Helminth infections and hybridization between Haemonchus contortus and Haemonchus placei in sheep from Santana do Livramento, Brazil / Infecções helmínticas e hibridização entre Haemonchus contortus e Haemonchus placei em ovinos criados em Santana do Livramento, Brasil

Abstract The occurrence and intensity of helminth infections were evaluated in sheep from pastures shared with cattle. In 2015 and 2016, young male sheep acquired in Santana do Livramento, Rio Grande do Sul, Brazil, were finished in integrated crop-livestock system. We selected the 12 sheep that showed the highest number of nematode eggs per gram of faeces to search for worms in the gastrointestinal tract. Haemonchus contortus and Trichostrongylus colubriformis were the major parasites. H. contortus presented mean intensities of 1,159 and 257 worms in 2015 and 2016, respectively. T. colubriformis displayed mean intensities of 4,149 and 2,427 worms in 2015 and 2016, respectively. Of the 127 male specimens of Haemonchus spp. analysed by Polymerase Chain Reaction (PCR), 125 were H. contortus, one Haemonchus placei and one hybrid. Other species detected were Cooperia punctata , Cooperia pectinata, Cooperia spatulata, Cooperia curticei, Ostertagia ostertagi, Teladorsagia circumcincta , Trichostrongylus axei, Nematodirus spathiger , and Trichuris ovis. Twenty lambs presented cysts of Taenia hydatigena in the liver and mesentery. One lamb presented Coenurus cerebralis, the larval stage of Taenia multiceps, in the brain. In conclusion, sheep from pasture shared with cattle presented a high diversity of nematode species. H. contortus and H. placei co-infection occur with consequent hybridization.

Resumo A ocorrência de infecções helmínticas foi avaliada em ovinos que compartilhavam pastagem com bovinos. Em 2015 e em 2016, cordeiros machos foram adquiridos em Santana do Livramento, Rio Grande do Sul, para serem terminados em sistema de lavoura - pecuária (ILP). Em cada ano, 12 cordeiros que tinham maior contagem de ovos nas fezes foram abatidos para recuperação dos vermes. Haemonchus contortus e Trichostrongylus colubriformis foram as principais espécies registradas. H. contortus apresentou intensidade média de 1159 e 257 vermes em 2015 e 2016, respectivamente. T. colubriformis apresentou intensidade média de 4149 e 2427 parasitas em 2015 e 2016, respectivamente. De 127 machos de Haemonchus spp. analisados por "Polymerase Chain Reaction" (PCR), 125 foram identificados como H. contortus, um como Haemonchus placei e um como híbrido. Cooperia punctata, Cooperia pectinata, Cooperia spatulata, Cooperia curticei, Ostertagia ostertagi, Teladorsagia circumcincta , Trichostrongylus axei, Nematodirus spathiger e Trichuris ovis foram as outras espécies de nematódeos registradas. Vinte cordeiros apresentaram cistos de Taenia hydatigena no mesentério e no fígado. Um cordeiro apresentou no cérebro Coenurus cerebralis, o estágio larval de Taenia multiceps . Em conclusão, ovinos criados com bovinos apresentam grande diversidade de nematódeos. A co-infecção de H. contortus e H. placei favorece a produção de híbridos.

Advances in the diagnosis of the gastrointestinal nematode infections in ruminants / Avanços no diagnóstico das infecções por nematódeos gastrintestinais em ruminantes

Enumeration of nematode eggs in fecal samples using the McMaster technique and morphological identification of third stage larvae from fecal cultures have been extensively used with satisfactory results in the diagnosis of the gastrointestinal nematode infections in ruminants. In order to improve sensitivity and accuracy, other approaches for quantification of eggs have been employed, like the FLOTAC and Mini-FLOTAC techniques. Results obtained in different studies indicate that fecal egg counts are a reliable measure of the size of the worm burden. However, the immunological status of the animals should be taken into consideration to interpret the results of the fecal examination. Molecular techniques have also been useful in the diagnosis of parasitic diseases. The ultimate in diagnosis has been the development of robotic platforms that enable separation of eggs from feces. Because manipulation is minimal, good quality DNA from eggs is obtained, which is used for amplification, and finally, produces a result indicating the degree of the infection by the different parasite species in mix infections. The ideal method should be reliable, friendly to non-experts and quick to perform. With the advance in robotics, bioinformatics and molecular biology, methods with such characteristics are expected to become available and affordable to be used in laboratories for the routine diagnosis of gastrointestinal nematodes of ruminants...

A quantificação de ovos de nematoides em amostras de fezes e a identificação morfológica das larvas de terceiro estágio a partir de culturas de fezes têm sido amplamente utilizadas, com resultados satisfatórios para o diagnóstico das infecções por nematoides gastrintestinais em ruminantes. Com o intuito de melhorar a sensibilidade na detecção dos ovos, outras técnicas, tais como Flotac e Miniflotac, têm sido empregadas. Resultados obtidos em diferentes estudos indicam que a contagem de ovos nas fezes é uma medida confiável e representativa da magnitude da carga parasitária. No entanto, o estado imunológico dos animais deve ser considerado na interpretação dos resultados coproparasitológicos. As técnicas moleculares também têm sido úteis no diagnóstico das enfermidades parasitárias. Os maiores avanços no diagnóstico têm sido propiciados pelo desenvolvimento de plataformas robóticas, que separam os ovos das fezes com pouca manipulação, propiciando a obtenção de DNA de ovos de boa qualidade, o que resulta em uma amplificação que possibilita indicar o grau da infecção pelas diferentes espécies de parasitas em infecções mistas. O método ideal deve ser preciso, rápido e de fácil execução por não-especialistas. Com o avanço da robótica, bioinformática e biologia molecular, espera-se que equipamentos com tais características se tornem disponíveis e acessíveis para serem utilizados na rotina laboratorial para o diagnóstico de nematoides gastrintestinais deruminantes...

Differentiation of Haemonchus placei from Haemonchus contortus by PCR and by morphometrics of adult parasites and third stage larvae / Identificação de Haemonchus placei e Haemonchus contortus por PCR e por análise morfológica de parasitas adultos e larvas infectantes

Molecular and morphological methods were evaluated to distinguish between Haemonchus contortus and Haemonchus placei species. A total of 141 H. contortus and 89 H. placei male adult specimens collected from artificially infected lambs were identified individually by PCR analysis, using a species-specific primer pair. These PCR results were used as gold standard for Haemonchus spp. identification. Haemonchus placei presented higher mean spicule and barb lengths than H. contortus (P<0.05). However, some measurements overlapped. For this reason, a discriminate function did not allow the correct identification of 13 H. contortus and one H. placei specimen. The sheath tail length of the third stage larvae (L3), which comprises the distance between the tip of the larval tail and the end of the sheath tail, were measured. Only three of the 485 H. placei larvae (0.619%) had a sheath tail shorter than 85 µm, while only four of the 500 H. contortus larvae (0.8%) presented a sheath tail longer than 85 µm. The results indicated that 6.09% of the male adult specimens would be misclassified based on the discriminate function, while only 0.71% of infective larvae would be misclassified. Therefore, identification of L3 can be used as the first method to indicate the presence of H. placei and/or H. contortus in a population of domestic ruminants.

Métodos moleculares e morfológicos foram avaliados para a identificação de Haemonchus contortus e Haemonchus placei. No total, 141 H. contortus e 89 H. placei machos adultos, obtidos de cordeiros artificialmente infectados, foram identificados individualmente por PCR com o emprego de um par de “primers” espécie-específico. Esses resultados da análise por PCR foram considerados como padrão para a identificação das espécies de Haemonchus. Haemonchus placei apresentou valores médios de espículos e ganchos superiores aos de H. contortus (P<0,05). Entretanto, houve sobreposição de alguns valores. Por essa razão, a função discriminante não permitiu a identificação correta de 13 exemplares de H. contortus e de um, de H. placei. Foi medida a cauda da bainha de larvas infectantes (L3), que compreende a distância entre a ponta da cauda da larva e a ponta da cauda da bainha. Apenas três das 485 L3 de H. placei (0,619%) apresentaram a cauda da bainha com medida inferior a 85 µm e somente em quatro das 500 L3 de H. contortus (0,8%) essa medida foi superior a 85 µm. Os resultados demonstraram que 6,09% dos machos adultos seriam identificados erroneamente com base na função discriminante, enquanto a identificação incorreta de L3 seria de apenas 0,71%. Portanto, a identificação de L3 pode ser utilizada como método inicial para indicar a presença de H. placei e/ou H. contortus em uma população de ruminantes domésticos.

Bovine carcass sexing by PCR method

The objective of the present study was to develop a methodology that would permit sexing bovine meat ready for commercialization. A male-specific primer sequence was used, followed by analysis of the amplified product. The method proved to be efficient for sex verification and is of practical utility in the prevention of fraud in beef sale

Chromosome analysis in cattle and horses

e analyzed the chromosomes of 117 cows of different breeds for the identification of centric fusion and the chromosomes of 100 young Andaluz and Brasileiro de Hipismo mares for the identification of 63,X lines, using the technique of X chromosome identification based on interstitial heterochromatin on the long arm