Integration, Viral Charge and E2 mRNA Levels in the Progresion of Intraepitelial Cervical Lesions / Integración, carga viral y niveles de arn mensajero de e2 de vph 16 en la progresión de lesiones intraepiteliales cervicales

RESUMEN Entre las lesiones intraepiteliales escamosas cervicales (LIE) es importante distinguir aquellas asociadas con mayor riesgo de cáncer de cuello uterino. El objetivo de este trabajo fue evaluar si los niveles de expresión de E2 del VPH16 en mujeres con LIE y con evidencia de integración viral se asocian con el grado de la lesión. Se analizaron 109 cepillados cervicales positivos para VPH 16 provenientes de 19 mujeres sin LIE, 45 mujeres con LIE de bajo grado (LIEBG) y 45 mujeres con LIE de alto grado (LIEAG). Se cuantificó el número de copias de ARNm de E2 y de los genes E2 y E6 mediante PCR en tiempo real para determinar la carga viral (E6) y la proporción E2/E6 para evaluar la integración viral. Se encontraron frecuencias similares de expresión de E2 en LEIBG y LEIAG 15/45 (33 %), la frecuencia en mujeres sin lesión fue menor 3/19 (15,8 %), todos los casos en los que se observó expresión del gen E2 tenían mezcla de ADN viral episomal e integrado. La carga viral aumentó significativamente a mayor grado de la lesión (ρ =0,049), mientras que la proporción E2/E6 disminuyó (ρ=0,049). El análisis ROC mostró una baja capacidad de los tres parámetros virales para distinguir entre lesiones de bajo y alto grado. En conclusión, aunque las lesiones con presencia de ADN viral mixto e integrado y expresión de E2 podrían estar en menor riesgo de progresión, y la carga viral y la integración se relacionaron con mayor gravedad de la lesión, su valor clínico como biomarcadores de LEIAG es limitado.

ABSTRACT It is important to distinguish among squamous intraepithelial lesions (SIL) those associated with increased risk cervical cancer. Our aim was to evaluate if the expression level of gen E2 in women with SIL and evidence of viral integration is associated to the grade of lesion. Cervical scrapes HPV16 positive from 19 women with normal histology, 45 women with low-grade SIL (LSIL) and 45 women with high-grade SIL (HSIL) were analyzed. Real-time PCR was used to quantify the mRNA of E2 and E2 and E6 genes to calculate viral load (E6) and the ratio E2/E6 to assess viral integration. Similar frequencies of E2 expression were found in LSIL and HSIL15/45 (33 %), the frequency in women without SIL was lower 3/19 (15.8 %), and all cases with E2 gene expression had mixed episomal and integrated viral DNA. The viral load increased significantly with the grade of SIL (ρ= 0.049), while E2/E6 ratio decreased (ρ=0.049). The ROC analysis showed low capacity of the three viral parameters analyzed to distinguish between low and high grade SIL. In conclusion although SIL with mixed and integrated viral DNA with E2 expression could be at lower risk of progression, and viral load and integration were associated with higher severity of the lesion, its clinical value as biomarkers of HSIL is limited.

Distribución de los genotipos del virus del papiloma humano en mujeres de Bogotá con anomalías en la citología cervicouterina / Genotype distribution of Human Papillomavirus in women from Bogotá with abnormal cervical smear

Objetivos: Determinar la distribución de los genotipos de VPH en mujeres de Bogotá con citología cervicouterina anormal. Métodos: Se colectaron muestras cervicales de 191 mujeres con ASCUS, 236 con lesiones intraepiteliales escamosas de bajo grado (LIEBG) y 116 de alto grado (LIEAG). La tipificación de VPH se realizó usando PCR con iniciadores consenso GP5+/GP6+ y reverse line blot. Resultados: La prevalencia de VPH fue 76,1%. Se observaron infecciones únicas en el 41,4% de las participantes, y coinfecciones en el 34,6%. La frecuencia de VPH según diagnóstico fue: 60,2%, 84,7% y 84,5% en ASCUS, LIEBG y LIEAG. Los VPH-16 y 58 fueron los tipos más frecuentes en los tres grupos, con frecuencias para VPH-16 de 20,4%, 33,9% y 38,8%, y para VPH-58 de 7,3%, 13,6%, 18,1% para ASCUS, LIEBG y LIEAG. En ASCUS y LSIL el tercer tipo en frecuencia fue VPH-56 (6,8% y 11,0%), mientras que en LIEAG fue VPH-18 (10,3%). Las infecciones con tipos virales probablemente oncogénicos y con tipos de bajo riesgo fueron mucho menos frecuentes y en general se presentaron como coinfecciones con tipos de alto riesgo. Conclusiones: Las infecciones con tipos de VPH de alto riesgo fueron las más frecuentes en todas las lesiones estudiadas, el VPH-58 ocupo el segundo lugar en frecuencia, como ha sido reportado en México y en general en Suramérica. El cambio hacia nuevas vacunas profilácticas que incluyan más tipos virales como el VPH-58 puede tener un mayor impacto en la disminución de la incidencia de lesiones preneoplásicas en nuestra región.

Objective: To determine the distribution of HPV genotypes in women from Bogotá with abnormal cervical smear. Methods: Cervical samples were collected from 191 women with ASCUS, 236 with low-grade (LSIL) and 116 with high-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL). HPV typing was performed using consensus PCR primers GP5+/GP6 + and reverse line blot. Results: The prevalence of HPV was 76.1%. Unique infections were observed in 41.4% of the participants and co-infections in 34.6%. The frequency of HPV according to diagnosis was: 60.2%, 84.7% and 84.5% in ASCUS, LSIL and HSIL respectively. HPV16 and 58 were the more frequent types in the three groups, HPV16 frequencies were 20.4%, 33.9% and 38.8%, and HPV58 frequencies were 7.3%, 13.6%, and 18,1% for ASCUS, LSIL and HSIL respectively. The third type in frequency in ASCUS and LSIL was HPV56 (6.8% and 11.0%), while in HSIL was HPV18 (10.3%). Infections with probably oncogenic types or with low risk types were much less frequent and generally were observed as co-infections with high-risk types. Conclusions: Infections with high risk HPV types were the most frequent in all studied lesions, VPH-58 ranked second in frequency as has been reported in Mexico and in general in South America. The change to new prophylactic vaccines including more viral types as HPV58 could have a higher impact in reducing the incidence of pre-neoplastic lesions in our region.

Genotipificación de los factores de virulencia vacA y cagA de Helicobacter pylori en individuos de dos regiones de Colombia con riesgo opuesto de cáncer gástrico / Genotyping of Helicobacter pylori virulence factors vacA and cagA in individuals from two regions in Colombia with opposing risk for gastric cancer

Introducción. La prevalencia de infección por Helicobacter pylori es alta en Colombia; en la zona andina las tasas de cáncer gástrico son altas mientras que en las zonas costeras son bajas. Los genotipos de H. pylori cagA positivo y vacA s1 y m1 se asocian con un mayor riesgo de cáncer gástrico. Objetivo. Determinar las diferencias en las frecuencias de los genotipos de H. pylori asociados a virulencia en dos regiones de Colombia con riesgo opuesto de cáncer gástrico. Materiales y métodos. Se analizaron 401 biopsias del antro gástrico provenientes de 401 individuos con diagnóstico de gastritis no atrófica, gastritis atrófica o metaplasia intestinal; 256 se obtuvieron en la zona de alto riesgo (Tunja y Bogotá) y, 145, en la zona de bajo riesgo (Barranquilla, Santa Marta y Cartagena). La genotipificación de los genes de virulencia cagA y vacA se hizo mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Resultados. No se observó diferencia en la frecuencia de infección por H. pylori entre las dos zonas (77,3 Vs . 77,9 %, p=no significativo, ns). La presencia de cagA fue mayor en la zona de bajo riesgo (77,9 Vs . 69,2 %, p=ns). El alelo vacA s1 también fue más prevalente en la zona de bajo riesgo (61,8 Vs . 72,0 %, p=ns). El alelo vacA m1 presentó mayor prevalencia en la zona de alto riesgo (57,2 Vs . 42,8 %, p=ns). La combinación cagA positivo s1m1 también fue más frecuente en la zona de bajo riesgo (48,9 Vs . 38,9 %, p=ns). Conclusiones. Las diferencias en el riesgo de cáncer gástrico en estas dos zonas no pueden explicarse por las diferencias en la prevalencia de infección por H. pylori o en la virulencia de las cepas circulantes.

Introduction: The overall prevalence of Helicobacter pylori infection is high in Colombia; however, in the country´s Andean region, gastric cancer rates far surpass those in coastal areas. Helicobacter pylori genotypes cagA positive and vacA s1 and m1 are associated with an increased risk of gastric cancer. Objective: To compare the distribution of H. pylori genotypes associated with virulence in two regions in Colombia with opposing risk for gastric cancer. Materials and methods: Four hundred and one gastric antral biopsies were obtained and analyzed from 401 individuals diagnosed with non-atrophic gastritis, atrophic gastritis and intestinal metaplasia: 256 came from the high-risk area cities of Tunja and Bogotá, and 145 from the low-risk area cities of Barranquilla, Santa Marta and Cartagena. Genotyping of virulence genes vacA and cagA was performed by PCR. Results: No difference was observed in the frequency of H. pylori infection between the two areas (77.3% vs 77.9 %, p=non significant, ns). The presence of cagA was higher in the low-risk area (77.9% vs. 69.2 %, p=ns). The vacA s1 allele was also more prevalent in the low-risk area (61.8 % vs 72.0 %, p=ns). The vacA m1 allele was more prevalent in the high-risk area (57.2 % vs 42.8 %, p=ns). The cagA positive s1m1 combination was also more frequent in the low-risk area (48.9% vs 38.9%, p=ns). Conclusions: The differences in the risk of gastric cancer in these two geographic areas cannot be explained by differences in the prevalence of infection by H. pylori or by differences in the virulence of circulating strains.

Niveles séricos de pepsinógeno y su capacidad diagnóstica de atrofia gástrica en diferentes poblaciones colombianas / Serum pepsinogen levels and gastric atrophy diagnostic capacity in different Colombian populations

Objetivo: Caracterizar los niveles de pepsinógeno y evaluar la capacidad de discriminación del PGI y la relación PGI/PGII para el diagnóstico serológico de atrofia gástrica en diferentes poblaciones colombianas. Materiales y métodos: Participaron 600 sujetos sin sintomatología gástrica y se analizaron 544 muestras de pacientes con sintomatología gástrica provenientes de diferentes poblaciones con riesgos opuestos para cáncer gástrico. A todos los participantes se les tomó muestra de sangre. En los pacientes se obtuvieron biopsias de antro y cuerpo para su diagnóstico inicial de lesiones gastroduodenales. Los niveles de pepsinógeno y la serología de Helicobacter pylori se estimaron con pruebas de ELISA. Los análisis estadísticos incluyeron pruebas de Kruskal-Wallis y Mann-Whitney, curva ROC y valores diagnósticos. Resultados: Los niveles de pepsinógeno en pacientes y sujetos asintomáticos difieren según la zona de riesgo de procedencia. Los niveles de PGI, PGII y PGI/PGII disminuyeron a medida que aumenta la severidad del diagnóstico histológico (p < 0,005), al igual que con el grado de severidad de la atrofia y la localización multifocal (p≤0,001). El PGI ≤86,68 y PGI/PGII ≤3,19 con un área bajo la curva de 0,76 identificó pacientes con atrofia severa multifocal, serología positiva para H. pylori y procedentes de la zona de riesgo alto, con sensibilidad de 77,5% y especificidad de 71,74%. Conclusión: Los resultados sugieren que los niveles de PGI, PGI/PGII conjuntamente con serología H. pylori positiva podrían ser considerados para la detección de atrofia severa en pacientes de la zona de riesgo alto. Se necesita otros estudios en poblaciones de riesgo alto.

Objective: To characterize levels of pepsinogen and evaluate the discrimination ability of pepsinogen I (PGI) and the PGI/ pepsinogen II (PGII) ratio for the serological diagnosis of gastric atrophy in different Colombian populations. Methods: A total 600 subjects without gastric symptoms participated and 544 samples from patients with gastric symptomatology were analyzed from different populations with opposing risks to gastric cancer. A blood sample was taken from all participants; a gastric antrum and body biopsy for the initial diagnosis of gastroduodenal lesions was obtained from the patients. The levels of pepsinogen and Helicobacter pylori serology were estimated with ELISA. Statistical analyses included Kruskal -Wallis and Mann -Whitney test, ROC curve and diagnostic values. Results: The levels of PGI and PGI / PGII differ by risk area of origin. Levels of PGI, PGII and PGI / PGII decreased with increasing severity of histological diagnosis (P < .005), as with the severity of atrophy and multifocal localization (P ≤.001). The PGI ≤ 86.68 and PGI / PGII ≤ 3.19 with an area under the curve of 0.76 identified patients with severe multifocal atrophy, positive serology for H. pylori, and from the high risk area, with a sensitivity of 77.5% and specificity of 71.74%. Conclusion: The results suggest that PGI levels together with PGI / PGII ratios and positive serology for H. pylori could be considered for the detection of severe atrophy in high-risk areas. Further studies are needed in high-risk populations © 2014 Instituto Nacional de Cancerología. Published by Elsevier España, S.L.U. All rights reserved.

Lesiones preneoplásicas gástricas en pacientes colombianos: asociación de polimorfismos genéticos interleucinas 1B-511, 1RN, 10-819, 10-1082, factor de necrosis tumoral-&alpha -308 y anticuerpos inmunoglobulina G hacia cagA de Helicobacter pylori / Pre-cancerous gastric lesions in Colombian patients: association with IL-1B-511, IL-1RN, IL-10-919, IL-10-1082, TNF-&alpha -308 genes polymorphisms, and anti-Helicobacter pylori cagA IgG antibodies

Objetivo: Evaluar la asociación de los polimorfismos de alguna de las citocinas más estudiadas en relación con el cáncer gástrico (IL-1B-511, IL-1RN intron-2-VNTR, TNF-α-308, IL-10-819 e IL-10- 1082) y la presencia de anticuerpos hacia la proteína cagA de Helicobacter pylori con las lesiones preneoplásicas gástricas en pacientes colombianos. Materiales y métodos: Se estudiaron 185 pacientes con lesiones preneoplásicas (gastritis atrófca, metaplasia intestinal y displasia), y 154 controles (gastritis no atrófica), provenientes de hospitales de una zona de riesgo alto y otra de riesgo bajo para cáncer gástrico. Se obtuvieron biopsias gástricas y muestras de sangre; la genotipificación de los polimorfismos se hizo por discriminación alélica usando PCR en tiempo real y por PCR convencional y electroforesis en agarosa (VNTR del intron 2 de IL-1RN); la serología de Helicobacter pylori y Helicobacter pylori cagA se determinó por ELISA. Se utilizó regresión logística multinomial en el análisis estadístico. Resultados: El genotipo IL-1B-511TT (odds ratio = 4,05; intervalo de confianza 95% 1,35-12,10) se asoció a metaplasia intestinal; no se observaron otras asociaciones entre los diferentes polimorfismos y las lesiones preneoplásicas. La infección por Helicobacter pylori cagA positivo se asoció a gastritis atrófica, metaplasia intestinal y displasia (OR = 2,66; 13,70; 40,29, respectivamente). Conclusión: Los resultados sugieren que entre los genotipos proinflamatorios el genotipo IL-1B-511TT estaría asociado a la metaplasia intestinal, y la serología de Helicobacter pylori cagA positivo sería un biomarcador útil para intervenir y prevenir la presencia de lesiones preneoplásicas. Se necesitan otros estudios con población colombiana que evalúen la asociación hallada de IL1B-511 con la metaplasia intestinal.

Objective: To evaluate the relationship of some of the most studied cytokines (IL-1B-511, IL-1RN intron-2-VNTR, TNF-a-308, IL-10-819, and IL-10-1082) with gastric cancer, as well as the presence of anti-Helicobacter pylori cagA IgG antibodies with pre-cancerous lesions in Colombian patients. Materials and methods: A study was conducted on 185 patients with pre-cancerous lesions (atrophic gastritis, intestinal metaplasia and dysplasia), and 154 controls (non-atrophic gastritis), seen in hospitals in a high risk area, and another in a low risk area, for gastric cancer. Gastric biopsy specimens and blood samples were obtained. The genotyping of the polymorphisms was performed by allelic discrimination using real-time PCR, conventional PCR, and agarose electrophoresis (VNTR of IL-1RN intron 2). The serology of Helicobacter pylori and Helicobacter pylori cagA was determined by ELISA. A multinomial logistic regression was used in the statistical analysis. Results: The IL-1B-511TT genotype was associated with intestinal metaplasia (OR=4.05; 95% CI; 1.35-12.10). No other relationships were observed between the different polymorphisms and preimg/revistas/rcc/cancerous lesions. Infection due to a positive Helicobacter pylori cagA was associated with atrophic gastritis, intestinal metaplasia and dysplasia (OR=2.66; 13.70; 40.29, respectively). Conclusion: The results suggest that, among the pro-inflammatory genotypes, the IL-1B-511TT would be associated with intestinal metaplasia, and that a positive Helicobacter pylori cagA serology could be a useful biomarker for the intervention and prevention of pre-cancerous lesions. Further studies are required in the Colombian population in order to evaluate the relationship found between IL1B-511 and intestinal metaplasia.

Variation in the number of EPIYA-C repeats in CagA protein from Colombian Helicobacter pylori strains and its ability to induce hummingbird phenotype in gastric epithelial cells / Variación en el número de repeticiones EPIYA-C en la proteína CagA de aislamientos colombianos de Helicobacter pylori y su capacidad para inducir fenotipo colibrí en células epiteliales gástricas

Introduction. Studies using Western Helicobacter pylori strains have shown that a risk factor for gastric cancer is the number of EPIYA-C motifs in the cytotoxin-associated A protein. CagA is delivered into epithelial cells, where it becomes tyrosine phosphorylated in their EPIYA repeats and induces cytoskeleton rearrangements. Objectives. The objective of this study was to evaluate H. pylori cagA positive strains isolated from Colombian patients with gastroduodenal diseases for the number of EPIYA-C repeats in cagA and their ability to induce cytoskeleton rearrangements in epithelial cells. Materials and methods. We analyzed the 3’ EPIYA repeats region of cagA by PCR in 93 H. pylori cagA positive strains from 49 patients with gastritis, 17 with gastric cancer, and 24 with duodenal ulcer. AGS cells exposed to the various H. pylori isolates were evaluated for rearrangements in their cytoskeleton. Results. Strains with one EPIYA-C were the most frequent in gastritis and duodenal ulcer patients. Strains with three EPIYA-C were mainly found in gastric cancer. We found a significantly higher risk of gastric cancer for individuals infected with strains harboring three EPIYA-C motifs (OR=12.4, CI95%: 2.32-66.3). Strains from gastric cancer showed significantly higher percentages of induction of cytoskeleton rearrangements in comparison with those from gastritis (p Mann-Whitney<0.005). Conclusions. H. pylori strains with three EPIYA-C repeats can confer an increased risk of cancer to infected individuals.

Introducción. En los aislamientos de Helicobacter pylori del hemisferio occidental, se ha observado que el número de repeticiones EPIYA-C en la proteína CagA es un factor de riesgo para cáncer gástrico. La proteína CagA es introducida en la célula epitelial y, posteriormente, es fosforilada en las tirosinas presentes en los motivos EPIYA e induce rearreglos en el citoesqueleto. Objetivos. Nuestro propósito fue evaluar el número de repeticiones EPIYA-C y la habilidad para inducir rearreglos en el citoesqueleto en los aislamientos de H. pylori positivos para cagA, provenientes de pacientes colombianos con enfermedad gastroduodenal. Materiales y métodos. Mediante PCR, se analizó la región 3´ que contiene las repeticiones EPIYA-C, en 93 aislamientos de H. pylori positivos para cagA provenientes de 49 pacientes con gastritis, 17 con cáncer gástrico y 24 con úlcera duodenal. Los rearreglos del citoesqueleto se evaluaron mediante cultivos simultáneos de células AGS con las cepas de H. pylori.Resultados. En gastritis y úlcera duodenal se observó la mayor frecuencia de aislamientos con EPIYA C; los aislamientos con tres repeticiones EPIYA-C se encontraron con mayor frecuencia en cáncer gástrico. Encontramos un riesgo de cáncer gástrico significativamente mayor para individuos infectados con cepas con tres repeticiones EPIYA-C (OR=12,4; IC95% 2,32-66,3). Los aislamientos provenientes de cáncer gástrico mostraron mayores porcentajes de inducción de rearreglos en el citoesqueleto que los observados con aislamientos provenientes de gastritis (prueba de Mann-Whitney menor de 0,005). Conclusiones. La infección con cepas de H. pylori con tres repeticiones EPIYA-C puede conferir un mayor riesgo de desarrollar cáncer gástrico.

Respuesta inmune humoral hacia los papilomavirus oncogénicos tipos 16, 31 y 58 en mujeres colombianas con citología normal / Humoral Immune Response to Oncogenic Papillomavirus Types 16, 31, and 58 among Colombian Women with Normal Cytology

Objetivo: Caracterizar la respuesta IgG e IgA hacia VLP (partículas semejantes a virus) del virus del papiloma humano (VPH) 16, 31 y 58 y determinar su asociación con la eliminación de la infección. Métodos: Se incluyeron 186 mujeres con citología normal participantes en un estudio de cohorte sobre la historia natural de la infección por VPH. Se evaluaron tres grupos: control (negativas para ADN VPH, n=146), eliminación (positivas al ingreso y negativas durante el seguimiento, n=25) y persistencia (positivas durante el seguimiento, n=15). Los anticuerpos IgG e IgA hacia VLP VPH 16, 31 y 58 se analizaron mediante ELISA. Resultados: En la primera visita, se observó en el grupo de eliminación una mayor seroprevalencia de anticuerpos IgG hacia VLP VPH 16. Esta prevalencia estuvo acompañada de mayores niveles de anticuerpos en este grupo, en comparación con los niveles observados en el grupo de persistencia (media DO405 nm 0,665 vs. 0,290, respectivamente). En contraste, en la quinta visita, se observó una mayor seroprevalencia de anticuerpos IgG hacia VLP VPH 16 y 58 en el grupo de persistencia (p=0,001 y p=0,003, respectivamente). Esta respuesta se correlacionó con mayores niveles de anticuerpos en esta visita (media DO405 nm 0,653 y 0,532, respectivamente), en comparación con los niveles de anticuerpos observados en la primera visita (media DO405 nm 0,290 y 0,362, respectivamente). Conclusiones: La presencia de altos niveles de anticuerpos IgG hacia VPH 16 y 58 durante la infección podría estar asociada con la eliminación de la infección.

Objective: To profile IgG and IgA response to the VLP ( virus-like particles) of the human papillomaviruses (HPV) 16, 31 and 58 and to assess the possibility that they may be related to eliminating infection. Methods: A group of 186 women with normal cytology, participants in a cohort study on the natural history of HPV infection, were selected. Three groups were evaluated: control (DNA HPV, n=146 negative), elimination (positive at outset and negative during follow-up, n=25), and persistance (positive during follow-up, n=15). The IgG and IgA antibodies against HPV-VLP 16, 31, and 58 were submitted to ELISA analysis. Results: During the initial visit greater IgG antibody seroprevalence against HPV16-VLP was observed among the elimination group. This prevalence was combined with greater antibody levels in this group in comparison with the levels found among members of the persistence (mean DO405 nm 0.665 vs. 0.290, respectively). In contrast, during the fifth visit, there was greater IgG antibody seroprevalence against HPV-PLV 16 and 58 among the persistance group (p=0.001 and p=0.003, respectively). This response correlated with greater anitbody levels on this visit (mean DO 405 nm 0.653 and 0.532, respectively) in comparison with the antibody levels observed on the first visit (mean DO 405 nm 0.290 and0.362, respectively). Conclusion: High levels of IgG antibodies working against HPV 16 and 58 during infection phase may be associated with elimination of infection.

Asociación de la expresión de IL-10 con la pérdida de respuesta específica th1 a VPH-16 E7 en pacientes con cáncer de cuello uterino / Association of expression of IL-10 with the loss of specific Th1 response to HPV-16 E7 in patients with cervical cancer

Objetivo: Examinar la asociación entre la respuesta celular anti-VPH y la expresión de HLA clase I, HLA-G e IL-10 en céluals tumorales. Materiales y métodos: Linfocitos fueron aislados de 18 pacientes con CCU y estimulados con células dendríticas pulsadas con la proteína E7VPH-16 o directamente con péptidos sintéticos: E751-70´E765-84yE779-98. La células fueron marcadas para CD4,CD69, citoquinas intracelulares IFN-y e IL-4 y analizadas por citometría. La expresión de HLA-G e IL-10 fue analizada por inmunohistoquimica. Resultados: Una pérdida total de la expresión de HLA clae I se observó en 11/18 y regulación negativamente en 4/18 pacientes. La expresión HLA-G se observó EN 11/18 y regulación negativamente en 4/18 pacientes mientras que la expresión IL-10 en 6/17 pacientes. Se observó una asociación inversa entre la expresión de IL-10 y la falta de una respuesta inmune especifica (p=0.041). Ninguna asociación fue observada entre la expresión de HLA clase I o la expresión de HLA-G con la respuesta inmune. Conclusiones: Nuestros resultados subrayan la importancia de otros factores inmunes, como la expresión de IL-10, que podrían influir en la respuesta antitumoral. Estos resultados pueden tener implicaciones importantes durante el desarrollo de nuevas estrategias inmunoterapéuticas.

Types and variants of human papillomavirus in patients with cervical cancer submitted to radiotherapy

INTRODUCTION: high risk HPV infections and variants presence has been associated to increase the risk of cervical cancer. However, there are few studies that analyze the presence of them in patients with cervical cancer before and alter radiotherapy treatment. OBJECTIVES: to analyse the human papilloma virus presence and E7/HPV16 variants in 60 women with cervical cancer before and after radiotherapy. MATERIALS AND METHODS: HPV detection and typing were based on a GP5+/GP6+ PCR – Enzyme immune assay. E7/HPV16 variants were detected by PCR -Single strand conformation polymorphism (SSCP) and confirmed by direct sequence. RESULTS: before radiotherapy, 50/60 patients (83.3 percent) were HPV positive and HPV16 (53.3 percent) was the most prevalent type. After 3 months of radiotherapy, 55 patients attended to consult; of them, 19 (34.6 percent) were HPV positive, this decrease in the HPV detection was significant (p<0.0005). The E7/HPV16 analysis showed that 20 samples (62.5 percent) amplified before radiotherapy, 18 of them (90 percent) had identical SSCP pattern to the prototype and 2 showed a different SSCP pattern. The sequence of these two samples showed silent mutations at nt. 732 (T-to-C), 789 (T-to-C) and 795 (T-to-G). After radiotherapy, the was not detection of new mutations, 6 patients showed persistent HPV16 infection with the same SSCP pattern to the prototype, and samples that initially showed a different SSCP pattern were negative to E7/ HPV16 after radiotherapy. CONCLUSION: few E7/HPV16 variants were detected before radiotherapy and it seems that the treatment did not cause mutations in this gene

Prioridades de investigación para el control del cáncer en Colombia / Research Priorities for Cancer Control in Colombia

Introducción: El cáncer es un problema prioritario de salud pública en Colombia. A pesar de que la problemática es diferente de la observada en países desarrollados, la investigación sigue en muchos casos la orientación de centros con tecnología de punta en países industrializados.Objetivo: definir prioridades de investigación apropiadas al control del cáncer en Colombia.Métodos: hubo cuatro fases: 1) revisión de antecedentes de investigación en cáncer y consulta a investigadores senior, universidades y ONG; 2) foro nacional con participación de investigadores y usuarios del conocimiento; 3) talleres independientes con expertos temáticos (generadores y usuarios del conocimiento) para cada prioridad identificada en el foro nacional; 4) ajuste de líneas por objetivos compartidos y definición de parámetros para seguimiento y evaluación.Resultados: participaron 198 personas entre investigadores (59por ciento) y usuarios del conocimiento (41por ciento) de distintas disciplinas y regiones del país. Se definieron ocho líneas prioritarias, que incluyen desde la biología del cáncer hasta la investigación en políticas para controlarlo. La gestión será evaluada por indicadores de eficiencia administrativa y financiera, productividad académica y apropiación social del conocimiento.Conclusión: el trabajo multidisciplinario evita la orientación por posiciones hegemónicas. La participación de usuarios y generadores de conocimiento permite definir prioridades más adecuadas a las necesidades del país. La falta de centros de investigación especializados y de trayectoria en investigación genera necesidades en un espectro amplio, que pueden ser difíciles de atender. Se espera que las líneas definidas contribuyan significativamente al control del cáncer en Colombia.

Serum levels of insulin-like growth factor-I and -II and insulinlike growth factor binding protein 3 in women with squamous intraepithelial lesions and cervical cancer / Niveles séricos de los factores de crecimiento similares a la insulina I y II y su proteína 3 de enlace en mujeres con lesiones escamosas intraepiteliales y cáncer de cuello uterino

Introduction. Pap smear has limitations as a screening test for cervical cancer. A marker that allows the identification of women who are at risk of developing cervical cancer would be useful for its prevention. A growing number of studies have demonstrated an association between insulin-like growth factors (IGF) serum levels and increased risk for various cancers. Objective. To assess whether circulating IGF-I, IGF-II, or IGF binding protein 3 (IGFBP-3) were associated with cervical cancer and low-grade and high-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL and HSIL). Materials and methods. Serum levels of IGF-I, IGF-II and IGFBP-3 were measured by ELISA. Three groups of cases were analyzed: LSIL (n = 37), HSIL (n = 57), and cervical cancer (n = 41). For each case, two controls, matched by age, were included. Control subjects were women with normal, HPV-DNA-negative Pap smear. Results. Significantly lower values of IGF-I (83.9 ng/ml versus 126.6 ng/ml, p < 0.001) and IGFI: IGFBP-3 molar ratio (0.094 versus 0.137, p < 0.001) were observed among cancer cases, as compared to their control group. Women in the highest quartile of IGF-I and IGF-I:IGFBP-3 molar ratio were at an 80 por ciento (OR = 0.2, 95 por ciento CI [0.06-0.61]) and a 77 por ciento (OR = 0.23, 95 por ciento CI [0.07- 0.73]) lower risk of cervical cancer, respectively, compared with women in the corresponding reference category. Conclusions. These data suggest that low values of IGF-I and IGF-I:IGFBP-3 molar ratio may be associated with cervical cancer.

Extracción de ADN, ARN y proteínas de células cervicales provenientes de cepillados cervicales tomados para citología cérvico-uterina / DNA, RNA and Protein extraction from exfoliated cervical cells taken

Introducción: La citología cérvico-uterina (CCU) en el método más empleado en el tamizaje de lesiones precancerosas de cuello uterino. Sin embargo, la CCU tiene una proporción importante de falsos positivos y negativos, y sólo una minoría delesiones precancerosas identificadas desemboca en cáncer de cuello uterino.Objetivo: Analizar si de los cepillados cervicales es posible extraer ADN, ARN y proteínas útiles para estudios de marcadores de carcinogénesis cervical.Métodos: Se recolectaron 281 cepillados cervicales. ADN, ARN y proteínas de las células cervicales fueron extraídos empleando Trizol. Se realizó PCR para el gen de la beta globina, para evaluar el ADN extraído y RT-PCR de GAPDH y UBC, para evaluar el ARN extraído. Mediante PCR en tiempo real se cuantificó el número de copias de UBC. Las proteínas fueron cuantificadasempleando el método del ácido biscinconínico. Resultados: Nueve muestras fueron negativas para PCR de beta globina (3,2%). Otras nueve fueron negativas para RT-PCRde GAPDH (3,2%), pero 176 fueron negativas para RT-PCR de UBC. Las 105 muestras restantes fueron positivas para UBC empleando PCR en tiempo real. Las proteínas extraídas estuvieron en el rango de 30 a 4559 [mi]g/ml, dos de las 281 muestras fueron negativas para proteínas por el método del ácido biscinconínico. Conclusión: De los cepillados cervicales se puede extraer ADN, ARN y proteínas útiles para la búsqueda de marcadoresmoleculares en cáncer de cuello uterino; sin embargo, por el tipo de muestra analizado se recupera menos ARN. El usode RT-PCR de GAPDH para evaluar la calidad del ADN complementario sintetizado puede dar falsos positivos debido a la presencia de seudogen procesado. Se recomienda el uso de otros genes constitutivos como UBC.

Introduction: Papanicolau (Pap) test is the most employed screening test for precancerous cervical lesions. However, this test has an important proportion of false positives and false negatives, only a minority of the identified lesions will progress to cancer. Objective: To evaluate the remnant of cervical scrapes after the preparation of the slide as source of DNA, RNA and proteinsfor search of molecular markers of progression of precancerous lesions.Methods: DNA, RNA and proteins were extracted from 281 cervical scrapes using Trizol. To evaluate the quality of DNA a PCR for beta globine was used, RNA quality was tested by RT-PCR of GADPH and UBC genes. Real time PCR was used to evaluate the number of RNA copies of UBC gene. The protein level was obtained by the biscinconinic acid method. Results: Nine samples were negative for beta globin PCR (3,2%), 9 samples were negative for GAPDH RT-PCR (3,2%) and 176 samples were negative by UBC RT PCR , the remnant 105 were positive for UBC in real-time PCR. The extracted proteinswere in a rank between 30 and 4559 [mi]g/mL, two of 281 samples were negative for proteins. Conclusion: From cervical scrapes is possible to extract DNA, RNA and proteins usable in biomarkers research, however therecovery of RNA is lower, this can due to some characteristics inherent to the cervical cells. The use of GAPDH as in RT PCR to evaluate DNA quality can generate false positives due to the presence of a processed pseudogen, it is recommended the use of other constitutive gen like UBC.

Actividad de la telomerasa como biomarcador de progresión en lesiones cervicales / Telomerase’s activity as a biomarker of progression in uterine cervical lesions

Los telómeros son secuencias de ADN repetidas en tándem que se encuentran al final de los cromosomas. Con cada ciclo celular los telómeros van disminuyendo su longitud, y cuando el acortamiento llega a ser crítico, se envía una señal que hace que la célula entre en senescencia. La telomerasa es la enzima responsable del mantenimiento de la longitud de los telómeros y su actividad se ha relacionado con los procesos de inmortalización celular, ya que sus niveles de acción sonprácticamente indetectables en tejido sano, y elevados en líneas celulares inmortalizadas y en muestras de cáncer. Estudios en varios modelos de cáncer, incluyendo el de cuello uterino, han mostrado un aumento en los niveles de actividad de la telomerasa a medida que aumenta el grado de lesión. Por esto, la medición de la actividad de esta enzima podría ser utilizadacomo un marcador potencial de progresión tumoral y como una herramienta viable de selección de pacientes queposiblemente van a tener un mayor riesgo de desarrollar cáncer. En este artículo señalamos brevemente las características biológicas de la telomerasa, se reseñan algunos de los trabajos publicados acerca del análisis de su actividad como posible biomarcador de progresión y se profundiza especialmente en el modelo de cuello uterino.

Telomeres are complex structures at the ends of human chromosomes and consist of the repeated DNA sequences. With each cell cycle division, the telomeres decrease in length until the process become critical and results in a signal that triggers the cell senescence. Telomerase is an enzyme responsible to maintain the telomere length and its activity has been associated with the cellular immortalization process. Telomerase activity is highly detected in immortalized cell lines and cancer samples, whereas nonmalignant somatic tissue shows undetectable to no telomerase activity. A number of studies in different cancer models (included cervical cancer) have demonstrated an increase in the telomerase activity with the grade of lesion, for this reason it has been proposed that measurement of telomerase activity might be used as a tumor progression marker and as a useful screening tool to select people that have a higher risk to develop cancer. The aim of this report is to give a description of the biological characteristics of the telomerase, to show a review of some studies done about its possible role as a progression biomarker and finally to go deep about its role into the cervical cancer model.

Modelo para el control de cáncer en Colombia / Model for the control of cancer in Colombia

El documento elaborado pone de presente la inmensa necesidad de trabajar con mayor integración la prevención, el tratamiento, la rehabilitación y el cuidado paliativo; así como deja claro que la definición de estrategias para el control del cáncer debe involucrar grandes fortalezas en el trabajo intersectorial, como lo es el orientado al control del tabaquismo, y en el acercamiento a las comunidades. Esto implica que los planes mas allá de centrarse en los aproximadamente 200.000 pacientes que hoy pueden existir en el país, deben extenderse a la enorme masa de personas en distinto grado de riesgo, con el fin de brindar soluciones que serán efectivas sólo si se aplican oportunamente.

Frecuencia de los genotipos babA2, oipA y cagE de Helicobacter pylori en pacientes colombianos con enfermedades gastroduodenales / BabA2, oipA and cagE Helicobacter pylori genotypes in Colombian patients with gastroduodenal diseases

Introducción. La infección con Helicobacter pylori está asociada con el desarrollo de diferentes enfermedades gastroduodenales. Varios genes de virulencia de H. pylori se han relacionado con mayor riesgo de enfermedad gástrica. Objetivos. El propósito de este trabajo fue determinar las posibles asociaciones entre la presencia de los genes vacA, cagA, cagE, babA2 y oipA en aislamientos de H. pylori de pacientes colombianos y las diferentes consecuencias clínicas de la infección. Materiales y métodos. Mediante PCR se evaluaron los genotipos cagA, vacA, cagE, oipA y babA2 en 166 aislamientos de H. pylori provenientes de 50 pacientes con úlcera péptica, 39 con gastritis crónica no atrófica, 26 con gastritis crónica atrófica, 26 con metaplasia intestinal y 25 con adenocarcinoma gástrico. Resultados. La frecuencia de los genotipos cagA, cagE, babA2 y oipA fue de 73 por ciento, 75 por ciento, 48 por ciento y 74 por ciento, respectivamente. El 64 por ciento (100/157) de los aislamientos presentó el genotipo citotóxico vacAs1m1/cagA positivo/cagE positivo. Se observó una mayor frecuencia de cepas citotóxicas en pacientes con cáncer (84 por ciento), metaplasia (91 por ciento) y úlcera (81 por ciento) en comparación con pacientes con gastritis no atrófica (50 por ciento) (p=0,002, 0,008 y 0,007, respectivamente). La frecuencia de oipA y babA2 fue mayor en cepas citotóxicas que en cepas no citotóxicas (oipA: 81 por ciento vs. 52 por ciento, p=0,003; babA2: 58 por ciento vs. 12 por ciento, p=0,000). No se observaron diferencias significativas en la frecuencia de los genes oipA o babA2 solos o en asociación con vacA y cagA/cagE y las diferentes enfermedades gastroduodenales. Conclusiones. No se encontraron evidencias que sugieran que los genes babA2 u oipA puedan servir como marcadores de ulcerogénesis o carcinogénesis en esta población, solos o en asociación con cagA, cagE o vacA

Presencia del virus de Epstein-Barr en casos colombianos de linfoma de Hodgkin y su relación con la respuesta al tratamiento / Epstein-Barr virus presence in Colombian Hodgkin lymphoma cases and its relation to treatment response

En el desarrollo y patogénesis del linfoma de Hodgkin se ha propuesto al virus de Epstein-Barr como posible factor etiológico debido a la detección de ADN viral en las células de Reed-Sternberg en un subgrupo de tumores y a los altos niveles de expresión de la proteína latente de membrana 1 (LMP-1). El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de virus de Epstein-Barr en 67 ganglios linfáticos de pacientes con diagnóstico confirmado de linfoma de Hodgkin mediante hibridación in situ para la detección de transcritos de ARN del virus de Epstein-Barr e inmunohistoquímica para la detección de la proteína oncogénica LMP-1. La presencia del virus se relacionó con el subtipo histológico, la respuesta al tratamiento de los pacientes y el fenotipo del infiltrado linfocitario. En el 67% de los casos se detectaron transcritos de virus de Epstein-Barr, la proteína LMP-1 se detectó en 56,7% de los casos en la célula tumoral de Reed-Sternberg. La presencia del virus en cada tipo histológico fue de 69,81% en esclerosis nodular, 85,71% en celularidad mixta y 40% en clásico. El virus de Epstein-Barr se detectó con mayor frecuencia en niños (84,2%) en comparación con los adultos (60,4%) y los pacientes positivos para el virus mostraron mejor respuesta al tratamiento, reflejada en una menor tendencia a presentar recaídas. El análisis del infiltrado mostró un predominio de linfocitos T CD4 y presencia de linfocitos T CD8, con mayor expresión de ambas subpoblaciones en casos positivos para virus de Epstein-Barr. Los resultados muestran un alto porcentaje de infección por virus de Epstein-Barr con una probable implicación significativa en la respuesta al tratamiento, lo que sugiere que la detección de virus de Epstein-Barr se podría usar como marcador de pronóstico en este tipo de linfoma.

The role of Epstein-Barr virus as etiologic agent in Hodgkin lymphoma (HL) development has been supported by the detection of viral DNA in the Reed-Sternberg cell in a subset of HL, and the high levels of latent membrane protein 1 expression in these tumors. To gain further evidence of this relationship, lymph nodes from 67 patients with HL were analyzed for the presence of Epstein-Barr virus using EBERs in situ hybridization and LMP-1 immunohistochemistry. Virus presence was related to histological subtype, patients´ treatment response and tumor infiltrating lymphocytes phenotype. EBERs transcripts were found in 67% of the cases and LMP-1 in the Reed-Sternberg tumor cells at a 56.7% rate. The prevalence, as determined by histological subtype, was 69.81% for nodular sclerosing, 85.71% for mixed cellularity and 40% for lymphocyte-rich. Epstein-Barr virus presence was more frequent in children (84.2%) in comparison with adults (60.4%). Positive patients presented higher failure-free survival rates than Epstein-Barr virus negative patients. CD4 positive infiltrating T cells were present in a higher proportion in relation to CD8 positive T infiltrating cells, the mean percentages for both subsets were higher in Epstein-Barr virus positive cases. A high percentage of Epstein-Barr virus was present in HL with a probable association with treatment response. This suggests an application of Epstein-Barr virus detection to use as a prognosis marker in treatment response for HL cases.

Tipificación de virus del papiloma humano mediante secuencia directa en mujeres con citología normal / HPV typing by direct DNA sequencing among women with normal prap smears

Introducción: el virus del pailoma de humano (VPH) se considera un factor etiológico necesario, pero no suficiente, en la carcinogénesis cervical. Aunque la prevalencia de esta infección es homogéa a nivel mundial, la prevalencia tipo-específica varía según la región geográfica. El objetivo de este estudio es determinar mediante secuencia directa la prevalencia tipo-específico de la infección por VPH en una muestra de mujeres jóvenes de Bogotá (Colombia) con citología normal. Materialea y métodos: se determinó la presencia de VPH en cepillados cervicales en 230 mjeres entre 18 y 36 años con citología normal mediante PCR GP5+/GP6+, y mediante la técnica SSCP y secuencia directa se realizó la tipificación de VPH. Resultados: Se encontró una prevalencia de la infección por VPH de 18,2 por ciento. Se detectaron quince tipos de VPH, de los cuales cuatro no se hubieran podido tipificar por métodos convencionales de hibridación. Los cinco tipos más prevalentes fueron el VPH16, VPH31, candidato VPH90, VPH59 y VPH18. La prevalencia de los tipos de alto riesgo fue de 10,4 por ciento y la de los de bajo riesgo, de 4,3 por ciento. de dos tipos identificados se desconoce su potencial oncogénico (HPGA6053 y L1AE9). Conclusión: la secuencia directa de ADN permitió identificar tipos VPH que no hubieran podido ser tipificados con otros métodos, en particular el candidato VPH90, el cual se encontró como el tercero más frecuente en esta muestra. Se confirmó la alta prevalencia de VPH59,tipo viral poco frecuente en regiones diferentes a Centro y Suramérica.

Respuesta serológica a las cápsides de los papilomavirus oncogénicos tipos 16, 18, 31, 33, 39, 58 y 59 en mujeres Colombianas con cáncer de cérvix / Serum response

Introducción: En Colombia, el carcinoma de cérvix es la primera causa de muerte por cáncer de la mujer en edad reproductiva.Se ha demostrado una asociación etiológica entre los virus del papiloma humano (HPV) de alto riesgo y esta neoplasia. La proteína L1 de los HPV tiene la propiedad de autoensamblarse en cápsides vacías(VLP). En varios estudios basados en VLP DE hpv16 o HPV18 se ha observado que la infección por HPV genitales es seguida por una respuesta serológica o proteínas de la cápside. Objetivos: Evaluar la respuesta serológica hacia las VLP de los tipos virales oncogénicos 16,18,31,33,39,58 y 59 en mujeres colombianas con cáncer de cérvix, y en controles y compararlos con la presencia de ADN viral, la edad y el curso clínico. Materiales y Métodos: Se analizó la presencia de anticuerpos hacia las VLP de 7 tipos virales oncogénicos en 147 sueros de mujeres con citología normal apareados por edad, mediante ELISA. Resultados: Se detectaron anticuerpos anti-VLP en 82 por ciento de pacientes y en 56 por ciento de controles. La detección de anticuerpos contra múltiples tipos de HPV fue la regla; en pacientes jóvenes con cáncer de cérvix se observaron altos nivels de anticuerpos. En los casos con seguimiento serológico durante un año, en general, los anticuerpos se mantuvieron en el mismo nivel; sin embargo, en algunos hubo elevación o disminución simultánea de los anticuerpos contra varios tipos virales. Conclusiones:Nuestros resultados confirman (i) la alta tasa de infecciones por HPV en Colombia, tanto en pacientes con cáncer como entre población general, y las particularmente altas tasas de infección por los tipos virales 31 y 58,(ii) la validez de los anticuerpos anti-VLP como marcadores de infecciones en curso o pasadas. La aparición o desaparición simultánea de anticuerpos contra VLP de varios tipos virales sugiere que los anticuerpos detectados en ELISA no son siempre tipoespecíficos.

DNA de HPV y anticuerpos hacia la proteína E7 de HPV16 como factores de Prónostico en mujeres con cáncer de cérvix sometidos a radioterapía / DNA and HPV and antibodies

Los efectos de la infección por HPV en la sensibilidad intrínseca de la célula tumoral a la radioterapí (RT) no son claros.Anticuerpos hacia la oncoproteína viral E7 son detectados de manera consistente en pacientes con cáncer de cérvix; .El Propósito de este estudio fue evaluar la presencia de DNA de HPV y anticuerpos hacia E7 del HPV16 como marcadores potenciales de pronóstico en carcinoma de cérvix.Se incluyeron 58 pacientes con diagnóstico de carcinoma cervical, estadios FIGO IIB y IIIB. Se tomaron muestras de sangre y cepillados cervicales antes de la RT 2 y 6-12 meses después. El DNA de HPV fue detectado por PCR, y los anticuerpos anti E7 fueron medidos por ELISA usando como blancos antigénicos una proteína recombinante de fusión MBP-E7 y dos péptidos sintéticos E7(a.a 1-20) y E7(a.a 66-85). El tiempo medio de seguimiento de las pacientes fue de 35 meses (rango: 2-65 meses). se hizo un análisis univariaado para determinar la significancia estadística de los factores relacionados con el pronóstico.Antes de la radioterapia se detectó DNA de HPV en un 18 por ciento de los casos. No se observaron asociaciones significativas entre el estado viral antes de RT y estadio FIGO, tamaño tumoral o tipo histológico.La presencia de HPV antes de RT y la eliminación del virus después RT se asociaron con un mejor pronóstico: la supervivencia global a 5 años fue del 65,9 por ciento para las pacientes positivas para HPV antes de RT versus el 36.3 por ciento para las pacientes negativas (p=0,038).Se observó una disminución estadísticamente significativa en la detección genérica de DNA de HPV después de la radioterapía. Después de la radioterapía. Después de tres meses 19 pacientes permanecieron poisitivos (p<10-4),después de 6-12 meses, 8 pacientes aún portaban DNA de HPV (p<10-4). La supervivencia global fue del 36 por ciento para pacientes con persistencia viral versus el 75 por ciento para las pacientes en las que el virus fue eliminado luego de la RT (p=0,002).Se detectaron anticuerpos hacia MBP-E7 en el 56,1 por ciento de pacientes, hacia E7(1-20 en el 26,3 por ciento y hacia E7(66-85) en el 31,6 por ciento.Los niveles de anticuerpos hacia la proteína E7 de HPV16 y la detección de HPV antes del tratameinto y en el seguimiento podrían tener una utilidad clínica en el manejo diferencial de las pacientes con carcinoma de cuello uterino localmente avanzado, con miras a una mayor sobrevida.

Los genotipos de helicobacter pylori en gastritis no atrófica difieren de los encontrados en úlcera péptica, lesiones premalignas y cáncer gástrico en Colombia / Helicobacter pylori genotypes in non atrophic gastritis, peptic ulcer disease, premalignant lesions and gastric cancer in Colombia

Background: Helicobacter pylori is recognized as an etiologic agent of several gastric diseases. Bacterial genotypes have been related to clinical outcome in several populations. Aim: To compare cagA, vacA and iceA genotypes of Colombian isolates from patients with several gastrointestinal diseases, including gastric cancer. Material and methods: We used polymerase chain reactions to amplify vacA, cagA and iceA genes of 137 H pylori isolates coming from 26 patients with gastric cancer (GC), 34 with peptic ulcer (PU), 19 with intestinal metaplasia (IM), 23 with atrophic gastritis (AG) and 35 with non atrophic gastritis (NAG). Results: vacA s1-m1, cagA+, iceA+ were the most frequently found genotypes. vacA s1 and m1 subtypes were found in 92 (67 percent) and 82 (60 percent) cases respectively. Sixty three percent were cagA+ and 85 percent were iceA+. There was a lower prevalence of s1 allele in cases of NAG (43 percent), compared with GC, PU and IM (81 percent, 77 percent and 81 percent prevalence, respectively, p <0.01). Isolates from NAG also showed a low frequency of vacA m1 subtype (40 percent) compared with GC or IM (81 percent and 84 percent respectively, p <0.01). The prevalence of cagA+ strains was significantly higher in GC patients (80 percent) than in NAG patients (51.4 percent, p <0.01). No differences in the frequency of vacA s1a, s1b and iceA subtypes, were observed. Conclusions: A lower frequency of cytotoxic H pylori genotypes such as cagA and vacA s1m1 and a higher frequency of non cytotoxic genotypes, was observed in patients with NAG, when compared to patients with GC or PU. These results suggest that even in Colombia, vacA and cagA could be used as markers of increased virulence