Viabilidade da cultura temporária de linfócitos, em diferentes tempos após coleta do sangue, para análise de cariótipo / Viability of lymphocyte culture, at different times after blood collection, for karyotype analysis

Introduction: Cytogenetics is the area of genetics that studies chromosomes, including numerical changes, and their relationship to structural imbalances. Among the classical cytogenetics tests, the GTG banding karyotype is the most widely used. The period of culture establishment is a critical step, which can affect the pre-analytical phase of the test. Objective: To evaluate, at different establishment times, culture viability and banding resolution. Material and methods: Collection of 10 ml blood from 10 subjects was carried out for culture analysis. For viability analysis, mitotic index (MI) and banding resolution were assessed. Results: The comparative analysis of MI showed significant difference between times. In the assessment of banding resolution, the mean value of the bands was higher at times zero and 24 hour. Discussion: The MI reflects inhibition of cell cycle progression and/or loss of ability to proliferate. When the pair analysis was performed, a difference between zero and 48 hours was observed. The average number of bands analyzed at times zero and 24 hours did not indicate difference in the quantity and quality of the bands when cultures were grown immediately after blood collection or within 24 hours. At the 48th hour after blood collection significant reduction of band resolution was observed. Conclusion: These data highlight the importance of the biological material quality, as viability is lower when the culture is grown after 24 hours, as well as the banding resolution...

Introdução: Citogenética é a área da genética que estuda os cromossomos, incluindo alterações numéricas, estruturais e sua relação com distúrbios. Nos exames de citogenética clássica, o cariótipo com bandamento GTG é a metodologia mais utilizada, sendo o período de implantação da cultura uma fase crítica, que pode comprometer a fase pré-analítica do exame. Objetivo: Avaliar, em diferentes tempos de implantação, a viabilidade das culturas e o número de bandas. Material e métodos: Foram colhidos 10 ml de sangue de 10 sujeitos para realização das culturas. Para análise da viabilidade, foram utilizados o índice mitótico (IM) e a análise de resolução por bandamento. Resultados: A comparação dos valores do IM demonstrou desigualdade entre os diferentes tempos analisados. Na análise de resolução, o valor médio das bandas foi maior nos tempos zero e 24 horas. Discussão: O IM reflete a inibição da progressão do ciclo celular e/ou a perda da capacidade de proliferação. Quando o IM foi comparado dois a dois, verificou-se a diferença entre os tempos zero e 48 horas. O número médio de bandas analisadas nos tempos de zero e 24 horas mostrou que não houve diferença na quantidade e na qualidade das bandas quando as culturas foram implantadas logo após a coleta do sangue ou em até 24 horas. No tempo de 48 horas, houve significativa redução da resolução. Conclusão: Os dados obtidos reforçam a importância da qualidade do material biológico, visto que a viabilidade decai quando a implantação da cultura é realizada após 24 horas, assim como a resolução das bandas...

Perfil genômico do carcinoma de células escamosas de laringe e seu fronte de invasão / Genomic profiling of squamous cell carcinoma of the larynx and its invasive front

Câncer de laringe ocorre em 25 dos carcinomas de cabeça e pescoço e compreende 2 de todas as doenças malignas. É comum o aparecimento de segundos tumores primários e, aproximadamente, 5 dos pacientes apresentam cânceres sincrônicos. Há várias evidências indicando que a população celular presente no fronte de invasão possui características moleculares diferentes das áreas tumorais superficiais, tornando esta região importante para avaliação prognóstica. Neste estudo foram investigadas por CGH cromossômico de alta resolução (HR-CGH) as alterações genômicas na área superficial e no fronte de invasão de carcinomas de laringe e selecionadas regiões específicas para serem avaliadas por outras metodologias para a confirmação dos resultados. O componente superficial e o fronte de invasão de 33 carcinomas de laringe fixados em formalina e em blocos de parafina foram avaliados por HR-CGH. Foram detectadas alterações comuns aos dois componentes assim como alterações exclusivas a cada um deles. Adicionalmente, foi investigada e confirmada a expressão aumentada da proteína ciclina D1 o gene CCND1 esta mapeada em 11q13) por análise de expressão em plataformas de microarranjos de tecidos contendo as áreas do tumor e do fronte de invasão. Foi realizada também a análise de marcadores polimórficos de microssatélites mapeados em 3q e 18q em um grupo independente de 33 amostras (DNA tumoral e do sangue periférico) cujos resultados confirmaram as perdas encontradas nestas regiões cromossômicas. A expressão do gene CTTN (mapeada em 11q13) e de sua proteína foram avaliadas e revelaram que os altos níveis de expressão proteica foram correlacionados com invasão perineural nas células do fronte de invasão, sugerindo que esta área pode ser considerada como ferramenta prognóstica em carcinomas de laringe. Foram investigados os ganhos detectados em 2q24...