Evaluating the use of fluorescence-based flow cytometry assay for dengue diagnosis using peripheral blood mononuclear cells

Abstract INTRODUCTION: Dengue virus (DENV) is the most important arthropod-borne viral disease worldwide with an estimated 50 million infections occurring each year. METHODS: In this study, we present a flow cytometry assay (FACS) for diagnosing DENV, and compare its results with those of the non-structural protein 1 (NS1) immunochromatographic assay and reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). RESULTS: All three assays identified 29.1% (39/134) of the patients as dengue-positive. The FACS approach and real-time RT-PCR detected the DENV in 39 and 44 samples, respectively. On the other hand, the immunochromatographic assay detected the NS1 protein in 40.1% (56/134) of the patients. The Cohen's kappa coefficient analysis revealed a substantial agreement among the three methods. CONCLUSIONS: The FACS approach may be a useful alternative for dengue diagnosis and can be implemented in public and private laboratories.

A retrospective serologic survey of hantavirus infections in the county of Cássia dos Coqueiros, State of São Paulo, Brazil / Inquérito sorológico retrospectivo das infecções por hantavirus no município de Cássia dos Coqueiros, Estado de São Paulo, Brasil

INTRODUCTION: In recent years, hantavirus infections producing severe diseases have obtained an increased attention from public health authorities from the countries of Eurasia to the Americas. Brazil has reported 1,300 cases of hantavirus cardiopulmonary syndrome (HCPS) from 1993 to 2010, with about 80 of them occurring in the northeast of the State of São Paulo, with 48% fatality rate. Araraquara virus was the causative agent of HCPS in the region. Considering that hantaviruses causing human disease in the Americas were unknown until 1993, we have looked for hantavirus infections in the population of Cássia dos Coqueiros county, northeast of the State of São Paulo, Brazil, before this time. This county has about 2,800 inhabitants and an economy based on agriculture, including cultivation of Brachiaria decumbens grass. The grass seeds are an important rodent attraction, facilitating transmission of hantavirus to man. Four HCPS cases were reported so far in the county. METHODS: In this study, 1,876 sera collected from 1987 to 1990 were tested for IgG to hantavirus by IgG-ELISA, using the N recombinant protein of Araraquara virus as antigen. RESULTS: Positive results were observed in 89 (4.7%) samples, which were all collected in 1987. The positivity among urban inhabitants was 5.3%, compared with 4.3% among those living in rural areas. CONCLUSIONS: Our results showed that hantavirus infections occurred in Cássia dos Coqueiros, completely unrecognized, even before hantaviruses were described in the Americas.

INTRODUÇÃO: Infecções graves por hantavírus têm obtido crescente atenção das autoridades da saúde pública da Eurásia e Américas. De 1993 a 2010, o Brasil reportou 1.300 casos de síndrome pulmonar cardiovascular por hantavírus (SPCVH) com, aproximadamente, 80 deles no nordeste do Estado de São Paulo com taxa de fatalidade de 48%. O vírus Araraquara é o agente etiológico da SPCVH nessa região. Considerando que nas Américas as doenças em humanos causadas por hantavírus eram desconhecidas até 1993, procuramos infecções por hantavírus nas populações do município de Cássia dos Coqueiros, nordeste de São Paulo, Brasil, antes dessa data. Esse município tem 2.800 habitantes e economia baseada na agricultura, com intenso cultivo da gramínea Brachiaria decumbens. Sementes de gramíneas têm um papel importante em atrair roedores, facilitando a transmissão de hantavírus para humanos. Nesse município, até o momento 4 casos haviam sido reportados. MÉTODOS:Neste estudo, coletou-se 1.876 soros entre 1987 a 1990 e testamos para pesquisa de IgG contra hantavirus utilizando um ELISA que tem como antígeno a proteína N recombinante do vírus Araraquara. RESULTADOS: Dentre os soros analisados, 89 (4,7%) foram positivos, mostrando que esta infecção já ocorria previamente à descrição dos hantavirus americanos e deve estar ocorrendo há anos nesta região. A positividade entre os habitantes urbanos foi de 5,3% se comparado com 4,3% entre aqueles que viviam em áreas rurais. CONCLUSÕES: Nossos resultados mostraram que as infecções ocorridas por hantavirus foram completamente despercebidas em Cássia dos Coqueiros antes da descrição do hantavirus americano.

Diagnosis of hantavirus infection in humans and rodents in Ribeirão Preto, State of São Paulo, Brazil / Diagnóstico de infecção por hantavírus em humanos e roedores em Ribeirão Preto, Estado de São Paulo

INTRODUCTION: Hantavirus pulmonary and cardiovascular syndrome (HPCS) is an emerging serious disease in the Americas. Hantaviruses (Bunyaviridae) are the causative agents of this syndrome and are mainly transmitted through inhalation of aerosols containing the excreta of wild rodents. In the Ribeirão Preto region (state of São Paulo, Brazil), HPCS has been reported since 1998, caused by the Araraquara virus (ARAV), for which Necromys lasiurus is the rodent reservoir. This study aimed to show diagnostic results relating to infection in humans and rodents, obtained at the Virology Research Center of the Ribeirão Preto School of Medicine, University of São Paulo, between 2005 and 2008. METHODS: HPCS was diagnosed by means of ELISA and/or RT-PCR in 11 (21.2 percent) out of 52 suspected cases, and 54.4 percent of these were fatal. Furthermore, 595 wild rodents (Necromys lasiurus, Akodon sp, Calomys tener and Oligoryzomys sp) were caught between 2005 and 2008. RESULTS: Fifteen (2.5 percent) of these rodents presented antibodies for hantavirus, as follows: Necromys lasiurus (4 percent), Calomys tener (1.9 percent) and Akodon sp (1.5 percent). Nucleotide sequences obtained through RT-PCR from one HPCS patient and one Calomys tener rodent were compared with hantavirus sequences from GenBank, which showed that both were homologous with ARAV. CONCLUSIONS: This work corroborates previous studies showing that ARAV is the hantavirus causing HPCS in the Ribeirão Preto region. It also shows that rodents infected with hantavirus represent a constant risk of transmission of this virus to man.

INTRODUÇÃO: A síndrome pulmonar e cardiovascular por hantavírus é uma doença grave emergente nas Américas. Os hantavírus, Bunyaviridae, são os agentes causadores desta síndrome, causadas, principalmente, pela inalação de aerossóis dos dejetos de roedores silvestres. Na região de Ribeirão Preto, a SPCVH, causada pelo vírus Araraquara, tem sido diagnosticada, desde 1998. O roedor-reservatório do ARAV é o Necromys lasiurus. Este tem como objetivo mostrar os resultados de diagnósticos da infecção de humanos e roedores obtidos no Centro de Pesquisa em Virologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo, durante o período de 2005 a 2008. MÉTODOS: A síndrome pulmonar e cardiovascular por hantavírus foi diagnosticada, por ELISA e/ou RT-PCR, em 11 (21,2 por cento) dos 52 casos suspeitos e destes, 54,4 por cento foram casos fatais. Além disso, também, de 2005 a 2008, foram capturados 595 roedores silvestres, Necromys lasiurus, Akodon sp, Calomys tener e Oligoryzomys sp. RESULTADOS: Quinze (2,5 por cento) destes roedores apresentaram anticorpos para hantavírus. As soropositividades intraespécie ou gênero foram 4 por cento para Necromys lasiurus, 1,9 por cento para Calomys tener e 1,5 por cento para Akodon sp. Sequências nucleotídicas, obtidas pela RT-PCR de um paciente com SPCVH e de um roedor Calomys tener, foram comparadas com sequências de hantavírus do GenBank, o que mostrou que ambas tinham homologia com o ARAV. CONCLUSÕES: Este trabalho corrobora outros estudos que mostram que o ARAV é o hantavírus causador da SPCVH, na região de Ribeirão Preto, além de mostrar que roedores infectados por hantavírus representam um risco constante de transmissão desses vírus para o homem.

Padronização e uso de um método imunoenzimático que utiliza células infectadas como antígeno no diagnóstico rotineiro do dengue / Standardization and use of an immunoenzymatic method using infected cells as antigens in routine diagnosing of dengue

INTRODUÇÃO: Este trabalho mostra a padronização e o uso do método imunoenzimático utilizando células infectadas como antígeno (EIA-ICC) no diagnóstico sorológico rotineiro do dengue. MÉTODOS: Na otimização do teste, com a dose de 1.000 TCID50 de vírus do dengue tipo 3 (DENV-3), foram utilizadas 100.000 células C636 infectadas 1000 TCID50 (DENV-3). RESULTADOS: Os resultados obtidos com EIA-ICC foram comparados com o kit comercial de dengue HUMAN. Os resultados foram altamente coincidentes; o EIA-ICC mostrou-se moderadamente sensível e com alta especificidade. O teste foi usado no diagnóstico sorológico de 1.797 amostras sorológicas de casos suspeitos de dengue durante a epidemia de Ribeirão Preto, em 2006. Na avaliação sorológica, 228 amostras foram positivas para IgM contra DENV-3, e 235 amostras foram positivas para IgG contra DEV-3, e em 35 amostras detectou-se positividade para IgM e IgG. CONCLUSÕES: O EIA-ICC mostrou-se confiável e simples sendo adequado ao diagnóstico sorológico do dengue.

INTRODUCTION: This paper show the standardization and use of the immunoenzymatic method using infected cells as antigens (EIA-ICC) for routine serological diagnosing of dengue. METHODS: In optimizing the test, a dose of 1,000 TCID50 of dengue type 3 virus (DENV-3) was used, and 100,000 C636 cells infected with 1,000 TCID50 (DENV-3) were used. RESULTS: The results obtained with EIA-ICC were compared with the HUMAN commercial dengue kit. The results were highly concordant. The EIA-ICC showed moderate sensitivity and high specificity. The test was used for serologically diagnosing 1,797 blood samples from suspected dengue cases during the 2006 epidemic in Ribeirao Preto. From the serological evaluation, 228 samples were positive for IgM against DENV-3; 235 samples were positive for IgG against DENV-3; and 35 samples were positive for both IgG and IgM. CONCLUSIONS: EIA-ICC was shown to be reliable and simple, and suitable for serologically diagnosing dengue.

Síndrome pulmonar e cardiovascular por hantavírus: aspectos clínicos de uma doença emergente no sudeste brasileiro / Pulmonary and cardiovascular syndrome due to hantavirus: clinical aspects of an emerging disease in southeastern Brazil

A síndrome pulmonar e cardiovascular por hantavírus é doença causada pela aspiração de aerossóis dos dejetos de roedores silvestres contaminados por vírus da família Bunyaviridae. Estudamos manifestações clínicas e laboratoriais de 70 casos ocorridos de 1998 a 2007 na região de Ribeirão Preto, SP. A freqüência de sintomas foi dispnéia (87 por cento), febre (81 por cento), tosse (44 por cento), cefaléia (34 por cento), taquicardia (81 por cento), hipotensão arterial (56 por cento), hipóxia (49 por cento), acidose metabólica (57 por cento), linfocitopenia (51 por cento), hematócrito >45 por cento (70 por cento), leucocitose com desvio à esquerda (67 por cento), creatinina (51 por cento) e uréia (42 por cento) séricas elevadas. A letalidade (54,3 por cento) ocorreu principalmente no 4o dia. Insuficiência respiratória, hipotensão arterial e choque ocorreu 24-48 horas; o hematócrito elevado e a plaquetopenia são sinais fortemente sugestivos da doença. A hipótese diagnóstica de pneumonia atípica associada a bom prognóstico (p:0,0136); a infusão hídrica >2.000ml e hipotensão arterial associadas a mau prognóstico (p:0,0286 e p:0,0453).

Pulmonary and cardiovascular syndrome due to hantavirus is a disease caused by inhalation of aerosols from the excreta of wild rodents contaminated by viruses of the Bunyaviridae family. We studied the clinical and laboratory manifestations of 70 cases that occurred in the region of Ribeirão Preto, SP, Brazil, between 1998 and 2007. The frequency of symptoms was as follows: dyspnea (87 percent), fever (81 percent), coughing (44 percent), headache (34 percent), tachycardia (81 percent), low arterial blood pressure (56 percent), metabolic acidosis (57 percent), lymphocytopenia (51 percent), hematocrit > 45 percent (70 percent), leukocytosis with left deviation (67 percent), creatinine (51 percent) and urea (42 percent). Mortality (54.3 percent) occurred mainly on the fourth day. Respiratory insufficiency, low arterial blood pressure and shock occurred after 24 to 48 hours. High hematocrit and decreased platelet levels were signs strongly suggestive of the disease. The diagnostic hypothesis of atypical pneumonia was associated with a good prognosis (p = 0.0136). Fluid infusion greater than 2,000 ml and arterial hypotension were associated with a poor prognosis (p = 0.0286 and p = 0.0453).

Report on ticks colleted in the Southeast and Mid-West regions of Brazil: analyzing the potencial transmission of tick-borne pathogens to man

Foram coletados espécimes de carrapatos em 1993, 1996, 1997, e 1998, principalmente de animais selvagens e domésticos, nas Regiöes Sudeste e Centro-oeste do Brasil. Nove espécies de Amblyommidae foram identificadas: Anocentor Nitens, Amblyomma cajennense, Amblyomma ovale, Amblyomma fulvum, Amblyomma striatum, Amblyomma rotundatum, Boophilus microplus, Boophilus annulatus e Rtiipicephalus sanguineus. Analisou-se o potencial destas nove espécies de carrapatos como transmissores de patógenos para o homem. Um Flaviviridade Flavivirus foi isolado de espécimes de Amblyomma cajennense coletados de um capivara doente (Hydrochaeris hydrochaeris). Amblyomma cajennense é o transmissor principal da Rickettsia rickettsii (=R rickettsi), o agente causador da febre maculosa no Brasil. Os mamíferos selvagens, principalmente capivaras e veados infestados por carrapatas vivem em próximo contato com gado, cavalos e cachorros, com quem compartilham os mesmos carrapatos, oferecendo risco de transmissäo destas zoonoses silvestres aos animais domésticos e ao homem