RESUMO
La enfermedad de Huntington es un padecimiento neurológico degenerativo, de herencia autosómica dominante, causado por una expansión CAG que codifica una secuencia de poliglutamina en la proteína huntingtina. Su frecuencia varía de cinco a 10 afectados por 100 mil individuos en población caucásica. Clínicamente muestra manifestaciones motoras, cognoscitivas, psicológicas y muerte en 10 a 15 años. Avances concretos se han logrado en el conocimiento del mecanismo mutacional, alteraciones del producto proteico y su efecto neuropatológico. Un conjunto de procedimientos como PCR con o sin modificación del ADN, Southern blot y métodos mixtos son analizados en sus características y eficiencia para el diagnóstico molecular de esta enfermedad.
Huntington's disease (HD) is a neurological degenerative disorder, inherited by an autosomal dominant mode, and caused by a CAG triplet expansion coding for a poly-glutamine sequence in the huntingtin protein. HD affects 5-10 in 100,000 individuals from Caucasian population. Clinically patients display motor, cognitive and psychological impairment, and death within 10-15 years. Concrete advances have been achieved in the knowledge of the mutational mechanism, alteration of the protein product and their neuropathological effects. A number of tests such as PCR with or without DNA modification, Southern blot and mixed methods are analyzed. We describe their characteristics and effectiveness for the molecular diagnosis of HD.
Assuntos
Humanos , Doença de Huntington/diagnóstico , Doença de Huntington/genética , Técnicas de Diagnóstico MolecularRESUMO
α-Thalassemia is one of the most prevalent hemoglobin disorders in the world, in South-East Asians, the--SEA allele is widely found in the HbH disease patients. The purpose of this work is to describe the molecular characteristics of Hemoglobin H disease in three patients from two Mexican families, as well to analyze the DNA sequence of the --SEA allele to determine the precise site of the crossover. The -α3.7 and --SEA alleles were identified using an established long-PCR method modified in our laboratory. The crossover site of --SEA mutation was analyzed by DNA sequencing. The three HbH subjects showed the same genotype -α3.7/--SEA. The -α3.7 allele has been observed in almost every racial studied group, whereas the --SEA allele is predominant in South-East Asian countries. DNA analysis through the breakpoint sites of the --SEA allele in both families showed the 5' breakpoint at the third base of codon 28 in the ψα2 gene and the 3' breakpoint within an Alu-Jo sequence, 1,328 nucleotides upstream of the 3'HVR. Therefore the size of the deletion is 19,303 nucleotides. This is the first report in which the flanking deletion sites of the--SEA mutation have been analyzed in Mexican patients, the 5' and 3' ends of the deletion is well determined.
La Talasemia-α es uno de los desórdenes de la hemoglobina más prevalences en el mundo. En el sureste de Asia, --SEA es el alelo más frecuente en pacientes con enfermedad por HbH (EHbH). En el presente trabajo se describen las características moleculares de tres pacientes con EHbH de dos familias mexicanas, y se analiza la secuencia de DNA del alelo --SEA, para determinar los sitios de ruptura. Los alelos -α3.7y --SEA se identificaron por un método de PCR modificado en nuestro laboratorio y los sitios de ruptura por secuenciación de DNA. Los tres pacientes con EHbH mostraron el genotipo -a3.7/--SEA. El alelo -α3.7 está ampliamente distribuido en el mundo, mientras que el alelo--SEA predomina en los países del sureste de Asia. El análisis de DNA del alelo--SEA mostró en 5' el sitio de ruptura en el codón 28 del pseudogén ψα2 y en 3', dentro de la secuencia Alu-Jo, localizada a 1,328 nucleótidos de la región HVR3', lo que da un segmento delecionado de 19,303 nucleótidos. Éste es el primer reporte en el que se analizan los sitios que flanquean la deleción del alelo --SEA en pacientes mexicanos y se definen con precisión los extremos 5' y 3' de la deleción.