Infección experimental en ovinos con el virus de leucosis bovina: dosis mínima de células BLV-FLK y virus libre de células, y actividad neutralizante de anticuerpos naturales / Experimental infection of sheep with Bovine leukemia virus (BLV): Minimum dose of BLV-FLK cells and cell-free BLV and neutralization activity of natural antibodies

Abstract Bovine leukemia virus (BLV) is an important cattle pathogen that causes major economic losses worldwide, especially in dairy farms. The use of animal models provides valuable insight into the pathogenesis of viral infections. Experimental infections of sheep have been conducted using blood from BLV-infected cattle, infectious BLV molecular clones or tumor-derived cells. The Fetal Lamb Kidney cell line, persistently infected with BLV (FLK-BLV), is one of the most commonly used long-term culture available for the permanent production of virus. FLK-BLV cells or the viral particles obtained from the cell-free culture supernatant could be used as a source of provirus or virus to experimentally infect sheep. In this report, we aimed to determine the minimum amount of FLK-BLV cells or cell-free supernatant containing BLV needed to produce infection in sheep. We also evaluated the amount of antibodies obtained from a naturally-infected cow required to neutralize this infection. We observed that both sheep experimentally inoculated with 5000 FLK-BLV cells became infected, as well as one of the sheep receiving 500 FLK-BLV cells. None of the animals inoculated with 50 FLK-BLV cells showed evidence of infection. The cell-free FLK-BLV supernatant proved to be infective in sheep up to a 1:1000 dilution. Specific BLV antibodies showed neutralizing activity as none of the sheep became infected. Conversely, the animals receiving a BLV-negative serum showed signs of BLV infection. These results contribute to the optimization of a sheep bioassay which could be useful to further characterize BLV infection.

Resumen El virus de la leucosis bovina (bovine leukemia virus [BLV]) es un importante agente patógeno del ganado que causa importantes pérdidas económicas en todo el mundo, especialmente en los rodeos lecheros. El uso de modelos animales proporciona información valiosa sobre la patogénesis de las infecciones virales. Se realizaron infecciones experimentales en ovejas usando sangre de bovinos infectados con BLV, clones moleculares de BLV infecciosos o células derivadas de tumores. La línea celular Fetal Lamb Kidney, persistentemente infectada con el BLV (FLK-BLV), es uno de los cultivos a largo plazo más utilizados para la producción permanente de virus. Las células FLK-BLV o las partículas virales obtenidas del sobrenadante del cultivo libre de células podrían usarse como fuente de provirus o de virus para infectar experimentalmente ovejas. En este trabajo, nuestro objetivo fue determinar la cantidad mínima de células FLK-BLV o de sobrenadante libre de células que contiene BLV necesaria para producir infección en ovejas. También evaluamos la cantidad de anticuerpos bovinos anti-BLV necesaria para neutralizar la infección. Observamos que las dos ovejas inoculadas experimentalmente con 5000 células FLK-BLV se infectaron, y que una de las dos ovejas que recibieron 500 células FLK-BLV se infectó. Ninguno de los animales inoculados con 50 células FLK-BLV mostró evidencia de infección. El sobrenadante FLK-BLV libre de células demostró ser infectivo en ovejas hasta la dilución 1:1000. Los anticuerpos BLV específicos mostraron actividad neutralizante, ya que ninguna de las ovejas se infectó. Por el contrario, los animales que recibieron un suero BLV negativo mostraron signos de infección por BLV. Estos resultados contribuyen a la optimización de un bioensayo en ovejas útil para caracterizar la infección por BLV.

Cutaneous annular lesions as the first sign of transformation of follicular lymphoma into diffuse large B‑cell lymphoma.

Diffuse large B‑cell lymphoma (DLBCL) is the most common subtype of non‑Hodgkin lymphoma with diverse clinical, pathological and genetic features. An 80‑year‑old woman was diagnosed with a stage IV‑X‑A (Ann Arbor staging system) low grade systemic follicular lymphoma (FL). Four months after the diagnosis, she developed asymptomatic, indurated, annular erythematous plaques with centrifugal growth on the abdomen, arms and neck. The skin biopsy revealed a dermal infiltration compatible with diffuse large B‑cell lymphoma. Light chain restriction by flow cytometry was demonstrated. The variable, diverse and joining genes of immunoglobulin G heavy chains were sequenced and cloned, and showed the same pattern for both the initial follicular lymphoma and the skin infiltration. Translocation t (14;18) was present in both samples. Based on these findings, a diagnosis of transformation of follicular lymphoma into diffuse large B cell lymphoma was made. Although other hematological disorders such as primary cutaneous diffuse large B cell lymphoma, mycosis fungoides and the cutaneous infiltration of chronic juvenile myeloid leukemia can present as annular lesions, we were unable to find any previous reports of these as a manifestation of cutaneous infiltration by systemic non‑Hodgkin lymphoma.

The efficacy of ELISA commercial kits for the screening of equine infectious anemia virus infection / Eficacia de ensayos de ELISA comerciales para el screening de infección por el virus de la anemia infecciosa equina

The most used and reliable indicator of equine infectious anemia virus (EIAV) infection is the detection of its specific antibodies in horse serum. In the present study, the performance of two commercial ELISA tests for the detection of EIAV antibodies as well as the potential advantages of their use as an EIAV infection screening tool were evaluated in 302 horse serum samples. Both ELISA assays showed 100% diagnostic sensitivity, and 92.3-94.3% diagnostic specificity. Discordant results were analyzed by immunoblot. The results showed that both ELISA tests are very efficient at detecting EIAV infected animals, allowing to identify a higher number of positive horse cases. Thus, ELISA assays can be useful tools in EIA control and eradication.

El mejor indicador de la infección por el virus de la anemia infecciosa equina (Equine infectious anemia virus, EIAV) es la detección de anticuerpos específicos en el suero del caballo. En el presente trabajo se evaluó la capacidad de detección de anticuerpos contra EIAV de dos equipos de ELISA comerciales utilizando 302 muestras de suero equino, así como las ventajas potenciales de su uso como herramientas de screening. Ambos ensayos de ELISA presentaron 100 % de sensibilidad diagnóstica y una especificidad diagnóstica del orden de 92,3 a 94,3 %. Las muestras discordantes fueron analizadas por inmunoblot. Los resultados mostraron que las dos pruebas ELISA son muy eficientes para detectar animales infectados por EIAV, al permitir identificar un mayor número de animales positivos que la prueba de inmunodifusión en gel de agar, oficialmente aprobada en la República Argentina para la certificación de los animales. Las pruebas de ELISA constituyen herramientas muy útiles en los programas de control y de erradicación de la infección por EIAV.

Producción de ácido giberélico a partir de Gibberella fujikuroi utilizando lodo residual municipal como sustrato / Production of gibberellic acid from Gibberella fujikuroi using municipal sewage sludge as a substrate / Produção de ácido giberélico desde Gibberella fujikuroi usando lodo residual municipal como substrato

Objetivo. Utilizar lodos residuales municipales (LRM) provenientes de una planta de tratamiento de aguas residuales ubicada en Toluca, Estado de México, para cultivar al hongo Gibberella fujikuroi en fermentación sumergida y producir ácido giberélico (AG3). Materiales y métodos. Se utilizó Gibberella fujikuroi (CDBB:268). Para la obtención de AG3 se verificó la producción empleando como sustrato al medio de cultivo estándar (MCE). La determinación de (AG ) fue por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) con un equipo Varian, 9050,9012. Se obtuvieron 6 muestras de lodos de una planta tratadora de aguas residuales en Toluca, Estado de México y fueron caracterizados. Finalmente ambos sustratos (LRM y MCE) se usaron en fermentación sumergida y por extracción se obtuvo el AG3 cuantificado por HPLC. Resultados. La caracterización del LRM demostró que el contenido de materia orgánica (MO) es de 5.20 % (m/v) y nitrógeno total (N T) de 0.25 % (m/v), dicha composición está dentro del rango como sustrato para la producción del AG3 por Gibberella fujikuroi. El hongo se cultivó durante 3, 8, 13 y 30 días utilizando lodo residual estéril con una humedad del 95.6 %(m/v) y en medio de cultivo estándar (MCE), las muestras se procesaron y analizaron por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), donde la producción de AG3 en el LRM fue de 460.06 mg/L para 30 días en fermentación sumergida a un pH de 4.0 y 1014.46 mg/L para el control. Conclusiones. El contenido nutritivo del LRM es adecuado para el crecimiento del hongo Gibberella fujikuroi y la producción de AG3 empleando como sustrato LRM.

Objective. To use municipal sewage sludge (LRM) from a wastewater treatment plant located in Toluca, State of Mexico, to grow the fungus Gibberella fujikuroi in submerged fermentation and to produce gibberellic acid (AG3). Materials and methods. We used Gibberella fujikuroi (CDBB: 268). To obtain AG3, production was verified using as a substrate the standard culture medium (MCE). Gibberellic acid determination was done with high performance liquid chromatography (HPLC) with a Varian 9050.9012 equipment. We obtained 6 samples of sludge from a wastewater treatment plant in Toluca, State of Mexico, that were then characterized. Finally, both substrates (LRM and MCE) were used in submerged fermentation, and GA3 was obtained by extraction and quantified using HPLC. Results. The LRM characterization showed that the organic matter content (MO) is of 5.20% (w/v) and the total nitrogen content (N T) is of 0.25% (w/v). Such composition is within the range as a substrate for the production of AG3 by Gibberella fujikuroi. The fungus was cultivated for 3, 8, 13 and 30 days in sterile sewage sludge with a moisture content of 95.6% (w/v) and in standard culture medium (MCE). Samples were processed and analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC). Production of AG3 in the LRM was of 460.06 mg/L after 30 days in submerged fermentation at pH 4.0, and of 1,014.46 mg/L in the control. Conclusion. The nutrient content of LRM is suitable for the growth of the fungus Gibberella fujikuroi and for the production of GA3 when used as a substrate.

Objetivo. Usar lodos residuais municipais (LRM) procedentes de uma estação de tratamento de águas residuais de Toluca, Estado de México, para cultivar o fungo Gibberella fujikuroi em fermentação submersa e produzir ácido giberélico (AG3). Materiais e métodos. Foi utilizado Gibberella fujikuroi (CDBB: 268). Para obter AG3 foi verificada a produção empregando como substrato o meio de cultura padrão (MCE). A determinação de ácido giberélico foi por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) com um equipo Varian, 9050,9012. Foram obtidas seis amostras de lodos de uma estação de tratamento de águas residuais em Toluca, Estado de México e foram caracterizadas. Finalmente, ambos os substratos (LRM e MCE) foram utilizados em fermentação submersa e por extração foi obtido o AG3 quantificado por HPLC. Resultados. A caracterização do LRM demonstrou que o teor de matéria orgânica (MO) é 5,20% (m/v) e o nitrogênio total (N T) 0,25% (m/v), esta composição está dentro do intervalo como substrato para a produção de AG3 por Gibberella fujikuroi. O fungo foi cultivado por 3, 8, 13 e 30 dias usando lodo residual estéril com um teor de umidade de 95,6% (m/v) e em meio de cultura padrão (MEC), as amostras foram processadas e analisadas por cromatografia líquida de alta resolução (HPLC), onde a produção de AG3 no LRM foi 460,06 mg/L para 30 dias em fermentação submersa em pH 4,0 e 1.014,46 mg/L para o controle. Conclusões. O teor nutritivo do LRM é adequado para o crescimento do fungo Gibberella fujikuroi e a produção de AG3, empregando como substrato o LRM.

Utilización de líneas celulares de cáncer mamario humano en la obtención de anticuerpos monoclonales que reconocen tejido tumoral / Use of human breast cancer cells for the production of monoclonal antibodies that recognize the tumoral tissue

Trabajos recientes dirigidos a la obtención de anticuerpos monoclonales contra células de cáncer mamario humano, reportan la generación de reactivos potencialmente útiles en la definición del linaje de tumores de origen dudoso, la detección de metástasis ganglionares, la radiolocalización de lesiones, la formación de subgrupos de pacientes con tumores de probable comportamiento biológico diferente y el tratamiento inmunológico del cáncer mamario. En este artículo se describe la obtención de cultivos de hibridomas secretores de anticuerpos que reconocen líneas de cultivo de cáncer mamario humano y tejido tumoral. Estos se generaron mediante la hibridización de células P3/x63-Ag8-653, con células esplénicas de ratones Balb/cHab inmunizados con tres líneas de cáncer mamario humano. En el tamizaje de los anticuerpos y la definición de su reconocimiento tisular se empleó la técnica de inmunofluorescencia indirecta. Se discute el valor de las líneas celulares como inmunógeno, el sistema empleado para el tamizaje de anticuerpos y la caracterización de su reconocimiento, así como la posible relevancia de los patrones de identificación obtenidos en los cortes histológicos de tumores mamarios benignos, malignos y en lesiones metastásicas ganglionares