Effect of doses and administration routes of 9R vaccine on protection of Japanese quails against experimental infection with Salmonella Gallinarum / Efeito das doses e vias de administração da vacina 9R na proteção de codornas japonesas contra infeccção experimental com Salmonella Gallinarum

Coturniculture has increased significantly in the last decades. There are several pathogens that can affect these birds. Among the diseases, fowl typhoid stands out as a disease with a potentially great impact to the poultry industry. The objective of this the study was to evaluate the effect of doses and administration routes of live 9R vaccine on protection of Japanese quails against experimental infection with Salmonella Gallinarum (SG). Two hundred and fifty birds were used, divided into five groups: G1, oral vaccination with one dose; G2, oral vaccination with 2 doses; G3, subcutaneous vaccination with one dose; G4, subcutaneous vaccination with two doses and G5 not vaccinated. All birds from all five groups were challenged with SG at an age of 45 days. SG was quantified in the periods of one, four, seven and twelve days after the challenge. The presence of clinical signs and macroscopic lesions of the disease were observed. The groups vaccinated by subcutaneous route had a higher egg production and lower mortality rate. Birds receiving a dose of the vaccine by subcutaneous route also showed lower amount of SG in the liver and spleen seven days after the challenge.(AU)

A coturnicultura tem aumentado significativamente nas últimas décadas. Existem vários patógenos que podem afetar essas aves. Entre as doenças, o tifo aviário se destaca como uma doença de grande impacto para a indústria avícola. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de doses e vias de administração da vacina viva 9R na proteção de codornas japonesas contra infecção experimental por Salmonella Gallinarum (SG). Foram utilizadas duzentos e cinquenta aves, divididas em cinco grupos: G1, vacinação oral com uma dose; G2, vacinação oral com 2 doses; G3, vacinação subcutânea com uma dose; G4, vacinação subcutânea com duas doses e G5 não vacinado. Todas as aves dos cinco grupos foram desafiadas com SG aos 45 dias de idade. A SG foi quantificada nos períodos de um, quatro, sete e doze dias após o desafio. Foi observada a presença de sinais clínicos e lesões macroscópicas da doença. Os grupos vacinados por via subcutânea apresentaram maior produção de ovos e menor taxa de mortalidade. Aves recebendo uma dose da vacina por via subcutânea também apresentaram menor quantidade de SG no fígado e baço sete dias após o desafio.(AU)

Age influence on quality of shell and penetration in bacterial laying lightweight eggs / Influência da idade na qualidade da casca e na penetração bacteriana em ovos de poedeiras leves

This study evaluated the influence of the bird's age on the quality of the shell and percentage of bacterial penetration in commercial eggs. White-shelled commercial eggs were used, laid by light laying hens in their first laying cycle at 21, 39, 51, and 62 weeks of age. Shell quality evaluations comprised: egg weight, specific gravity, percentage and thickness of shell, number and size of pores. For evaluations regarding bacterial penetration, strains of several enterobacterias and one salmonella were used, all of which resistant to Nalidixic acid (100µg/ml). The method employed for evaluation of bacterial penetration was filling the eggs with growth medium. The data were subjected to variance analysis with 5% of probability using SAS (Education Analytical Software, 2013). Eveb though increase in the laying hen's age caused reduction of the quality of eggshells, it failed to affect the percentage of penetration of the bacterial samples evaluated.(AU)

O presente estudo avaliou a influência da idade da ave sobre a qualidade da casca e na porcentagem de penetração bacteriana em ovos comerciais. Foram utilizados ovos brancos comerciais provenientes de poedeiras leves em primeiro ciclo de postura com 21, 39, 51 e 62 semanas de idade. As avaliações de qualidade da casca realizadas foram: peso do ovo, gravidade específica, porcentagem e espessura da casca, número e tamanho dos poros. Para as avaliações da penetração bacteriana, foram utilizadas cepas de diversas enterobactérias e uma salmonela, sendo todas resistentes ao ácido nalidíxico (100µg/mL). O método utilizado para a avaliação da penetração bacteriana foi por meio do preenchimento dos ovos com meio de cultura. Os dados foram submetidos à análise de variância com 5% de probabilidade utilizando-se o programa SAS - Statistical Analisys System (Education Analytical Software, 2013). O aumento da idade da poedeira promoveu a redução da qualidade da casca dos ovos, porém não foi capaz de influenciar a porcentagem de penetração das amostras bacterianas avaliadas.(AU)

Transference in vitro of the resistance to the antimicrobials between Escherichia coli, Lactobacillus spp. and Salmonella enteritidis isolated from chickens / Transferência in vitro da resistência aos antimicrobianos entre Escherichia coli, Lactobacillus.spp e Salmonella enteritidis isoladas de frangos

The objective of this work was to verify the possibility of transference of resistance to the antimicrobials between bacteria that are in the present normal microbiota of chickens and Salmonella Enteritidis. Samples of Lactobacillus spp. (L. spp.), Salmonella Enteritidis (SE) and Escherichia coli (E. coli) previously isolated from chickens, selected after the test of sensitivity antimicrobial in vitro according the standard method (National Committee for Clinical Laboratory Standards) utilizing those with resistance and sensibility to the antimicrobials inductors, named donor and receptor bacteria, respectively were used. Antimicrobials inductors were utilized to stimulate the transference of resistance to the antimicrobials between the bacteria. The possibility of transference was verified from the E. coli resistant to the SE and L. spp. Transference of a sample of L. spp resistant to the antimicrobials inductors to the SE was also verified. It was only possible to verify the transference of the resistance to the antimicrobials inductor when the donor bacteria was the E. coli and the bacteria receptor was SE. In the present study we conclude that the transference of resistance to the antimicrobials between bacteria is possible, however, not all bacteria participate in that trial, not transmitting and neither acquiring this resistance.

O objetivo deste trabalho foi verificar a possibilidade de transferência de resistência aos antimicrobianos entre bactérias normais da microbiota de frangos e Salmonella Enteritidis. Utilizamos amostras de Lactobacillus spp. (L. spp.), Salmonella Enteritidis (SE) e Escherichia coli (E. coli) previamente isolados de frangos, selecionados após prova de sensibilidade antimicrobiana in vitro conforme metodologia padrão (Comitê Nacional para Padrões Clínicos de Laboratório). Utilizamos aqueles com resistência e sensibilidade aos antimicrobianos indutores, chamados de bactérias doadoras e receptoras, respectivamente. Os antimicrobianos indutores foram utilizados para estimular a transferência de resistência aos antimicrobianos entre as bactérias. A possibilidade de transferência foi verificada da E. coli resistente para a SE e L. spp. Também foi verificada a transferência de uma amostra de L. spp resistente aos antimicrobianos indutores para a SE. Só foi possível verificar a transferência da resistência aos antimicrobianos indutores quando a bactéria doadora foi a E. coli e a bactéria receptora foi a SE. No presente estudo concluímos que a transferência de resistência aos antimicrobianos entre bactérias é possível, mas nem todas as bactérias participam desse evento, não transmitindo e nem adquirindo esta resistência.

Susceptibilidade antimicrobiana de amostras de Escherichia coli isoladas de frango industrial (Gallus gallus domesticus - Linnaeus, 1758) com colibacilose / Antimicrobial susceptibility of samples of Escherichia coli isolated from industrial chickens (Gallus gallus domesticus - Linnaeus, 1758) with colibacillosis

O presente estudo avaliou a susceptibilidade de amostras de Escherichia coli isoladas de quadros de colissepticemia aviária da região centro-oeste paulista pelo Laboratório de Ornitopatologia da FMVZ-UNESP/Botucatu, SP. Constatou-se um grande número de amostras multirresistentes aos antibióticos testados, onde as drogas menos efetivas foram sulfonamida e tetraciclina. Todas as amostras mostraram-se sensíveis a norfloxacina e gentamicina.

The present study evaluated the susceptibility of Escherichia coli samples isolated from poultry with colisepticemia in midwestern São Paulo State at the Ornitopathology Laboratory of FMVZ-UNESP/Botucatu, SP. A large number of samples were found that were multi-resistant to the antibiotics tested, the less effective drugs being sulfonamide and tetracycline. All samples were susceptible to norfloxacin and gentamicin.

Avaliação in vitro da atividade inibitória de Lactobacillus spp., isolados do inglúvio e cecos de aves sobre Salmonella / In vitro evaluation of the inhibitory activity of Lactobacillus spp. isolated from crop and ceca of chickens against Salmonella serotypes

Inglúvios e cecos de reprodutoras comerciais de frangos de corte foram utilizados para o isolamento de Lactobacillus spp. As estirpes isoladas foram caracterizadas como Gram-positivo, catalase negativo, produtoras de gás em glicose, não produtoras de H2S em triple sugar iron e identificadas pela reação em cadeia da polimerase como Lactobacillus reuteri e Lactobacillus salivarius. A utilização da técnica spot-on-the-lawn para avaliação da inibição in vitro permitiu a análise de vários microrganismos simultaneamente. Todas as estirpes isoladas inibiram in vitro S. Enteritidis fagotipo 4, S. Enteritidis fagotipo 28, S. Typhimurium, S. Pullorum, S. Agona, S. Anatum, S. Dublin e S. Senftenberg.

Crops and ceca of commercial broiler breeders were used for the isolation of Lactobacillus spp. The isolated samples were characterized by Gram positive staining, negative catalase test, production of gas from glucose, negative for H2S production from triple sugar iron, and were identified by the polymerase chain reaction as Lactobacillus reuteri and Lactobacillus salivarius. The use of the spot-on-the-lawn technique, with modifications, for the evaluation of the in vitro inhibition made it possible the simultaneous analysis of several microrganisms. All the crop and ceca isolated microorganisms presented an in vitro inhibitory effect against strains of Salmonella Enteritidis fagotype 4, S. Enteritidis fagotype 28, S. Typhimurium, S. Pullorum, S. Agona, S. Anatum, S. Dublin, and S. Senftenberg.

Comparação entre método bioquímico e reação em cadeia de polimerase para identificação de Lactobacillus spp., isolados de aves / Comparison between biochemical and polymerase chain reaction methods for the identification of Lactobacillus spp. isolated from chickens

Lactobacilos foram isolados do inglúvio e cecos de reprodutoras pesadas e caracterizados como Gram-positivo, catalase negativo, produtores de gás em glicose e não produtores de H2S em triple sugar iron e pela fermentação de carboidratos. Utilizaram-se os iniciadores: Lac 1/23-10C para detecção de Lactobacillus acidophilus, L. crispatus, L. amylovorus, L. gasseri, L. helveticus e L. jensenii; Lac 2/LU-1' para L. acidophilus; Fer 3/Fer 4 para L. fermentum; Reu 1/Reu 2 para L. reuteri e Sal 1 e Sal 2 para L. salivarius. L. reuteri e L. salivarius foram identificados pela reação em cadeia de polimerase (PCR) e pelo teste bioquímico, enquanto L. acidophilus, L. fermentum e Lactobacillus sp. somente pelo teste bioquímico. Os resultados obtidos na PCR foram mais precisos quando comparados aos obtidos com o método bioquímico, que demonstrou ser subjetivo devido às variações na fermentação de carboidratos, principalmente na diferenciação entre L. fermentum e L. reuteri.

Lactobacilli were isolated from crops and ceca of broiler breeders and characterized by positive Gram staining, negative catalase test, production of gas from glucose, and negative for H2S production from triple sugar iron, and carbohydrates fermentation. Primers: Lac1/23-10C for detecting Lactobacillus acidophilus, L. crispatus, L. amylovorus, L. gasseri, L. helveticus, and L. jensenii; Lac2/LU-1' for L. acidophilus; Fer3/Fer4 for L. fermentum; Reu1/Reu2 for L. reuteri, and Sal1/Sal2 for L. salivarius were used. L. reuteri and L. salivarius were identified by both polymerase chain reaction (PCR) and biochemical tests. However, L. acidophilus, L. fermentum, and Lactobacillus sp. were only identified by biochemical tests. PCR results were more precise, considering the variability of carbohydrate fermentation among the strains, especially for identifying L. fermentum and L. reuteri.

Uso de microbiota cecal congelada com crioprotetores em pintos infectados experimentalmente com Salmonella enterica sorovar Enteritidis / Use of frozen cecal microbiota with cryoprotectors in chicks experimentally infected with Salmonella enterica serotype Enteritidis

Pintos de corte com um dia de idade foram tratados com microbiota cecal cultivada em condição de aerobiose, nos tempos de congelamento de 90, 200, 290 e 360 dias, e associada aos crioprotetores sacarose, trealose, dimetilsulfóxido (DMSO) e glicerol. Posteriormente as aves foram desafiadas com Salmonella Enteritidis, visando determinar a eficácia dos tratamentos em relação à quantidade de bactérias viáveis da microbiota que foi maior aos 90 dias (10,58 Log10 UFC/ml), quando as aves foram tratadas com sacarose, e menor aos 290 dias, quando tratadas com glicerol (7,73 Log10 UFC/ml). No tempo zero, todas as aves apresentaram Salmonella (100 por cento) quando tratadas com DMSO e glicerol, com colonização cecal de 4,9 e 5,2 Log10 UFC/g do conteúdo cecal, respectivamente; aos 360 dias nenhuma ave foi infectada, independente do tratamento. A microbiota cecal, independente de tratamento, sempre determinou menor quantidade de S. Enteritidis em qualquer um dos parâmetros pesquisados, quando comparada com a das aves não tratadas. O congelamento em nitrogênio líquido foi eficaz na manutenção da viabilidade da microbiota cecal até 360 dias.

One-day-old broiler chicks were treated with cecal microbiota cultivated under aerobiose conditions, frozen during 90, 200, 290 and 360 days and associated with different cryoprotectors such as sucrose, trehalose, DMSO and glycerol. Subsequently, the birds were challenged with Salmonella Enteritidis in order to determine the efficacy of the different treatments in relation to the quantity of viable bacteria, which was higher at 90 days when treated with sucrose (10.58 log10 CFU/ml) and lower at 290 days when treated with glycerol (7.73 log10 CFU/ml). The quantity of infected birds was 100 percent in 0 time, when the cecal colonization by S. Enteritidis was 4.9 and 5.2 log10 CFU/g of cecal content, respectively treated with DMSO and glycerol. No bird was infected at 360 days, irrespectively of the treatment. In all treatments, the cecal microbiota always determined a lesser quantity of S. Enteritidis for all the studied parameters compared to non-treated birds. Frozen in liquid nitrogen was effective in maintaining the viability of cecal microbiota during the experimental period of 360 days.

Efeito da microbiota cecal e do Lactobacillus salivarius inoculados in ovo em aves desafiadas com Salmonella enterica sorovar Enteritidis / Effect of cecal microflora and Lactobacillus salivarius in ovo administration used on chicken previously challenged with Salmonella enterica serovar Enteritidis

Ovos embrionados provenientes de matrizes pesadas foram inoculados na câmara de ar com microbiota cecal total, microbiota cecal diluída e cultura de Lactobacillus salivarius, no 18° dia de incubação. Dois dias após o nascimento, as aves foram desafiadas com Salmonella enterica sorovar Enteritidis (SE) e, cinco dias após o desafio, avaliou-se a presença da bactéria no fígado e ceco. O efeito de exclusão competitiva, após o desafio com SE, somente foi observado pela ausência da bactéria no fígado das aves tratadas in ovo com L. salivarius. A inoculação in ovo de microbiota cecal indefinida ou diluída não reduziu a colonização de SE no fígado e no ceco das aves, incluindo, neste último, também o tratamento com L. salivarius. Nenhum dos tratamentos in ovo determinou índice de eclodibilidade superior a 65 por cento.

Commercial 18-day-old incubating chicken embryos were inoculated with total or diluted cecal microbiota and Lactobacillus salivarius cultures directly into the inner air sac. Two days after hatching, the chicks were challenged with Salmonella enterica serovar Enteritidis (SE), and five days later the presence of bacteria in cecum and liver was evaluated. The competitive exclusion effect was determined by the search for SE in the liver of chicks treated in ovo with L. salivarius and challenged with SE. The in ovo inoculation of total or diluted cecal microbiota, in addition to the L. salivarius treatment did not significantly decrease the colonization of SE in liver and cecum. All treatments resulted in hatchability of 65 percent or less.

Efeito protetor da microbiota cecal congelada e liofilizada sobre a infecçäo experimental de frangos de corte por Salmonella enterica sorovar Enteritidis / Protection by anaerobic cecal microflora frozen or lyophilized against experimental infection by Salmonella enterica serovar Enteritidis in broilers

Estudaram-se os efeitos do tratamento de frangos de corte com microbiota cecal anaeróbia liofilizada (MCL) e congelada (MCC) sobre a infecçäo do trato digestivo das aves por Salmonella enterica sorovar Enteritidis. Foi usada microbiota intestinal sem prévia identificaçäo bacteriana. A infecçäo foi persistente, em ordem, no ceco, inglúvio e duodeno. A infecçäo também foi autolimitante nos grupos tratados e no controle. Näo ocorreu diferença entre o grupo-controle positivo e os tratados com MCL ou MCC. Houve reduçäo da colonizaçäo do ceco no período de 12 dias após o desafio nos grupos tratados com MCL e MCC, o que näo ocorreu no grupo-controle positivo. Näo houve variaçäo entre os tratamentos com MCL e MCC quanto às características pesquisadas. A S. Enteritidis reduziu o ganho de peso médio nas aves inoculadas. Os tratamentos com MCL e MCC minimizaram a reduçäo de peso nos grupos infectados

Efeito da vacina contra coccidiose sobre a colonizaçäo de Salmonella enteritidis em frangos de corte tratados com microbiota cecal anaeróbia / Effect of coccidiosis vaccine on Salmonella enteritidis colonization in broiler chicks inoculated with anaerobic cecal microflora

Avaliou-se o efeito da vacina contra coccidiose sobre a habilidade da microbiota cecal anaeróbia (MCA), administrada por diferentes vias (aves tratadas), em proteger pintos de corte da colonizaçäo por Salmonella enteritidis (Se). Utilizaram-se 120 aves assim divididas: grupo A, pulverizaçäo de MCA em aves vacinadas contra coccidiose e desafiadas com Se, grupo B, inoculaçäo endoesofágica de MCA em aves vacinadas e desafiadas, grupo C, MCA na água de bebida de aves vacinadas e desafiadas, grupo D, aves näo tratadas, vacinadas e desafiadas, grupo E, aves näo tratadas, näo vacinadas e desafiadas e, grupo F, aves näo tratadas, näo vacinadas e näo desafiadas (controle negativo). Utilizaram-se como parâmetros a colonizaçäo do trato digestivo por Se e sua presença nas fezes, bem como o peso corporal das aves, avaliados aos dois, sete e 12 dias após o desafio. Na aves tratadas com MCA, especialmente por meio de pulverizaçäo e inoculaçäo endoesofágica, a colonizaçäo do ceco por Se e sua presença nas fezes foram menores, mostrando que a açäo da MCA contra a colonizaçäo de ceco e excreçäo fecal näo foi afetada pelo uso da vacina contra coccidiose em pintos de corte e que a associaçäo MCA/vacina contra coccidiose por ser utilizada sem que haja comprometimento na eficácia da MCA. Nos grupos que näo receberam MCA, vacinados ou näo contra coccidiose, houve aumento da colonizaçäo cecal, bem como excreçäo fecal da amostra desafio. O ceco foi o local de maior presença e persistência da Se. O resultado de administraçäo de MCA pela água de bebida näo foi täo eficiente, mas somente este tratamento resultou em peso corporal das aves significativamente superior ao das aves do grupo näo tratado, näo vacinado e desafiado, indicando que a presença de salmonelas paratifóides näo interfere na produtividade de frangos de corte. Näo se observou diferença no peso das aves dos grupos D (vacinados contra coccidiose) e E ( näo vacinadas) desafiadas com Se, demonstrando que a vacina näo influenciou negativamente o ganho de peso das aves desafiadas com Salmonela enteriditis

Acidos orgânicos e microbiota cecal anaeróbica no controle da infecçäo experimental de frangos por Salmonella typhimurium e Salmonella enteritidis / Organic acids and anaerobic microflora for control of experimental infection of broilers by Salmonella typhimurium and S. enteritidis

Estudaram-se os efeitos do tratamento de frangos com ácidos orgânicos e/ou microbiota cecal anaeróbia (MCA) sobre a infecçäo sistêmica e do trato digestivo de aves por Salmonella typhimurium e S. enteritidis. Foi usada MCA sem prévia indentificaçäo bacteriana. O tratamento com MCA contribuiu na resistência dos frangos à infecçäo por Salmonella spp. As infecçöes eram mais persistentes, em ordem, no ceco, reto e inglúvio, näo interferindo com o peso corporal no período. As infecçöes também eram autolimitantes, pois lotes tratados e controles apresentaram índices semelhantes de infecçäo ao final dos experimentos. Isoladamente ou em associaçäo com ácido acético, MCA reduziu a colonizaçäo do trato digestivo das aves por S. typhimurium e S. enteritidis. A associaçäo MCA e ácido acético näo teve efeito potencializador na reduçäo da colonizaçäo do trato digestivo. Exceto no inglúvio, o uso dos ácidos acético, propiônico ou fórmico näo determinou diferença em relaçäo aos grupos-controle na reduçäo de S. typhimurium e S. enteritidis no ceco e no reto. O uso de ácidos orgânicos e MCA teve pequeno efeito na reduçäo do pH cecal das aves tratadas. O tratamento com MCA diminuiu a quantidade de S. enteritidis nas fezes. A reduçäo do pH cecal näo diminuiu a quantidade de S. enteritidis nas fezes. S. enteritidis foi muito mais invasiva que a S. typhimurium e o uso de ácidos orgânicos e MCA teve pouco efeito na reduçäo da infecçäo sistêmica

Efeito da via de inoculaçäo na patogenicidade de amostras patôgenica e apatogênica de Escherichia coli em galinha / Effect of route of inoculation on the pathogenicity of pathogenic and apathogenic Escherichia coli strains in chickens

Estudou-se o efeito da via de inoculaçäo sobre a patogenicidade de amostras de Escherichia coli patogênica de apatogênica, para a galinha, utilizando-se aves SPF com um e 45 dias de idade. Nas aves com um dia de idade, a via oral pareceu ser a porta de entrada mais importante, enquanto que nas de 45 dias, a via respiratória pareceu ser a mais importante na reproduçäo da colibacilose. A amostra apatogênica esteve ausente ou foi rapidamente eliminada do sangue, enquanto que a amostra patogênica quase sempre provocou bacteremia. O pulmäo pareceu atuar como reservatório e disseminador de E. coli quando a bactéria foi inoculada através das vias respiratórias. A colonizaçäo do trato intestinal das aves ocorreu nos seus vários segmentos, do esôfago ao reto, com ambas as amostras. A amostra patogênica mostrou maior habilidade na colonizaçäo do trato digestivo das aves, tanto no tempo de persistência quanto na quantidade de bactérias. Cecos e, sequencialmente, reto foram os locais com maior intensidade de colonizaçäo, independente da via e amostra inoculada. Aerosaculite e pericardite foram as lesöes macroscópica mais evidentes, caracaterizadas microscopicamente por processos inflamatórios, com presença de células polimorfonucleares e mononucleares, somados a focos necróticos, principalmente no coraçäo

Proteçäo de galinhas pela cepa vacinal Conn-F de Mycoplasma gallisepticum, na forma liofilizada e como cultura fresca / Protection against Mycoplasma gallisepticum in chickens vaccinated with the Conn-F strain in the lyophilized form or as a broth culture

Estudou-se a cepa Conn-F de Mycoplasma gallisepticum como vacina para galinhas, utilizada na forma liofilizada, com títulos variáveis, e como cultura fresca. A resposta vacinal foi avaliada através da inoculaçäo no saco aéreo da cepa patogênica R de M. gallisepticum aos 28 e 49 dias pós-vacinaçäo. Os resultados foram verificados pela freqüência de aves com lesöes nos sacos aéreos, severidade das lesöes e níveis de anticorpos circulantes medidos pelos testes de soroaglutinaçäo rápida (SAR) e inibiçäo da hemaglutinaçäo (IH). A imunoproteçäo conferida foi dependente do título vacinal, do tempo pós-vacinaçäo e da forma de apresentaçäo da cultura. Resultados ligeiramente melhores foram observados com a vacina na forma de cultura fresca. Os títulos vacinais de 105 UFC/dose conferiram considerável melhor proteçäo que o título de 103 UFC/dose. As aves vacinadas foram mais resistentes ao desafio aos 49 dias. O teste de SAR foi mais sensível que o de IH, sendo o mais indicado na detecçäo da resposta sorológica à vacinaçäo. A soroconversäo, medida pelo teste de SAR, foi dependente do período pós-vacinaçäo e do título vacinal e mostrou tendência de cair aos 49 dias pós-vacinaçäo. A resposta sorológica de galinhas à cepa Conn-F näo se relacionou com a proteçäo