Métodos de diagnóstico molecular en la práctica odontológica / Molecular diagnostic methods in dental practice

El diagnóstico molecular, mediante la aplicación de técnicas molecu- lares, ha permitido estudiar microorganismos presentes en el inicio y progresión de la caries dental, enfermedad periodontal, y en los fracasos endodónticos. Las técnicas moleculares permiten la detección y cuan- tificación del material genético del ácido desoxirribonucleico (DNA), ácido ribonucleico (RNA) o proteínas, lo que posibilita el estudio del genoma completo o secuencias de DNA específicas. Estas técnicas surgen como una necesidad de detectar microorganismos de difícil o lento crecimiento en cultivos; la técnica más utilizada es la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que permite la amplificación de peque- ños segmentos de material genético al utilizar cebadores, por lo que es un método económico, preciso, sensible y rápido para la detección de microorganismos. El presente artículo de revisión bibliográfica servirá para informar sobre los avances de las técnicas moleculares utilizadas para el diagnóstico en la práctica odontológica (AU)

Molecular diagnosis, through the application of molecular techniques, has made it possible to study microorganisms present in the onset and progression of dental caries, periodontal disease, and endodontic failures. Molecular techniques allow the detection and quantification of the genetic material of deoxyribonucleic acid (DNA), ribonucleic acid (RNA) or proteins, allowing the study of the complete genome or specific DNA sequences, they arise as a need to detect difficult or slow growing microorganisms in cultures. The most widely used technique is the polymerase chain reaction (PCR) that allows the amplification of small segments of genetic material using primers, it is an economical, precise, sensitive and fast method for the detection of microorganisms. This bibliographic review article will serve to report on the advances in molecular techniques used for diagnosis in dental practice (AU)

Vigilancia epidemiológica de Staphylococcus aureus y resistencia antibiótica en ambientes nosocomiales / Epidemiological surveillance of Staphylococcus aureus and the antibiotic resistence in nosocomial environments / Vigilância epidemiológica de Staphylococcus aureus e resistência a antibióticos em ambientes nosocomiais

Uno de los microrganismos más importantes en Infecciones Asociadas a la Atención en Salud (IAAS) es Staphylococcus aureus, una bacteria aerobia Gram positiva, resistente a diferentes condiciones ambientales. Objetivo. Identificar Staphylococcus aureus y su resistencia a los principales antibióticos Betalactámicos, aislada en áreas inertes. Materiales y métodos. Se realizó análisis fenotípico, antibiograma y métodos moleculares como: Extracción de ADN mediante Lisis Alcalina, identificación molecular para la amplificación de los genes tanto de identificación de la bacteria (nucA y femB), como de resistencia de antibióticos (blaZ, mecA y vanA) mediante PCR punto final, la separación de los amplicones se realizó mediante electroforesis en gel de Agarosa, los productos de la PCR se revelaron mediante la utilización de transiluminador UV. Resultados. De 200 muestras tomadas se obtuvo dos muestras positivas (1%) para Staphylococcus aureus, con el 100% de resistencia a penicilina y sensible a todos los demás antibióticos testeados. Conclusiones. La identificación de la bacteria y su resistencia hoy en día se realiza mayormente mediante métodos moleculares, lo cual no descarta la identificación fenotípica que, en este caso, determinó resultados importantes como lo es la prueba D-test positivo. La resistencia a fármacos betalactámicos se considera como un serio problema de salud, por lo tanto, se requiere de una vigilancia epidemiológica constante.

Staphylococcus aureus is one of the most important microorganisms related to Health Care Associated Infections (HCAI), it is a Gram-positive aerobic bacterium, highly resistant to the outer environment. Objective. Identify Staphylococcus aureus and its resistance to the most common beta-lactam antibiotics in isolated, inert areas. Materials and methods. Phenotypic analysis, antibiogram and molecular testing such as: DNA extraction by Alkaline Lysis, molecular identification for the amplification of genes both for identification of Staphylococcus aureus (nucA and femB), and for antibiotic resistance (blah, mega and vanA) by PCR, the disassociation of the amplicons was preforming by Agarose gel electrophoresis and results were shown in a UV translluminator. Results. From the 200 samples taken, two showed positive (1%) for Staphylococcus aureus, with 100% penicillin-resistant and sensitive to all other antibiotics tested. Conclusions. Nowadays identification of the bacteria and its resistance is carried out mostly through molecular testing, ruling out phenotypic identification, which in this case it determined important results such as the positive D-test. Resistance to beta-lactam drugs is considered a serious health issue, therefore it requires a safer epidemiological vigilance, an increase in sensitivity testing and the accuracy of results. It is recommended to carry out the D-test in laboratories to identify resistance mechanisms and to guide health personnel to select the best option regarding specific and effective treatment for patients affected with MRSA.

Um dos microrganismos mais importantes em Infecções Associadas à Saúde (HAIs) é o Staphylococcus aureus, uma bactéria aeróbica gram-positiva resistente a diferentes condições ambientais. Objetivo. Identificar Staphylococcus aureus e sua resistência aos principais antibióticos beta-lactam, isolados em áreas inertes. Materiais e métodos. Análise fenotípica, antibiograma e métodos moleculares foram realizados tais como: extração de DNA por Alkaline Lysis, identificação molecular para a amplificação dos genes tanto da identificação da bactéria (nucA e femB), e resistência a antibióticos (blaZ, mecA e vanA) pelo ponto final da PCR, a separação dos amplicons foi realizada por eletrofose em gel de Agarose, os produtos PCR foram revelados usando transiluminador UV. Resultados. De 200 amostras colhidas, duas amostras positivas (1%) foram obtidas para o Staphylococcus aureus, com 100% de resistência à penicilina e sensível a todos os outros antibióticos testados. Conclusões. A identificação da bactéria e sua resistência hoje é realizada principalmente por métodos moleculares, o que não exclui a identificação fenotípica que, neste caso, determinou resultados importantes como o teste D positivo. A resistência aos medicamentos beta-lactam é considerada um grave problema de saúde, portanto, é necessária uma vigilância epidemiológica constante.

Detección de genes que codifican hemolisinas en cepas de Staphylococcus aureus aisladas en pantallas de teléfonos móviles de estudiantes de último año de odontología en Cuenca-Ecuador, 2020-2021 / Detection of hemolysin-encoding genes in Staphylococcus aureus strains isolated from cell phone screens of senior dental students in Cuenca-Ecuador, 2020-2021

Staphylococcus aureus es la especie más común implicada en las enfermedades infecciosas que causan morbilidad y mortalidad a nivel mundial. Posee los genes hla, hlb, hld, hlg, hlg-v que codifican para hemolisinas. Las hemolisinas son reconocidas como un factor de virulencia potencial que ataca a la membrana y produce destrucción de las plaquetas y necrosis. Tienen la capacidad de sobrevivir por largos periodos en superficies inertes como en pantallas de teléfonos móviles. Estudio observacional de tipo transversal descriptivo. Se aislaron en un estudio previo 16 cepas de Staphylococcus aureus a partir de 92 muestras de pantallas de teléfonos móviles de estudiantes de odontología. Se utilizó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa para detectar los genes que codifican para hemolisinas. El gen hla se detectó en 75% (12/16) de cepas de Staphylococcus aureus, hlb en 25% (4/16), hld 75% (12/16), hlg 75% (12/16), hlg-v 13% (2/16). Este estudio evidencia el alto porcentaje de cepas virulentas que poseen genes que codifican para hemolisinas en pantallas de teléfonos móviles, lo que puede contribuir a la diseminación de este patógeno. Es imperioso implementar medidas para la desinfección de teléfonos móviles (AU)

Staphylococcus aureus is the most common species implicated in infectious diseases causing morbidity and mortality worldwide. It has the hla, hlb, hld, hlg, hlg-v genes encoding for hemolysins. Hemolysins are recognized as a potential virulence factor that attacks the membrane and causes platelet destruction and necrosis. They have the ability to survive for long periods on inert surfaces such as cell phone screens. Observational descriptive cross-sectional study. Sixteen strains of Staphylococcus aureus were isolated in a previous study from 92 samples of cell phone screens of dental students; the polymerase chain reaction technique was used to detect genes coding for hemolysins. The hla gene was detected in 75% (12/16) of Staphylococcus aureus strains, hlb in 25% (4/16), hld 75% (12/16), hlg 75% (12/16), hlg-v 13 % (2/16). This study evidences the high percentage of virulent strains that possess genes encoding for hemolysins in cell phone screens, which may contribute to the dissemination of this pathogen. It is imperative to implement measures for the disinfection of cell phones (AU)

Sensibilidad y especificidad de pruebas moleculares en odontología / Sensitivity and specificity of molecular tests in dentistry

La biología molecular tiene mayor afinidad en las áreas de la salud, en odontología su principal aplicación ha sido en la identificación de microorganismos orales patógenos mediante el uso de secuencias genéticas específicas (ácido desoxirribonucleico [DNA], ácido ribonucleico [RNA] y proteínas). Las pruebas a nivel molecular se caracterizan por su rapidez, reproductibilidad, sensibilidad y especificidad de los microorganismos diana. El presente artículo de revisión bibliográfica servirá como herramienta para comprender los principios de las técnicas más destacadas como son: PCR estándar y RT-PCR en tiempo real, PCR con transcriptasa inversa, microarreglos y ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA), además de sus ventajas y desventajas respecto a las pruebas convencionales (AU)

Molecular biology has a greater affinity in the areas of health. In dentistry, its main application has been the identification of pathogenic oral microorganisms, through the use of specific genetic sequences (deoxyribonucleic acid [DNA], ribonucleic acid [RNA] and proteins). Molecular tests are characterized by their rapidity, reproducibility, sensitivity and specificity of target microorganisms. This literature review article will serve as a tool to understand the principles of the most prominent techniques such as: Standard PCR, Real-time RT-PCR, Reverse transcriptase PCR, microarrays and Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), in addition to their advantages and disadvantages with respect to conventional tests (AU)

Detección de mutaciones del gen 23S de Helicobacter pylori implicadas en la resistencia a claritromicina / Detection of Helicobacter pylori 23S gene involved in clarithromycin resistance / Detecção de mutações no gene 23S do Helicobacter pylori envolvidas na resistência à claritromicina

INTRODUCCIÓN: uno de los principales factores que influyen en el tratamiento para la erradicación de Helicobacter pylori es la resistencia a antibióticos, la cual difiere entre países e incluso regiones de un país. Entre los antibióticos más usados para el tratamiento de la infección se encuentra la claritromicina, se ha demostrado que el gen 23S ARNr está involucrado en la resistencia a este antibiótico, como resultado de mutaciones puntuales. OBJETIVO: detectar las mutaciones presentes en el gen 23S ARNr que codifican la resistencia a la claritromicina en Helicobacter pylori a través de un método no invasivo y rápido. MATERIALES Y MÉTODOS: a partir de muestras de heces de 76 pacientes con síntomas gastrointestinales asociados a la bacteria, se aisló y purificó el ADN bacteriano, se identificó el gen 23S ARNr mediante seminested PCR. Para la detección de mutaciones puntuales en el gen se realizó la RFLP, utilizando las enzimas HhaI que detecta la mutación T2717C y MboII que identifica la mutación A2142C/G. RESULTADOS: un total de 45 pacientes resultaron positivos a Helicobacter pylori lo cual corresponde al 59,2%. La mutación T2717C analizada con la enzima HhaI se presentó en el 2,2% de la muestra de estudio, no se obtuvo resultados positivos para la enzima MboII. CONCLUSIONES: a través de la Seminested PCR se identificó al gen 23S ARNr de Helicobacter pylori, PCR-RFLP es un método fiable para detectar la presencia de mutaciones causantes de resistencias a antibióticos, útil antes de elegir el tratamiento erradicador contra las infecciones por Helicobacter pylori.

INTRODUCTION: one of the main factors that influence the treatment for the eradication of Helicobacter pylori is resistance to antibiotics, which differs between countries and even regions of a country. Clarithromycin is among the most widely used antibiotics for the treatment of infection. The 23S rRNA gene has been shown to be involved in resistance to this antibiotic, as a result of point mutations. OBJECTIVE: to detect the mutations present in the 23S rRNA gene that encode resistance to clarithromycin in Helicobacter pylori through a non-invasive and rapid method. MATERIALS AND METHODS: from stool samples of 76 patients with gastrointestinal symptoms associated with the bacteria, bacterial DNA was isolated and purified, the 23S rRNA gene was identified by seminested PCR. For the detection of point mutations in the gene, RFLP was performed, using the enzymes HhaI that detects the T2717C mutation and MboII that identifies the A2142C / G mutation. RESULTS: a total of 45 patients were positive for Helicobacter pylori, which corresponds to 59.2%. The T2717C mutation analyzed with the HhaI enzyme was present in 2.2% of the study sample, no positive results were obtained for the MboII enzyme. CONCLUSIONS: the 23S rRNA gene of Helicobacter pylori was identified through Seminested PCR, PCR-RFLP is a reliable method to detect the presence of mutations causing resistance to antibiotics, useful before choosing the eradication treatment against Helicobacter pylori infections.

INTRODUÇÃO: um dos principais fatores que influenciam no tratamento para erradicação do Helicobacter pylori é a resistência aos antibióticos, que difere entre países e até mesmo regiões de um país. A claritromicina está entre os antibióticos mais amplamente utilizados para o tratamento de infecções.O gene 23S rRNA demonstrou estar envolvido na resistência a esse antibiótico, como resultado de mutações pontuais. OBJETIVO: detectar as mutações presentes no gene 23S rRNA que codificam resistência à claritromicina no Helicobacter pylori, por meio de um método não invasivo e rápido. MATERIAIS E MÉTODOS: a partir de amostras de fezes de 76 pacientes com sintomas gastrointestinais associados à bactéria, o DNA bacteriano foi isolado e purificado, o gene 23S rRNA foi identificado por PCR seminestado. Para a detecção de mutações pontuais no gene, foi realizado RFLP, utilizando as enzimas HhaI que detecta a mutação T2717C e MboII que identifica a mutação A2142C / G. RESULTADOS: um total de 45 pacientes foram positivos para Helicobacter pylori, o que corresponde a 59,2%. A mutação T2717C analisada com a enzima HhaI estava presente em 2,2% da amostra do estudo, nenhum resultado positivo foi obtido para a enzima MboII. CONCLUSÕES: por meio da PCR seminestada, foi identificado o gene rRNA 23S do Helicobacter pylori, o PCR-RFLP é um método confiável para detectar a presença de mutações que causam resistência a antibióticos, útil antes de escolher o tratamento de erradicação contra infecções por Helicobacter pylori.