Importancia diagnóstica de fracciones antigénicas de fasciola hepática separadas por cromatografía de exclusión por tamaño molecular y analizadas mediante inmunoelectrotransferencia en condiciones nativa y de denaturación-reducción / Diagnostic importance of fasciola hepatica antigenic fractions separated by molecular sieving chromatography and analyzed by immune electrotransfer blot under native and denatured-reduction conditions

Mediante cromatografía de exclusión por tamaño molecular, se analizaron los antígenos de excreción-secreción (E-S) y somáticos (S) de fasciola hepática con el fin de caracterizar y comparar mediante electroforesis en condición nativa (PAGE) y de denaturación-reducción (SDS-PAGE) y posterior inmuno electrotransferencia (IET), las fracciones de importancia diagnóstica. Se emplearon sueros de ovinos en la etapa prepatente y patente de la infección con F. hepática,, así como de ovinos sanos y con otras parasitosis, provenientes de la XII Región (libre de la infección). Del análisis cromatográfico de los antígenos E-S y S se obtuvieron cinco peaks, identificándose en los eluidos del cuarto, una fracción de una M estimada de 30 kDa, según el análisis mediante PAGE e IET. Ella demostró ser de relevancia diagnóstica ya que fue reconocida sólo por los sueros de los ovinos infectados, tanto en la etapa prepatente como patente de la infección. En forma similar, la respectiva SDS-PAGE de los mismos eluídos de los antígenos E-S, permitió detectar una banda de reconocimiento de M aproximada a 30 kDa y otra menor a 14 kDa. En el caso de las fracciones S, además de observar estas dos bandas, se identificó otra de alrededor de 22 kDa. La IET respectiva, logró determinar posteriormente, que todas estas fracciones fueron importantes desde el punto de vista diagnóstico, ya que sólo fueron reconocidas por los sueros de los ovinos infectados, independiente de la etapa de la infección. Como no hubo diferencias en el reconocimiento de los anticuerpos de los animales con distomatosis, en condiciones de denaturación-reducción y nativa, se podría concluir que los epitopos que participan en los complejos antígeno-anticuerpo serían predominantemente de tipo secuencial (no conformacional), ya que al ser tratados con SDS y 2-ME no fueron funcionalmente alterados

Evaluación inmunorradiométrica de orina humana y murina como especímenes para la detección de antígenos de trypanosoma cruzi / Immunoradiometric evaluation of human and murine urine as specimens for the detection of trypanosoma cruzi antigens

En orina de ratones, infectados en forma aguda experimental con la cepa Tulahuén de T cruzi, se detectó señales radioautográficas en inmunodot, desarrollado con suero humano chagásico. En inmunoelectrotransferencia (IET) de orina murina concentrada, desarrollada con suero de humanos seropositivos, se detectó bandas de pesos moleculares 66, 56 (también presentes en orinas normales), 19, 12, 10 y 8 kDa. En orina de humanos seropositivos, sometida a IET contra una dilusión adecuada de sueros de estos mismos individuos se detectó bandas de 66, 56 (también presentes en orinas normales), 87, 46, 36 y 26 kDa. Hubo diferencias importantes en relación al número de éstos polipéptidos presentes en cada muestra. Curiosamente, si todos estos polipéptidos urinarios se enfrentan en IET a sueros humanos normales (seronegativos para T cruzi), son detectados en grado variable. este problema, a pesar de la sensibilidad de los ensayos usados y de la extensiva concentración a que se sometió los especímenes, cuestiona seriamente la especificidad del método, por lo cual el uso de orina como especímen para el diagnóstico expedito de Chagas, experimental y humano, no parece ser muy promisorio

TC45, un antígeno inmunogenéticamente definido de trypanosoma cruzi: estrategias cromatográficas para su purificación / TC45, an inmunogenetically defined trypanosoma cruzi antigen: chromatographic strategies for its purification

Se describen tres protocolos para la purificación, mediante cromatografía de alta presión (FPLC), de Tc45, un antígeno inmunogenéticamente definido de T. cruzi. Dos protocolos implicaron separaciones por tamaño molecular y uno por intercambio iónico. La presencia de Tc45 en las fracciones obtenidas fue monitoreada con sueros anti T. cruzi generados en dos cepas congénitas de ratones (A.SW/A.CA) y en conejos. Aunque en las tres cromatografías se lograron grados importantes de purificación, el intercambio iónico dio los mejores resultados, al entregar una fracción que presentó una sola banda en inmunoelectrotransferencia, monitoreada con un suero de conejo poliespecífico. La metodología descrita tiene potencial para ser escalada y generar cantidades adecuadas de Tc45 para ser usado en ensayos de protección activa, secuenciación y obtención de anticuerpos monoclonales