5S and 5W2H Tools Applied to Research Laboratories: Experience from Instituto Carlos Chagas - FIOCRUZ/PR for Cell Culture Practices

Abstract Good cell culture practices are a set of technical and management tools recommended for application in research and service laboratories to guarantee the traceability and reproducibility of in vitro experiments. However, most research laboratories do not have a structured quality assurance system and have difficulties organizing their workflows or even priorities in implementing acceptable laboratory practices. In this study, we applied management and quality assurance tools to define the steps necessary to implement acceptable laboratory practices in the multiuser laboratory of cell culture and establish a cell bank at the Carlos Chagas Institute FIOCRUZ-PR. Our team applied the 5W2H and 5S tools for initial diagnosis and established an action plan to implement and manage the laboratory over two years. Thereby, we defined the scope of laboratory activities, including the demand for establishing a cell bank, the supply of cell lines to internal users, user training, and quality control tests. We also mapped the main activities, establishing their flows and all the necessary documentation to ensure traceability and reproducibility. Additionally, the laboratory was organized in compliance with the 5S principles. In conclusion, using management tools, such as the 5W2H and 5S methods, is a simple and affordable method to organize and manage a cell culture laboratory and can be applied to other research laboratories.

Proliferation and differentiation of stem cells in contact with eluate from fibrin-rich plasma membrane / Proliferação e diferenciação de células-tronco em contato com eluato de membrana de fibrina

ABSTRACT Objective: To evaluate the ability of the eluate from fibrin-rich plasma (FRP) membrane to induce proliferation and differentiation of isolated human adipose-derived stem cells (ASCs) into chondrocytes. Method: FRP membranes were obtained by centrifugation of peripheral blood from two healthy donors, cut, and maintained in culture plate wells for 48 h to prepare the fibrin eluate. The SCATh were isolated from adipose tissue by collagenase digestion solution, and expanded in vitro. Cells were expanded and treated with DMEM-F12 culture, a commercial media for chondrogenic differentiation, and eluate from FRP membrane for three days, and labeled with BrdU for quantitative assessment of cell proliferation using the High-Content Operetta® imaging system. For the chondrogenic differentiation assay, the SCATh were grown in micromass for 21 days and stained with toluidine blue and aggrecan for qualitative evaluation by light microscopy. The statistical analysis was performed using ANOVA and Tukey's test. Results: There was a greater proliferation of cells treated with the eluate from FRP membrane compared to the other two treatments, where the ANOVA test showed significance (p < 0.001). The differentiation into chondrocytes was visualized by the presence of mucopolysaccharide in the matrix of the cells marked in blue toluidine and aggrecan. Conclusions: Treatment with eluate from FRP membrane stimulated cell proliferation and induced differentiation of the stem cells into chondrocytes, suggesting a potential application of FRP membranes in hyaline cartilage regeneration therapies.

RESUMO Objetivo: Avaliar a capacidade do eluato proveniente da membrana de plasma rico em fibrina (PRF) de induzir proliferação e diferenciação das células-tronco humanas isoladas de tecido adiposo (CTDAh) em condrócitos. Método: As membranas de PRF foram obtidas por centrifugação de sangue periférico de dois indivíduos saudáveis, cortadas, colocadas em poços de placa de cultivo por 48 h para obtenção do eluato de fibrina. As CTDAh foram isoladas do tecido adiposo por digestão com solução de colagenase e expandidas in vitro. As células foram expandidas e tratadas com meio de cultivo DMEM-F12, meio comercial para diferenciação condrocítica, e eluato de fibrina durante três dias e marcadas com BrdU para avaliação quantitativa da proliferação celular com o uso do sistema de imagens High-Content Operetta®. Para o ensaio de diferenciação condrogênica, as CTDAh foram cultivadas em micromassa por 21 dias e coradas com azul de toluidina e agrecana para avaliação qualitativa em microscópio óptico. As avaliações estatísticas foram feitas por meio dos testes Anova e Tukey. Resultados: Houve uma maior proliferação das células tratadas com o eluato de fibrina comparativamente com os outros dois tratamentos, nos quais o teste Anova apontou significância (p < 0,001). A diferenciação em condrócitos foi visualizada pela presença de mucopolissacarídeos na matriz das células tratadas com meio de diferenciação ou eluato e marcação positiva para agrecana. Conclusões: O tratamento com o eluato da membrana de fibrina estimulou a proliferação celular e induziu a diferenciação das células-tronco em condrócitos, o que sugere uma potencial aplicação da membrana de PRF nas terapias de regeneração de cartilagem hialina.

Função executiva de idosos institucionalizados e comunitários: relação com capacidades cognitivas e funcionais / Executive function of the elderly in institutions: relationship with cognitive and functional abilities

O objetivo do estudo é caracterizar o perfil demográfico e capacidades cognitivas e funcionais de idosos institucionalizados e não institucionalizados, verificando a associação com a função executiva. A amostra incluiu 25 indivíduos comunitários (20 mulheres; 69,52±8,99 anos) e 26 institucionalizados (11 mulheres; 74,69±7,94 anos; 47,03±58,31 meses de institucionalização). O grupo institucionalizado apresentou escores inferiores nas avaliações cognitivas e funcionais (ρ<0,001; teste de Mann-Wihtney). A função executiva, avaliada pela Bateria de Avaliação Frontal, apresentou correlação positiva (teste de Spearman) com Fluência Verbal (ρ=0,818), Mini-exame do Estado Mental (ρ=0,649), Índice de Barthel (ρ=0,468) e Pfeffer (ρ=-0,70) no grupo institucionalizado e apenas com a fluência verbal (ρ=0,523) no grupo comunitário. O maior comprometimento da função executiva no grupo institucionalizado pode estar relacionado à maior dependência funcional e declínio cognitivo observado.

The demographic profile and cognitive and functional abilities of elderly people in institutions or not are characterized and their association with the executive function verified. Sample comprises 25 elderly people in homes (20 females; 69,52±8,99 years) and 26 institutionalized (11 females; 74,69±7,94 years; 47,03±58,31 years in the institution). The institutionalized group had lower scores in cognitive and functional assessments (ρ<0,001; Mann-Withney Test). The executive function evaluated by the Frontal Assessment Battery showed a positive co-relationship (Spearman´s Test with Verbal Fluency (ρ=0,818), Mental State Mini-test (ρ=0,649), Barthel´s Index (ρ=0,468) and Pfeffer´s Index (ρ=-0,70) in the institutionalized group and only with verbal fluency (ρ=0,523) in the home group. Highest impairment of the executive function in the institutionalized group may be related to greater functional dependence and decreasing cognitive rate.

Efetividade de uma intervenção fisioterapêutica cognitivo-motora em idosos institucionalizados com comprometimento cognitivo leve e demência leve / Effectiveness of a cognitive-motorphysiotherapeutical therapy intervention in institutionalized older adults with mild cognitive impairment and mild dementia

Resumo O objetivo desta pesquisa foi verificar a efetividade de quatro meses de intervenção fisioterapêutica cognitivo-motora, com frequência semanal única, na cognição, mobilidade e independência funcional de idosos com comprometimento cognitivo e demência leves residentes em instituição. Sob um ensaio clínico controlado, 15 sujeitos foram alocados entre grupo experimental (GE) e controle (GC). Para avaliação dos sujeitos foram aplicados os instrumentos: Mini-Exame do Estado Mental, Teste de Fluência Verbal e Bateria de Avaliação Frontal para análise das funções cognitivas; Escala de Equilíbrio Funcional de Berg e Teste Timed Up and Go para verificação da mobilidade, e Escala de Barthel e Índice de Pfeffer para mensuração da independência funcional. O procedimento estatístico envolveu a aplicação do teste t de Student, sob significância de 5%. Quanto aos resultados, o GE apresentou melhor desempenho apenas nos testes relacionados à mobilidade ao final da intervenção (p < 0,05). A intervenção proposta apresentou eficácia sobre a mobilidade, mas não na cognição e independência funcional. O curto período de tempo e a baixa frequência semanal podem estar relacionados aos resultados obtidos.

Abstract The aim of this study was to investigate the effectiveness of four months of cognitive-motor physiotherapy intervention, with a single weekly visit, on cognitive function, mobility and functional independence of institutionalized elderly individuals with mild cognitive impairment and mild dementia. In a controlled clinical trial, 15 subjects were allocated to experimental and control groups. Regarding the assessment of the subjects the following instruments were applied: Mini-Mental State Examination, Clinical Dementia Rating Scale, Verbal Fluency Test and Frontal Assessment Battery for analyzing cognitive functions; Berg Balance Scale and Timed Up and Go Test to verify mobility, and; Barthel Scale and Pfeffer Index for measurement of functional independence. The statistical procedures involved the application of Student’s t-test with a 5% significance threshold. With respect to the results, the experimental group performed better only in mobility-related tests at the end of the intervention (p < 0.05). The proposed intervention showed efficacy on mobility, but not on cognition and functional independence. The short period of time and low weekly basis may be related to the results obtained.

Prevalência de incontinência urinária entre idosos institucionalizados e sua relação com o estado mental, independência funcional e comorbidades associadas / Prevalence of urinary incontinence among institutionalized elderly and its relationship to mental state, functional independence, and associated comorbidities

Incontinência urinária é definida como a perda involuntária de urina pela uretra podendo causar diversos problemas sociais e higiênicos, além de alterações que comprometem o convívio social como depressão, vergonha e isolamento, tendo maior prevalência nas mulheres do que nos homens. Objetivos: Determinar a prevalência de incontinência urinária em uma amostra de idosos institucionalizados e analisar sua relação com características sociodemográficas, comorbidades associadas, função cognitiva e independência funcional. Métodos: Estudo transversal, descritivo e exploratório. Participaram 27 idosos que atenderam aos critérios de inclusão, de ambos os sexos, residentes em uma instituição de longa permanência. Prevalência foi determinada pela porcentagem de idosos que apresentaram incontinência urinária; características sociodemográficas e comorbidades avaliadas através de uma ficha de anamnese padrão, revisados com os dados dos prontuários; função cognitiva avaliada através do Mini-Exame do Estado Mental e independência funcional através da escala de Barthel modificada. Comparação entre grupos - teste t de Student e associações - teste do qui-quadrado. Resultados: Nove idosos (33,33%) apresentaram incontinência urinária. Houve associação entre sexo e incontinência urinária, com prevalência maior para o sexo feminino (p = 0,029). A incontinência urinária possui associação com a baixa escolaridade (p = 0,014), o tempo de admissão na instituição (p = 0,004), classificação funcional (p = 0,003) e déficit cognitivo (p = 0,001). Conclusão: Incontinência urinária é frequente em idosos residentes em instituições de longa permanência, com maior prevalência no sexo feminino, havendo relação com a baixa escolaridade, maior tempo de admissão, maior dependência na realização das atividades e pior déficit cognitivo.

Urinary incontinence is defined as the involuntary loss of urine through the urethra, which may cause many social and hygienic problems and changes that compromise social life such as depression, shame, and isolation, with higher prevalence in women than in men. Objectives: To determine the prevalence of urinary incontinence in a sample of institutionalized elderly and analyze its relationship with sociodemographic characteristics, comorbidities, cognitive function, and functional independence. Methods: Cross-sectional, descriptive, and exploratory study. It included 27 seniors of both genders, living in a long-term care facility who met the inclusion criteria. Prevalence was determined by the percentage of elderly patients with urinary incontinence; sociodemographic characteristics and comorbidities were evaluated through a standard history record, reviewed with data from medical records; cognitive function was assessed using the Mini-Mental State Examination, and functional independence was assessed using the modified Barthel scale, while the comparison between groups was made through the Student t test and the associations, through the chi-square test. Results: Nine subjects (33.33%) had urinary incontinence. There was an association between gender and urinary incontinence, with higher prevalence for females (p = 0.029). Urinary incontinence was associated with low educational level (p = 0.014), time at the institution (p = 0.004), functional classification (p = 0.003), and cognitive impairment (p = 0.001). Conclusion: Urinary incontinence is common in elderly residents in long term care facilities, with a higher prevalence in women and was associated with low education, longer time at the institution, greater dependence in performing activities, and greater cognitive impairment.

Alterações hepáticas em trabalhadores do refino de petróleo / Hepatic alterations among oil refinery workers

São descritas características clínicas, epidemiológicas e laboratoriais de 548 casos com alterações hepáticas laboratoriais em trabalhadores de uma refinaria de petróleo na Bahia, Brasil. Os "casos" foram definidos por uma alteração acima de 10por cento do valor de referência nas dosagens de aspartato-amino-transferase (AST), alanina-amino-transferase (ALT), gama-glutamiltranspeptidase (GGT), bilirrubina direta (BD), bilirrubina indireta (BI) ou fosfatase alcalina (FA). A alteração de GGT isoladamente e a combinação GGT + ALT foram as mais freqüentes, encontradas em 72,4por cento e 41,4por cento do grupo, respectivamente. Cerca de 30por cento apresentaram elevação de GGT+ALT+AST. A média de idade foi de 38,5 mais ou menos 7,2 anos e 92,5por cento trabalhavam em setores de produção; cerca de 78,3por cento referiram exposição a produtos químicos e 36,5por cento tinham mais de 20 anos de trabalho na refinaria. Consumo de álcool foi relatado por 90,5por cento dos casos e o teste C.A.G.E. foi positivo para 15,7por cento do grupo estudado. Foram anotados os antecedentes médicos referidos de hepatite (8,6por cento), icterícia (7,1por cento), esquistossomose mansoni (23,2por cento), transfusão sanguínea (1,4por cento), obesidade (30,1por cento) e uso diário ou freqüente de álcool (17,8por cento). Nenhuma dessas características foi referida por 26,0por cento dos trabalhadores, o que sugere a possibilidade de etiologias ocupacionais para as alterações hepáticas.

Características dos linfomas não-Hodgkin em Salvador e região circunvizinha, Bahia, Brasil / Characteristics of the non-Hodgkin's lymphomas in Salvador City and vicinity, Bahia, Brazil

Os linfomas não-Hodgkin (LNH)conformam um grupo de tumores com grande variedade de tipos histológicos. O objetivo deste estudo é o de descrever esses tumores, em Salvador e região circunvizinha, Estado da Bahia, Brasil. Foram selecionados 109 indivíduos do sexo masculino, em todos os serviços de Oncologia da região do estudo entre 1990 e 1996. Utilizou-se o software EPI-INFO para a análise descritiva dos dados. Os pacientes tinham média de idade de 53 anos, variando de 25 a 88 anos, e mais de três quartos tinham menos de 65 anos. Os LNH localizaram-se preferencialmente nos gânglios linfáticos, e entre os extraganglionares, no trato gastrointestinal (17,6por cento). Observou-se uma forte predominância do padrão difuso (78,9por cento). A sobrevida média foi de 17 meses para todos os LNH, 24 meses para o tipo linfocítico e 12 meses para os demais tipos celulares, 25 meses para os de baixo grau 15 meses para os de graus intermediário e alto. O principal achado desta investigação foi a grande proporção de casos de LNH com padrão difuso. Chama-se a atenção para o fato de que é provável que diferentes subgrupos da doença sejam causados por agentes etiológicos distintos, segundo a literatura científica, e que as diferenças na apresentação da doença e da sobrevida formam uma evidência de que os ganglionares e extraganglionares são entidades distintas. Estes aspectos levantam a necessidade da realização de estudos que explorem estas diferenças no que se refere aos fatores de risco.

O cumprimento da legislação referente à saúde do trabalhador no pólo petroquímico de Camaçari: a resolução CEPRAM 620/1992 / The legislation compliance of the workers´ health at Pólo Petroquímico de Camaçari: CEPRAM 620/1992 resolution

Em 21 de julho de 1992, o Conselho Estadual de proteção Ambiental (CEPRAM)publicou a Resolução número 620, autorizando a emissão de Licença de Operação da Ampliação do Pólo Petroquímico de Camaçari, válida por cinco anos. Os condicionamentos determinados por esta Resolução visavam a preservação do ambiente e da saúde do trabalhador. Este trabalho objetivou avaliar o cumprimento da Resolução CEPRAM número 620, quanto a seus condicionamentos referentes à saúde do trabalhador. A análise do material coletado junto aos órgãos estaduais e empresas constatou um precário nível de cumprimento de diversos condicionamentos previstos na Resolução, por parte das empresas, do Sistema Estadual de Saúde e pelo órgão ambiental do Estado, o Centro de Recursos Ambientais.

Anemia, deficiência de ferro e intoxicaçäo pelo chumbo em crianças de uma creche de Salvador, Bahia / Anemia, iron deficiency and lead poisoning in children from a nursey at Salvador, Bahia

Foi objetivo dessa pesquisa determinar os níveis de anemia, deficiência de ferro e chumbo no sangue de crianças de uma creche de Salvador, Bahia. Para isto, foram realizados dois estudos de prevalência em crianças de 2 a 39 meses, da creche, em 1993 (=106) e em 1995 (n=129). A anemia foi avaliada pelo microhematócrito e a deficiência de ferro, pela concentraçäo de zinco protoporfirina (ZPP) em sangue total. A concentraçäo de chumbo no sangue (PbS) foi determinada somente em 1995, por espectrofotometria de absorçäo atômica. De 1993 para 1995, a prevalência de anemia aumentou em 48,1 por cento para 82,2 por cento e a deficiência de ferro diminuiu de 67,0 por cento para 34,9 por cento. Nas 27 crianças presentes nos dois pontos do tempo, a anemia diminuiu de 70,4 por cento para 59,3 por cento no período e a deficiência de ferro, de 77,8 por cento para 7,4 por cento. O PbS médio estava elevado (10,7ñ7,9µg/dL); valores superiores a 20µg/dL foram encontrados em 11,6 por cento das 129 crianças. Os níveis de PbS näo estavam estatisticamente associados com os de microhematócrito nem com os de ZPP. Foram encontrados altos níveis de anemia, deficiência de ferro e de chumbo no sangue de crianças da creche. Outras etiologia, que näo deficiência de ferro ou entoxicaçäo pelo chumbo podem estar contribuindo para manter elevada a prevalência da anemia, ainda que de intensidade leve ou moderada.