para establecer diferencias en las frecuencias alélicas entre casos y controles, se utilizó el test de chi cuadrado. Se realizó regresión logística condicionada al analizar cada una de las variables consideradas en el estudio. Los resultados muestran: 1. Las frecuencias de los alelos VNTR mayores de 48 repeticiones fueron significativamente mayores en pacientes con enfermedad coronaria e hipercolesterolemia que en individuos sanos. 2. Las cifras elevadas de triglicéridos, glicemia e hipertensión arterial, contribuyeron significativamente a la manifestación de esta enfermedad. En conclusión, en la muestra analizada los alelos VNTR de mayor tamaño favorecen la aparición de enfermedad coronaria e hipercolesterolemia, pero la contribución de los niveles de glicemia, triglicéridos e hipertensión arterial representan mayor riesgo para la expresión de la patología

Criterios de ingreso a cuidado intensivo

El objetivo de las unidades de cuidado intensivo es modificar la mortalidad ocasionada por la aparición de insuficiencias agudas de uno o más sistémas orgánicos. No obstante en la práctica se manejan criterios diversos como factores ético-morales, disponibilidad de camas, ausencia de áres de monitoreo intermedio y variadas razones que ocasionan elevados costos hospitalarios. Los índices de severidad de la enfermedad como el MPM y al APACHE deben ser útiles en la etapa preadmisión y durante la estancia del paciente en la UCI a fin de racionalizar las intervenciones terapéuticas. Debe administrarse sin embargo, resultan poco prácticos cuando somos llamados para definir el ingreso a UCI. Basados en el objetivo fundamental de manejo de insuficiencias agudas y orgánicas funcionales, se estableces tres GRUPOS de admisión (GI, GII, GIII) teniendo en cuenta la patología prexistente e igualmente el nivel de APOYO (I, II, III basados en el nivel de intervenciones terapéuticas. La definición de estos criterios permite unificar la selección y manejo de los pacientes dentro de la UCI

Efecto de la expansión de volumen y de la furosemida sobre la presión arterial, la excreción renal de sodio y potasio y la osmolaridad urinaria en pacientes hipertensos esenciales / Effect of volume expansion and furosemide on arterial pressure, sodium and potasium renal excretion and urinary osmolarity in essential hypertensive patients

Se estudiaron 15 pacientes afectos de hipertension arterial esencial que se sometieron a variaciones opuestas de sobrecarga y de furosemida con el fin de clasificarlos para su posterior terapéutica. Se encontró una elevación significativa de la tensión arterial durante la expansión de volumen producida por la sobrecarga de sodio en 12 de los 15 pacientes, mientras que se observó una disminución durante el empleo de furosemida. Se explican estos hallazgos de acuerdo con los conocimientos actuales y sus implicaciones en la práctica clínica. Se analizan igualmente otros parámetros estudiados y se comprueba que la amplificación de la respuesta renal a la expansión de volumen puede ser de utilidad en la clasificación de pacientes hipertensos para su terapéutica con diuréticos