Contribution of environmental factors in the formation of biofilms by Alicyclobacillus acidoterrestris on surfaces of the orange juice industry / Contribuição de fatores ambientais na formação de biofilmes por Alicyclobacillus acidoterrestris em superfícies da indústria de suco de laranja

ABSTRACT: The objective of this study was to evaluate the effect of the initial microbial load, temperature and contact time on the biofilm formation of Alicyclobacillus acidoterrestris on stainless steel and natural food-grade rubber using orange juice as culture medium. The low initial load of A. acidoterrestris (2 log CFU/mL) led to biofilm formation on the stainless steel surface after 48 h of contact at 28 ºC and after 24 h at 45 ºC, and on natural food-grade rubber surface after 48 h of contact at both temperatures. The high initial microbial load (5 log CFU/mL) led to biofilm formation on stainless steel after 4 h of contact at 28 °C and 45 °C, while biofilm was formed on natural food-grade rubber after 8 h of contact at 28 °C and 4 h at 45 °C. The microbial load also affected the presence of spores in biofilm, which was observed on both surfaces only at high initial loads of A. acidoterrestris.

RESUMO: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da carga microbiana inicial, temperatura e tempo de contato na formação de biofilme de Alicyclobacillus acidoterrestris em aço inoxidável e borracha natural de qualidade alimentar utilizando suco de laranja como meio de cultura. A baixa carga inicial de A. acidoterrestris (2 log UFC/mL) levou à formação de biofilme na superfície do aço inoxidável após 48 h de contato a 28 ºC e após 24 h a 45 ºC, e na superfície natural de borracha de qualidade alimentar após 48 h de contato nas duas temperaturas. A alta carga microbiana inicial (5 log UFC/mL) levou à formação de biofilme em aço inoxidável após 4 h de contato a 28 °C e 45 °C, enquanto o biofilme foi formado em borracha natural de qualidade alimentar após 8 h de contato a 28 °C e 4 h a 45 °C. A carga microbiana também afetou a presença de esporos no biofilme, o que foi observado em ambas as superfícies apenas com altas cargas iniciais de A. acidoterrestris.

Evaluation of different culture media and enrichment in orange juice upon the growth of Alicyclobacillus spp / Avaliação de diferentes meios de cultura e enriquecimento em suco de laranja sobre o crescimento de Alicyclobacillus spp

Bacteria of the genus Alicyiclobacillus spp. form spores and develop in acid media, leading to the spoilage of citrus juices. Brazil is the largest exporter of orange juice concentrate, and yet, it has been extensively studied due to changes in taste and smell. Several investigations have reported different culture media used to detect and enumerate Alicyiclobacillus spp. The objective of the present study was to evaluate the recovery of Alicyiclobacillus spp. spores grown in ALI, BAT, K agar and YSG media using the methodology suggested by ABECitrus. Five inocula were used, two from reference strains and three from pasteurized concentrated orange juice. Cell recovery after the enrichment in reconstituted orange juice was also analyzed. An initial population of 6 log CFU/mL was inoculated. ALI, BAT and YSG media were able to recover the initial population of all different inocula, with no significant differences between the results. When compared to BAT, however, the preparation of ALI and YSG media was simpler and had more advantages. The recovery with K agar medium was lower than the other media for all the tested inocula, with significant differences found for Alicyclobacillus acidocaldarius0298T (3.66 log CFU/mL) and Alicyclobacillus pomorum-like CBMAI 0278 (4.11 log CFU/mL).(AU)

As bactérias do gênero Alicyiclobacillus spp. formam esporos e se desenvolvem em meios ácidos, podendo causar deterioração em sucos cítricos. O Brasil é o maior exportador de suco de laranja concentrado do mundo e, assim, este gênero vem sendo estudado por causar alterações de odor e sabor. Vários estudos relatam diferentes meios de culturas empregados para a detecção e enumeração de Alicyclobacillus spp. Este estudo teve como objetivo avaliar a recuperação de esporos de Alicyclobacillus spp. nos meios ALI, BAT, K ágar e YSG, utilizando a metodologia indicada pela ABECitrus. Cinco inóculos diferentes foram utilizados, sendo dois de linhagens-referência e os outros três isolados de suco concentrado de laranja pasteurizado. Também foi verificada a recuperação das células após o enriquecimento em suco de laranja reconstituído. Foi inoculada uma população inicial de 6 log UFC/mL. Os meios ALI, BAT e YSG conseguiram recuperar esta população nos diferentes inóculos, não existindo diferenças significativas entre os resultados. Contudo, devido à facilidade do preparo, os meios ALI e YSG mostraram-se mais vantajosos quando comparados ao meio BAT. O meio K ágar apresentou recuperação inferior aos outros meios para todos os inóculos, porém, houve diferença significativa apenas para Alicyclobacillus acidocaldarius 0298 T (3,66 log UFC/mL) e Alicyclobacillus pomorum-like CBMAI 0278 (4,11 log UFC/mL).(AU)