Recomendaciones metodológicas para el monitoreo molecular BCR-ABL1 en pacientes con leucemia mieloide crónica por pcr cuantitativa en tiempo real / Guidelines for molecular monitoring of BCR-ABL1 in chronic myeloid leukemia patients by RT-qPCR

Actualmente las guías clínicas para el manejo de pacientes con leucemia mieloide crónica incluyen el monitoreo molecular de BCR-ABL1 por PCR cuantitativa en tiempo real; esta metodología permite definir la respuesta molecular. A pesar de la probada importancia pronóstica de la respuesta molecular, en muchos casos no se tiene en cuenta que la PCR cuantitativa puede producir datos muy variables, que pueden afectar la validez de los resultados, y hacer difícil la comparación entre diferentes laboratorios. Por lo tanto, para un manejo clínico óptimo, es absolutamente necesaria la estandarización de las metodologías de medición de BCR-ABL1. La estrategia para obtener valores de BCR-ABL1 comparables consiste en la adopción de la escala internacional. La conversión a la escala internacional se logra mediante la aplicación de un factor de conversión específico para cada laboratorio; este factor de conversión se puede obtener mediante el uso de calibradores secundarios validados, que hoy se producen en Argentina, en el marco del programa nacional de armonización. Por otra parte, con el objetivo de mitigar las diferencias entre laboratorios y facilitar criterios uniformes en la interpretación de los resultados y presentación de los informes, decidimos preparar estas guías de laboratorio. Esto permitirá además a los laboratorios poder evaluar su calidad de trabajo, tarea muy importante, en particular para aquellos centros más aislados, que no tienen fácil acceso a costosos kits comerciales o programas internacionales de intercambio de muestras.

Current clinical guidelines for managing chronic myeloid leukemia include molecular monitoring of BCR-ABL1 transcript quantitative reverse-transcription PCR. Despite the proven prognostic significance of molecular response, it is not widely appreciated that quantitative reverse-transcription PCR potentially produces highly variable data, which may affect the validity of results, making comparability between different laboratories difficult. Therefore, standardized reporting of BCR-ABL1 measurements is needed for optimal clinical management. An approach to achieve comparable BCR-ABL1 values is the use of an international reporting scale. Conversion to the international scale is achieved by the application of laboratory specific conversion factor that is obtained by using validated secondary reference calibrators. Moreover, with the aim to mitigate the interlaboratory imprecision of quantitative BCR-ABL1 measurements and to facilitate local laboratory results interpretation and reporting, we decide to prepare laboratory guidelines that will further facilitate interlaboratory comparative studies and independent quality-assessment programs, which are of paramount importance for worldwide standardization of BCR-ABL1 monitoring results, in particular for those most isolated laboratories, with not easy access to commercial kits or sample interchange programs.

GEN MDR-1 y resistencia al imatinib en células K562 / MDR-1 gene and resistance to imatinib in K562 cells

El tratamiento de la Leucemia Mieloide Crónica (LMC) con Imatinib puede fracasar por mutaciones en el dominio tirosina quinasa o amplificación del gen BCR/ABL. Otros mecanismos de refractariedad pueden deberse a los genes de resistencia múltiple a drogas (MDR). Objetivo: Investigar en la línea celular K562 (LMC resistente al Imatinib), la expresión del gen MDRl y los efectos de su inhibición con Ciclosporina A (CyA). Métodos: Se sintetizó ADNc por retrotranscripción del ARN total y se amplificaron por RT-PCR los genes BCR/ABL y MDRl con primers específicos. Se verificó la expresión de la glicoproteína P-gp (producto del gen MDRl) por inmunohistoquímica con 2 anticuerpos monoclonales (C494 y C2l9). Las células K562 fueron enfrentadas (24hs) con Imatinib (2uM), CyA (3ug/ml), Imatinib+Cy A. Se evaluaron apoptosis con naranja de acridina/bromuro de etidio (microscopía de fluorescencia) y función farmacorresistente de P-gp con Rhodamina-l23 (citometría de flujo). Resultados: La expresión del gen MDRl se confirmó tanto por RT-PCRcomo por inmunhistoquímica. La prueba funcional con Rhodamina-l23 indicó que la P-gp fue inhibida por CyA o hipotermia. El tratamiento con Imatinib+Cy A triplicó el porcentaje de apoptosis comparado con Imatinib solo. Conclusión: El gen MDRl jugaría un rol adicional en la resistencia al Imatinib. La Cy A u otros inhibido res de la P-gp, facilitaría la acción del Imatinib, induciendo mayor porcentaje de apoptosis en células BCR/ ABL positivas.