Morphometry of bovine blastocysts produced in vitro in culture media with antioxidants cysteamine or oily extract of Lippia origanoides / [Morfometria de blastocistos bovinos produzidos in vitro em meio de cultura com antioxidantes cisteamina ou extrato oleoso de Lippia origanoides]

This study aimed to evaluate the ultrastructural morphometry of bovine embryos produced in vitro grown at different concentrations of antioxidants. After in vitro maturation and fertilization, the presumptive zygotes were assigned into five treatments. T1) without the addition of any antioxidants (negative control); T2) addition of 50µM/mL cysteamine; and T3, T4 and T5) adding 2.5µg/mL, 5.0µg/mL or 10.0µg/mL of the antioxidants derived from the oily extract from Lippia origanoides, respectively. On D7 of culture, the embryos in the blastocyst stage were fixed and prepared for electron transmission microscopy. These were evaluated for the proportion of cytoplasm-to-nucleus, cytoplasm-to-mitochondria, cytoplasm-to-vacuoles, cytoplasm-to-autophagic vacuoles and cytoplasm-to-lipid droplets. Blastocysts cultured in media containing oily extract of Lippia origanoides presented morphological characteristics such as high cell:mitochondria ratio and low cell:vacuoles and cell:autophagic vacuole ratio, possibly been morphological indicators of embryonic quality. Inner cell mass (ICM) from blastocysts cultured in media without any antioxidants had the highest cell:vacuole ratio. Similar results were found in the trophectoderm (TE) cells of blastocysts from treatment 2. Embryo culture media supplemented with antioxidants derived from Lippia origanoides oil produced embryos with a higher cytoplasmic proportion of organelles, such as mitochondria. Also, treatments without any antioxidants or with the addition of cysteamine presented cytoplasmic vacuolization, a characteristic related to production of poor-quality embryos.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar a morfometria ultraestrutural de embriões bovinos produzidos in vitro e cultivados em diferentes concentrações de antioxidantes. Após a maturação e a fertilização in vitro, os possíveis zigotos foram divididos em cinco tratamentos: T1) sem adição de antioxidantes (controle negativo); T2) adição de 50µM/mL de cisteamina; e T3, T4 e T5) adição de 2,5µg/mL, 5,0µg/mL ou 10,0µg/mL dos antioxidantes derivados do extrato oleoso de Lippia origanoides, respectivamente. No D7 de cultivo, os embriões em estágio de blastocisto foram fixados e preparados para microscopia eletrônica de transmissão. Estes foram avaliados para a proporção entre citoplasma e núcleo, citoplasma e mitocôndria, citoplasma e vacúolos, citoplasma e vacúolos autofágicos e citoplasma e gotículas lipídicas. Blastocistos cultivados em meio contendo extrato oleoso de Lippia origanoides apresentaram características morfológicas como alta relação célula:mitocôndria e baixa relação célula:vacúolos e célula:vacúolo autofágico, possíveis indicadores morfológicos de qualidade embrionária. A massa celular interna (MCI) de blastocistos cultivados em meio sem quaisquer antioxidantes teve a maior razão célula:vacúolo. Resultados semelhantes foram encontrados nas células do trofectoderma (TE) de blastocistos do tratamento 2. Portanto, o meio de cultivo embrionário suplementado com antioxidantes derivados do óleo de Lippia origanoides produziu embriões com maior proporção citoplasmática de organelas, como mitocôndrias. Além disso, tratamentos sem antioxidantes ou com adição de cisteamina apresentaram vacuolização citoplasmática, característica relacionada à produção de embriões de baixa qualidade.(AU)

Squamous metaplasia of the rete ovarii do not suppress ovarian cyclicity and pregnancy in cattle: case report / [Metaplasia escamosa da rete ovarii não interrompe a ciclicidade ovariana e a gestação em bovinos: relato de caso]

Squamous metaplasia of the rete ovarii is an ovarian pathologic change characterized by replacement of the normal single layered cuboidal epithelium of the rete ovarii by a stratified squamous keratinized epithelium. Uterus and ovaries from a local slaughterhouse pregnant crossbreed cow were evaluated through ultrasound, macroscopically and histologically. Grossly, there were multiple cysts in both ovaries, which were histologically characterized as rete ovarii cysts with squamous metaplasia and intraluminal accumulation of keratinized material. Squamous metaplasia of the rete ovarii has been previously reported in cows, however this is the first report of this condition in a pregnant animal, demonstrating that this ovarian change is compatible with pregnancy.(AU)

A metaplasia escamosa da rete ovarii é uma patologia ovariana caracterizada pela substituição do epitélio simples cuboidal normal da rete ovarii por um epitélio estratificado escamoso queratinizado. Útero e ovários de uma vaca mestiça gestante, proveniente de abatedouro, foram avaliados por ultrassonografia, macroscopia e histologia. Verificaram-se vários cistos em ambos os ovários, histologicamente caracterizados como cistos de rete ovarii com metaplasia escamosa, com acúmulo intraluminal de material queratinizado. Metaplasia escamosa da rete ovarii foi relatada anteriormente em vacas, porém este é o primeiro relato em que essa alteração ovariana é compatível com manutenção da ciclicidde ovariana e gestação na vaca.(AU)

Idade à puberdade e características reprodutivas de novilhas mestiças F1 Holandês x Gir com fenótipos divergentes para consumo alimentar residual / [Age at puberty and reproductive characteristics of F1 Holstein x Gyr crossbred heifers with divergent phenotypes for residual feed intake]

A relação da eficiência nutricional com a idade e o peso à puberdade e as características reprodutivas foram estudadas em 35 novilhas F1 Holandês x Gir, em ensaios usando o consumo alimentar residual (CAR) nos períodos pós-desaleitamento (PD) e pós-puberdade (PP). Novilhas PD (P<0,0001) e PP (P<0,001) foram ranqueadas como de alta, intermediária e baixa eficiências e apresentaram CAR de -0,259 -0,014 e 0,346kg/dia e -0,848 -0,096 e 0,842kg/dia, respectivamente. Novilhas PD diferiram (P<0,05) na idade à puberdade entre ranques de alta, intermediária e baixa eficiências, em média, aos 339,7; 346,4; 315,3 dias, respectivamente. Os pesos à puberdade de novilhas PD com alta, intermediária e baixa eficiências foram, em média, de 321±28,1kg e não diferiram (P>0,05) entre CAR. Não foi verificada correlação entre diâmetro folicular, taxa de crescimento do folículo, número de ondas foliculares no ciclo estral e taxa de gestação à primeira IA com o CARPD ou CARPP. Novilhas F1HG selecionadas para CAR com baixa eficiência podem ter idade à puberdade 10 dias a mais, quando comparadas às novilhas de alta eficiência para CAR. Não foi verificado que novilhas selecionadas para alta ou baixa eficiências alimentares, usando CAR, tivessem algum impacto negativo sobre características reprodutivas avaliadas.(AU)

The relationship between nutritional efficiency and age and weight at puberty and reproductive traits was studied in 35 F1 Holstein x Gyr heifers, in trials using residual food consumption (CAR) in the post-weaning (PW) and post-pubertal (PP) periods. PD heifers (P<0.0001) and PP (P<0.001) were classified as high, intermediate and low efficiencies and presented CAR of -0.259 -0.014 and 0.346kg/day and -0.848 -0.096 and 0.842kg/day, respectively. PD heifers differed (P<0.05) in age at puberty between high, intermediate and low efficiencies, on average, at 339.7, 346.4 and 315.3 days, respectively. The weight at puberty of PD heifers with high, intermediate and low efficiencies were, on average, 321±28.1kg and did not differ (P>0.05) between CAR. No correlation was found between follicular diameter, follicle growth rate, number of follicular waves in the estrous cycle and pregnancy rate at 1st AI with the CARPD or CARPP. F1HG heifers selected for CAR with low efficiency can be aged at puberty 10 days longer when compared to high-efficiency heifers for CAR. These results did not show that heifers selected for high or low food efficiency, using CAR, had negative impact on the reproductive characteristics evaluated.(AU)

Ultraestrutura e criopreservação de sêmen de jundiá amazônico (Leiarius marmoratus) em cativeiro / Ultrastructure and sperm cryopreservation of the amazon catfish (Leiarius marmoratus) in captivity

Os objetivos do presente estudo foram analisar a ultraestrutura do espermatozoide do jundiá amazônico e avaliar a sua criopreservação com três agentes crioprotetores (metanol 10%, DMSO 10% e etilenoglicol 10%) e duas soluções ativadoras (NaCl 0,29% e NaHCO3 1%). Como diluente, foi utilizada uma solução de glicose a 5%, sendo o sêmen envasado em palhetas de 0,25mL e congelado em vapor de nitrogênio (botijão dry shipper). No sêmen fresco, o espermatozoide apresentou comprimento de 25,46±2,54µm, cabeça esférica (1,51±0,18µm), ausência de acrossoma, peça intermediária com formato cônico (0,93±0,17µm), ligeiramente assimétrica, com presença de vesículas, e flagelo único (21,48±2,45µm). O sêmen descongelado apresentou valores mais altos (P<0,05) para duração, vigor e taxa de motilidade espermática com os crioprotetores metanol 10% e DMSO 10%. A duração da motilidade espermática foi maior (P<0,05) com o ativador NaHCO3 1% (21-96 s). O sêmen de Leiarius marmoratus criopreservado com DMSO e metanol apresentou, respectivamente, 7,32±4,21% e 8,94±6,69% de taxa de motilidade. No entanto, os resultados não foram satisfatórios para estabelecer um protocolo para a espécie.(AU)

The aims of this study were to describe the spermatozoon ultrastructure and to evaluate the sperm cryopreservation of the amazon catfish with three cryoprotectant agents (10% methanol, 10% DMSO, and 10% ethylene glycol) and two activator agents (0.29% NaCl and 1% NaHCO3). Glucose 5% extender was used as a diluent solution and sperm loaded in 0.25 straws was frozen in nitrogen vapor (dry shipper). Fresh spermatozoon was 25.46±2.54µm long, the head was spherical (1.51±0.18µm) with no acrosome, the midpiece was cone shaped (0.93±0.17µm) with presence of vesicles, slightly asymmetric, and the flagellum was single (21.48±2.45µm). Post-thawed semen presented higher values (P< 0.05) for duration, vigor and sperm motility rate with cryoprotectants 10% methanol and 10% DMSO. The duration of sperm motility was longer (P< 0,05) when triggered in 1% NaHCO3 (96-21 s). Leiarius marmoratus semen cryopreserved with DMSO and methanol, presented respectively 7.32±4.21% and 8.94±6.69% of motility. However, the results were not satisfactory to establish a protocol for the specie.(AU)

Antioxidant activity of oily extract obtained from Lippia origanoides improves the quality of bovine embryos produced in vitro / Atividade antioxidante de óleo essencial obtido de Lippia origanoides melhora a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro

The aim of this study was to evaluate the supplementation of embryo culture medium with antioxidant obtained from oily extract of Lippia origanoides on in vitro blastocyst development and quality. Oocytes collected from slaughterhouse ovaries were matured and fertilized in vitro following standard laboratory procedures. Zygotes were cultured in SOF medium supplemented according to the following treatments: T1 embryo culture medium without antioxidant supplementation; T2)50µM/mL Cysteamine; T3)2.5µg/mL; T4)5.0µg/mL and T5)10.0µg/mL of antioxidant obtained from oily extract of Lippia origanoides. On the seventh day of culture, the blastocysts were fixed and evaluated for apoptosis rates, number of total cell and inner cell mass cells by means of the TUNEL Test. The use of antioxidants during cultivation did not increase (P> 0.05) the final blastocyst production rate. The treatments T2, T3, T4 and T5 had the lowest (P< 0.05) apoptotic indexes (4.5±1.1%, 8.4±2.5%, 3.4±1.1% and 5.5±0.9%, respectively) when compared to T1 treatment (10.0±1.4%). The number of inner cell mass did not differ (P> 0.05) among embryos from different treatments. The addition of antioxidant obtained from oily extract of Lippia origanoides reduces the apoptosis rate and improves the quality without increasing the total in vitro production of bovine embryos.(AU)

O objetivo desse estudo foi avaliar a suplementação de meio de cultura de embriões com antioxidante obtido do extrato oleoso da Lippia origanoides no desenvolvimento e na qualidade de blastocistos produzidos in vitro. Oócitos coletados de ovários de matadouros foram maturados e fertilizados in vitro segundo procedimento laboratorial padrão. Zigotos foram cultivados em meio SOF suplementado de acordo com os seguintes tratamentos: T1) meio de cultivo embrionário sem suplementação antioxidantes; T2) 50µM/mL Cisteamina; T3) 2,5µg/mL; T4) 5,0µg/mL e T5) 10,0µg/mL do antioxidante obtido do extrato oleoso de Lippia origanoides. No sétimo dia de cultivo, os blastocistos foram fixados e avaliados para taxa de apoptose, número total de células e massa celular interna através do teste TUNEL. O uso de antioxidantes durante cultivo não aumentou (P>0,05) a taxa de produção final de blastócitos. Os tratamentos T2, T3, T4 e T5 tiverem menor índice apoptótico (p>0,05 - 4,5±1,1%, 8,4±2,5%, 3,4±1,1% e 5,5±0,9%, respectivamente) quando comparados a T2 (10,0±1,4%). O valor de massa celular interna não diferenciou (p>0,05) entre embriões de diferentes tratamentos. A adição de antioxidante obtido do extrato oleoso de Lippia origanoides reduziu a taxa de apoptose e melhorou a qualidade sem aumentar a produção in vitro de embriões bovinos.(AU)

Efeito da adição do ácido linoleico conjugado no cultivo in vitro de embriões F1 Holandês x Zebu na sobrevivência pós-vitrificação / Effect of conjugated linoleic acid addition in in vitro culture medium in F1 Holstein X Zebu embryo survival post vitrification

Avaliou-se o efeito da adição do ácido linoleico conjugado (CLA) ao meio de cultivo in vitro na viabilidade pós-vitrificação de embriões F1 Holandês x Zebu. Foram utilizados três meios de cultivo: controle (n=340 oócitos): meio SOF e soro fetal bovino (SFB), sem o CLA; SFB+CLA (n=359 oócitos): meio SOF, SFB e CLA; CLA (n=339 oócitos): meio SOF e CLA, sem o SFB. Todos os blastocistos produzidos foram submetidos à vitrificação, pelo método de Open Pulled Straw. Quinze blastocistos de cada tratamento foram fixados para quantificação lipídica por coloração com Sudan Black B. Para avaliar a viabilidade embrionária, foi observada a capacidade de reexpansão e eclosão pós-aquecimento dos embriões (controle=27; SFB+CLA=30; CLA=17). Foram realizadas transferências em um ou dois embriões por receptora para avaliação da sobrevivência in vivo: T1 [receptoras que receberam um blastocisto (n=17 embriões, sendo controle=5, SFB+CLA=6 e CLA=6)]; T2 [receptoras que receberam dois blastocistos, (n= 54 embriões, sendo controle=18, SFB+CLA=14 e CLA=22)]. Não houve diferença nas taxas de clivagem (62,1%; 74,0%; 74,0% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente), produção de blastocistos em relação aos clivados (59,7%; 47,7%; 38,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) e produção de blastocistos em relação ao total de oócitos (37,1%; 35,4%; 28,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) (P>0,05). Houve diminuição de gotículas lipídicas nos embriões cultivados em meio suplementado com CLA em relação aos embriões cultivados na presença do SFB e na ausência do CLA (P<0,05). A taxa de reexpansão foi maior no grupo controle (70,4%) em relação ao CLA (47,1%) e menor no grupo SFB+CLA (43,3%) (P<0,05). O CLA foi eficaz em reduzir a deposição de lipídeos intracitoplasmáticos nas células embrionárias, porém não houve diferença de viabilidade após a desvitrificação dos embriões.(AU)

The effect of adding conjugated linoleic acid (CLA) to the culture media on the viability after cryopreservation of F1 Holstein X Zebu embryos was evaluated. Three different culture media were tested: control (n = 340 oocytes): SOF medium and fetal bovine serum (FBS) without the CLA; FBS + CLA (n = 359 oocytes): SOF, FBS and CLA; CLA (n = 339 oocytes): SOF and CLA without the FBS. The produced blastocysts were subjected to vitrification, by the Open Pulled Straw method. Fifteen blastocysts per treatment were fixed for lipid quantification by staining with Sudan Black B. Embryo re-expansion and hatching capability were used to assess viability (control = 27; FBS + CLA = 30; CLA = 17). Transfers of one or two embryos to recipients were performed to evaluate in vivo survival: T1 [recipients that received one blastocyst (n=17 embryos, Control=5, FBS+CLA=6 and CLA=6)]; T2 [recipients that received two blastocysts (n =54 embryos, Control=18, FBS+CLA=14 and CLA=22)]. There was no difference in cleavage rate (62.1%; 74%; 74% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively), blastocyst production in relation to the cleaved structures (59.7%; 47.7%; 38 3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) and blastocyst production relative to the total oocytes (37.1%, 35.4%, 28.3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) between treatments (P> 0.05). A reduction of lipid droplets was observed in embryos cultured in medium supplemented with CLA compared to embryos cultured in the FCS in the absence and presence of CLA (P <0.05). The reexpansion rate was higher in the Control group (70.4%) compared to the CLA (47.1%) and lowest for FBS+CLA (43.3%) (P<0.05). The hatching rates were similar among treatments, 42.1%; 23.1%; 25% for control; SFB + CLA; CLA respectively (P>0.05). Only one pregnancy was observed in early and confirmatory diagnosis, as the result of a Control group embryo transfer. Although embryos cultured with CLA have shown smaller intracytoplasmic lipid content, no difference was observed in viability following vitrification between treatments.(AU)

Endometrial transcription of microbial molecular patterns receptors in Gyr and F1 Holstein x Gyr postpartum cows / Transcrição endometrial de receptores de padrões moleculares microbianos em vacas Gir e F1 Holandês x Gir após o parto

Zebu and Holstein x Zebu crossbred have low incidence of uterine infection when compared to Holstein cows. Resistance to uterine infections may be associated with the ability to recognize invading microorganisms. Endometrial transcription of microbial molecular patterns receptors has been investigated in the postpartum period of Holstein cows, but it is completely unknown in Zebu or Holstein x Zebu cows. In this study, 9 Gyr and 12 F1 Holstein x Gyr cows were submitted to endometrial biopsies at the first and seventh days postpartum, with the objective to measure transcription levels of toll-like receptors (TLRs) 1/6, 2, 4, 5, and 9; nucleotide-binding oligomerization domain (NOD)-like receptors 1 and 2; and coreceptors cluster of differentiation 14 (CD14) and myeloid differentiation protein-2 (MD-2). There was a significant (P<0.05) decrease in transcription of TLR5 in Gyr, and an increase in transcription of TLR9 in F1 cows, between the first and seventh day postpartum. Both groups had low incidences of uterine infections up to 42 days postpartum. Uterine involution completed at 27.7 ± 10.1 and 25.1 ± 4.7 days postpartum for Gyr and F1 cows, respectively. In Gyr cows, higher transcription levels of TLR1/6 and NOD1 correlated to a longer period required for uterine involution. In F1 cows, lower levels of TLR1/6, TLR2 and NOD2 correlated to a longer period required for uterine involution. In conclusion, some pathogen recognition receptors associated significantly with the time required for uterine involution in Gyr and F1 cows.(AU)

Vacas Zebu e mestiças Holandês x Zebu apresentam baixas incidências de infecções uterinas quando comparadas às Holandesas. A resistência às infecções uterinas pode estar relacionada com a capacidade de reconhecimento dos microrganismos invasores. A transcrição endometrial de receptores de padrões moleculares microbianos tem sido investigada em vacas Holandesas recém-paridas, porém ainda é desconhecida em vacas Zebu e mestiças Holandês x Zebu. No presente estudo, nove vacas Gir e 12 F1 Holandês x Gir foram submetidas a biópsias endometriais no primeiro e no sétimo dia após o parto, com o objetivo de mensurar os níveis de transcrição gênica dos receptores tipo Toll (TLRs) 1/6, 2, 4, 5 e 9; receptores tipo NOD 1 e 2; e dos coreceptores CD14 e MD-2. Houve diminuição significativa (P < 0,05) do nível de transcrição de TLR5 em vacas Gir e aumento da transcrição de TLR9 em vacas F1, entre o primeiro e o sétimo dia após o parto. Os dois grupos apresentaram baixas incidências de infecções uterinas até 42 dias pós-parto. O período de involução uterina foi de 27,7 ± 10,1 e 25,1 ± 4,7 dias pós-parto, para vacas Gir e F1, respectivamente. No grupo de vacas Gir, altos níveis de transcrição de TLR1/6 e NOD1 tiveram correlação significativa com o prolongamento do período de involução uterina. No grupo de vacas F1, baixos níveis de transcrição de TLR1/6, TLR2 e NOD2 foram associados a maiores períodos de involução uterina. Portanto, os níveis de transcrição endometrial de alguns receptores de padrões moleculares microbianos na primeira semana após o parto podem estar relacionados com o tempo requerido para ocorrência da involução uterina em vacas Gir e F1.(AU)

Modelo experimental de endometrite em vacas inoculadas com Escherichia coli inativada por meio de infusão uterina / Endometritis experimental model in cows inoculated with inactivated Escherichia coli by uterine infusion

The aim of this study was to evaluate the endometrial inflammatory response of nine Zebu cows inoculated through uterine infusion with 30 mL of inactivated Escherichia coli suspension (1 x 109 UFC/mL) and nine with 30 mL of sterile phosphate buffered saline. Endometrial biopsies were performed before and after the inoculations during estrus, and ten days later in the diestrus phase. Neutrophilic infiltrates were observed in 88.8% of samples from the E. coli group in estrus phase and demonstrated different degrees of endometrial inflammation. This study characterizes a suitable model for studying endometritis in cattle.(AU)

Clinical and pathological presentation of squamous metaplasia of the rete ovarii in a Zebu cow / Apresentação clínica e patológica de um caso de metaplasia escamosa da rete ovariana em vaca Zebu

Squamous metaplasia of rete ovarii is characterized by replacement of the normal cuboidal epithelium of rete ovarii by a keratinized stratified scamous epithelium, leading to accumulation of keratinized material within the tubules and cystic dilatation of rete ovarii. The present study decribes a case of scamous metaplasia of rete ovarii in a 10 year old Zebu cow, including clinical, surgical, ultrasonographic, histopathological and hormonal findings. At first ultrasound examination the cow had lightly asymmetric ovaries with follicles presenting echogenicity similar to luteinized follicular cysts. After transvaginal follicular aspiration creamy yellowish sanguineous-purulent content was recovered. After unilateral ovariectomy the ovary was sectioned and brownish viscous material drained from cystic cavity. Histopathology confirmed the diagnosid of squamous metaplasia of the rete ovarii. Progesterone concentrations assessed by chemiluminescent enzyme immunoassay within different time periods after ovariectomy showed that pathology did not compromise normal luteal ovarian activity in a contralateral reminiscent ovary.

A metaplasia escamosa de rete ovarii é caracterizada pela substituição do epitélio cúbico normal da rete ovarii por um epitélio escamoso estratificado queratinizado, levando ao acúmulo de material queratinizado dentro dos túbulos e à dilatação cística da rete ovarii. O presente estudo descreve um caso de metaplasia escamosa de rete ovarii em uma vaca Zebu de aproximadamente 10 anos, incluindo aspectos clínico, cirúrgico, ultrassonográfico, histopatológico e dos achados hormonais. Ao primeiro exame ultrassonográfico, a vaca tinha ovários levemente assimétricos e com folículos apresentando ecogenicidade semelhante à dos cistos foliculares luteinizados. Após a aspiração folicular por via transvaginal, foi recuperado conteúdo sanguinopurulento amarelado e de aspecto cremoso. Após a ovariectomia unilateral, o ovário foi seccionado, permitindo a drenagem de material de aspecto viscoso amarronzado da cavidade cística. A histopatologia confirmou o diagnóstico de metaplasia escamosa da rete ovarii. As concentrações de progesterona avaliadas por quimioluminescência, em diferentes períodos de tempo após a ovariectomina unilateral, mostrou que a patologia não comprometeu a atividade ovariana normal do ovário contralateral remanescente.

Detecção de Theileria equi e Babesia caballi e anticorpos anti-Ehrlichia spp. em equídeos do Pantanal Mato-Grossense, Brasil / Detection of Theileria equi, Babesia caballi and anti-Ehrlichia spp antibodies in equides from the Pantanal of Mato Grosso State

O presente estudo avaliou equídeos de 19 fazendas da região do Pantanal Mato-Grossense, sendo 121 equídeos testados pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), para detectar fragmentos dos genes dos seguintes gêneros: Babesia, Theileria, Anaplasma, Ehrlichia, e Neorickettsia, e pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), para detectar anticorpos anti-Ehrlichia spp. Das amostras testadas na PCR, 17 (14,0%) animais de nove (47,3%) fazendas foram positivos. Das amostras positivas, 16 foram 100% idênticas a sequencias de Theileria equi e uma foi 99% similar à sequência de Babesia caballi, todas disponíveis no GenBank. Pela RIFI, 48 (39,6%) equídeos foram soropositivos para antígenos de E. canis, sendo 40 (83,3%) amostras com títulos de 40 e oito (16,6%) com títulos de 320. Todas as fazendas avaliadas (100%) apresentaram equídeos soropositivos. Os resultados do presente estudo demonstram que T. equi e B. caballi infectam equinos na região, e a presença de anticorpos anti-Ehrlichia spp. indica a circulação de espécies antigenicamente relacionadas aos gêneros Ehrlichia e Anaplasma, apesar de a negatividade nos exames de PCR indicar provável processo crônico desses agentes.

The present study evaluated 121 equids from 19 ranches in the Pantanal region of Mato Grosso State through Polimerase Chain Raction (PCR) to detect Babesia, Theileria, Anaplasma, Ehrlichia and Neorickettsia partial genes and the Imunofluorescent Antibody Test (IFAT) to evaluate anti-Ehrlichia spp. antibodies. From the total tested in PCR, 17 (14.0%) equids from 9 (47.3%) farms were positive, and 16 yielded amplicons 100% identical to Theileria equi and one presented 99% similarity to Babesia caballi available on GenBank. Forty eight (39.6%) equids were positive by IFAT and 40 showed titers of 40 (83.3%) and 8 showed titers of 320 (16.6%). All ranches (100%) presented seropositive equids. Our results showed that T. equi and B. caballi are infecting equids in the region and the presence of anti-Ehrlichia antibodies suggests that species closely related to the genera Ehrlichia and Anaplasma are circulating among the equid local population. Moreover, the negative results in PCR is possibly related to the chronic infection phase.

Aspectos reprodutivos e produtivos de vacas da raça Holandesa com puerpério normal ou patológico / Reproductive and productive parameters of Holstein cows with normal or pathological puerperium

Foram avaliadas 103 vacas da raça Holandesa de primeira, segunda ou terceira ordens de lactação, com o objetivo de comparar aspectos reprodutivos e produtivos dos animais com puerpério normal ou patológico. Exames ginecológicos foram realizados semanalmente, do parto ao final do puerpério, por meio de palpação transretal, ultrassonografia e vaginoscopia. As incidências de partos gemelares, partos auxiliados, retenção de placenta e infecções uterinas até o primeiro serviço foram de 11,7%, 20,4%, 38,8% e 75%, respectivamente. A involução uterina e a primeira ovulação ocorreram aos 33,5±11,1 e 43,6±21,5 dias após o parto, respectivamente, com diferenças (P<0,001) entre vacas com ou sem infecção uterina. O primeiro serviço ocorreu aos 75,9±31,0 dias após o parto e a taxa de gestação foi de 20,7%. A produção de leite diária foi de 27,9±7,3 litros por vaca até 42 dias após o parto. O prejuízo com a redução na produtividade e o descarte do leite contaminado com resíduos de antibiótico foi equivalente a 598 litros de leite por vaca com retenção de placenta e infecção uterina. A alta incidência de transtornos puerperais interferiu na fertilidade e na produção de leite, causando elevado impacto econômico para a propriedade.

The study was performed with 103 Holstein cows of first, second or third orders of lactation, and aimed to compare reproductive and productive parameters of animals with normal or pathological puerperium. Uterine and ovarian examinations were performed weekly until 42 days after parturition, by rectal palpation, vaginoscopy and ultrasonography. The incidence of twin pregnancies, assisted births, retained placenta, and uterine infection until the first service, were 11.7%, 20.4%, 38.8% and 75%, respectively. Uterine involution and detection of the first corpus luteum occurred at 33.5±11.1 and 43.6±21.5 days after parturition, respectively, and differed (P<0.01) between cows with or without uterine infection. The first artificial insemination occurred in average at 75.9±31.0 days after parturition, and the pregnancy rate was 20.7%. Average daily milk yield was 27.9±7.3 liters/cow until 42 days after parturition. Financial losses related to decreased milk production and discarding of milk contaminated with antibiotic residues corresponded to 598 liters of milk/cow presenting retained placenta and uterine infection. The high incidence of puerperal diseases negatively affected the fertility and milk production, causing large economic impact to the milk production system.

Reproductive parameters of Santa Inês ewes submitted to short-term treatment with re-used progesterone devices / Características reprodutivas de ovelhas Santa Inês que receberam dispositivos de progesterona reutilizados

The aim of this study was to verify the efficacy of reusing intravaginal progesterone (P4) devices on the reproductive parameters in Santa Inês ewes. Females received intravaginal P4 devices for their first, second or third use for five days plus 300 IU eCG IM and 5mg dinoprost laterovulvar 24h before device removal. Blood was collected at different moments. Transrectal ultrasonography was performed from device removal to ovulation. Part of the ewes were submitted to artificial insemination by laparoscopy (IAL - n=55) with fresh semen, whereas the rest were bred by fertile rams (n=41). On the initial 18 h, ewes that received devices for the first time showed higher P4 concentrations (5.1±1.8 vs 3.5±1.4 vs 2.4±1.1 - P<0.05). However, after the first 48h no difference was observed among all treatments and P4 supraluteal concentrations were detected in all ewes upon device removal. Estrous response, interval from device removal to estrus, rate of ovulating animals, number of ovulations, time from device removal to ovulation and average conception rates after IAL or natural mating were similar among all 3 groups. Intravaginal progesterone devices can be used up to three times without altering reproductive parameters in Santa Inês ewes.

Avaliou-se a eficácia da reutilização de dispositivos intravaginais de progesterona (P4) sobre características reprodutivas em ovelhas Santa Inês. As fêmeas receberam dispositivos intravaginais contendo P4 para o seu primeiro, segundo ou terceiro uso por cinco dias, associado a 300 UI eCG IM e 5mg dinoprost laterovulvar 24h antes da remoção dos dispositivos. Ultrassonografia transretal foi realizada da remoção dos dispositivos até a ovulação. Parte das ovelhas foi submetida à inseminação artificial laparoscópica (IAL- n=55) com sêmen a fresco, enquanto outra parte foi acasalada por machos férteis (n=41). Nas 18 h iniciais, as ovelhas que receberam dispositivos pela primeira vez apresentaram maior concentração de P4 (5.1±1.8 vs 3.5±1.4 vs 2.4±1.1 - P<0.05). Entretanto, após as primeiras 48h nenhuma diferença foi observada entre os tratamentos quanto as concentrações circulantes de progesterona. Foram encontradas concentrações de progesterona supraluteais em todas as ovelhas na retirada dos dispositivos. Estro, intervalo da retirada ao estro, taxa de animais que ovularam, número de ovulações, momento da retirada à ovulação e taxa média de concepção após IAL ou monta natural foram similares entre os tratamentos. Dispositivos intravaginais de progesterona podem ser usados até três vezes sem alterar as características reprodutivas de ovelhas Santa Inês.

Determinação de óleos essenciais de alfavaca (Ocimum gratissimum L. ), orégano (Origanum vulgare L. ) e tomilho (Thymus vulgaris L.) / Determination of essential oils of basil (Ocimum gratissimum L. ), oregano (Ocimum gratissimum L. ) and thyme (Thymus vulgaris L.)

O presente trabalho teve como objetivo a caracterização de plantas frescas e secas (comerciais) de alfavaca, orégano e tomilho, a obtenção dos óleos essenciais através do método de arraste a vapor e a quantificação dos compostos químicos por CG/EM. As plantas frescas e as secas comerciais foram submetidas às análises de umidade, extrato etéreo, proteína, fibra bruta, cinzas, extrato não nitrogenado, valor calórico, teor de óleo essencial e identificação dos compostos majoritários através da cromatografia gasosa-espectrometria de massas. Dentre a caracterização obtida os resultados na base seca mostraram-se promissores, sendo o teor de proteína e de cinzas na alfavaca seca comercial com 17,34 g 100 g-1 e 8,12 g 100 g-1, respectivamente; a fibra bruta no orégano seco comercial com 15,65 g 100 g-1; o extrato etéreo, o extrato não nitrogenado e o valor calórico no tomilho seco comercial com 9,30 g 100 g-1, 52,72 g 100 g-1 e 356,74 Kcal 100 g-1, respectivamente. Obteve-se o maior rendimento de óleo essencial na alfavaca seca comercial com 1,02%, enquanto a alfavaca fresca apresentou o menor rendimento, com apenas 0,13%. Na alfavaca fresca encontrou-se 87,38% de eugenol e 6,27% de timol, enquanto na alfavaca seca comercial observou-se redução no eugenol (71,12%) e aumento do timol (13,28%). No orégano fresco foram quantificados quatro picos o γ-terpineno (33,45%), 4-terpineol (25,59%), timol (14,21%) e carvacrol (2,30%). Já no óleo essencial de orégano seco comercial houve redução no γ-terpineno (28,73%) e aumento no 4-terpineol (27,58%), timol (19,71%) e carvacrol (3,67%). No óleo essencial do tomilho fresco foram quantificados três picos o borneol (66,66%), timol (13,41%) e linalol (3,24%). Por outro lado, no óleo essencial do tomilho seco comercial houve redução no borneol (37,90%) e aumento no timol (20,61%) e linalol (10,34%). Pode-se concluir que as folhas secas comerciais analisadas de alfavaca, orégano, e tomilho apresentam potencial para o enriquecimento dos alimentos ou para a obtenção dos óleos essenciais.

This study aimed to characterize commercial fresh and dry medicinal plants (basil, oregano and thyme), to obtain essential oil by the steam distillation method and to quantify chemical compounds by means of GC/MS. The fresh and dry plants were subjected to the following analyses moisture, ether extract, protein, crude fiber, ash, non-nitrogenous extract, caloric value, essential oil content and identification of major compounds by gas chromatography-mass spectrometry. Considering the obtained characterization, the following results on dry basis proved promising: protein and ash content in commercial dry basil with 17.34 g 100 g-1 and 8.12 g 100 g-1, respectively; crude fiber in commercial dry oregano with 15.65 g 100 g-1; ether extract, non-nitrogenous extract and caloric value in commercial dry thyme with 9.30 g 100 g-1, 52.72 g 100 g-1 and 356.74 Kcal 100 g-1, respectively. The highest essential oil yield was obtained for commercial dry basil with 1.02% and the lowest yield was obtained for fresh basil with only 0.13%. Chromatography indicated 87.38% eugenol and 6.27% thymol in fresh basil. For commercial dry basil, the chromatogram showed a reduction in eugenol (71.12%) and an increase in thymol (13.28%). Four peaks were quantified for fresh oregano the γ-terpinene (33.45%), 4-terpineol (25.59%), thymol (14.21%) and carvacrol (2.30%). For the essential oil of commercial dry oregano, there was a decrease in γ-terpinene (28.73%) and an increase in 4-terpineol (27.58%), thymol (19.71%) and carvacrol (3.67%). In the chromatogram of the essential oil of fresh thyme, three peaks were quantified: borneol (66.66%), thymol (13.41%) and linalool (3.24%). On the other hand, in the chromatogram of the essential oil of commercial dry thyme, there was a decrease in borneol (37.90%) and an increase in thymol (20.61%) and linalool (10.34%). It can be concluded that commercial dry leaves of basil, oregano and thyme are feasible to enrich foods or to obtain essential oils.

Primeira onda folicular e ovulação de vacas primíparas da raça Holandesa alimentadas com diferentes fontes energéticas durante o período de transição / First follicular wave and first postpartum ovulation of primiparous Holstein dairy cows receiving diets with different energetic sources during the transition period

Avaliou-se o efeito da adição de diferentes fontes energéticas na dieta de vacas leiteiras, durante o período de transição, sobre a primeira onda folicular e o intervalo parto-primeira ovulação. Foram utilizadas 40 vacas primíparas da raça Holandesa, no período de 28 dias antes da data prevista do parto até o 46º dia pós-parto. As vacas foram submetidas a quatro tratamentos (grupos) durante o período de transição: grupo-controle e grupos tratados com, Megalac-E (sais de cálcio de ácidos graxos da soja), soja tostada ou propileno-glicol. Avaliações ultrassonográficas foram realizadas do 10º ao 46º dia pós-parto, com a classificação dos folículos ovarianos em quatro classes (I, II, III e IV) de tamanho e do registro do volume do tecido luteal. Amostras de sangue foram coletadas nos dias 10, 17, 24, 31, 38 e 45 após o parto para análise de progesterona. O padrão de crescimento folicular mais eficiente foi apresentado pelos animais dos grupos Megalac-E e propileno-glicol, que foram caracterizados pela redução no número de folículos de classes I e II e aumento no número de folículos de classes III e IV. Os intervalos entre o parto e a primeira ovulação dos grupos controle, Megalac-E, soja tostada e propileno-glicol foram de 29, 23, 30 e 37 dias, respectivamente (P<0,05).

The effects of different energy sources added to the diet on the first postpartum ovarian follicle wave and first postpartum ovulation were evaluated. Forty primiparous Holstein dairy cows were used from 28 days before the expected calving date until 46 days postpartum. Cows were randomly allotted to the following groups: control, Megalac-E calcium salts of soybean fatty acid), toasted soybean and propylene glycol. Ovarian structures were scanned using ultrasound from 10 to 46 days postpartum. Follicles were classified according to the diameter in classes I, II, III, and IV and the luteal tissue volume was registered when present. Blood samples for progesterone dosage were colleted on days 10, 17, 24, 31, 38, and 45 post-partum. Follicular growth from groups of salts of polyunsaturated fatty acids and propylene glycol showed to be the most efficient and were characterized by a reduction in the number of classes I and II follicles and an increase in classes III and IV follicles. The first postpartum ovulation after calving for control, salts of polyunsaturated fatty acids, toasted soybean and propylene glycol animal groups occurred at 29, 23, 30, and 37 days, respectively (P<0.05).

Fertilidade de éguas inseminadas no corpo ou no ápice do corno uterino com diferentes concentrações espermáticas / Fertility of mares inseminated in the uterine corpus or tip with different sperm concentrations

Foram utilizados 72 ciclos estrais de 37 éguas mestiças, com idade variando de quatro a 20 anos, distribuídas ao acaso em dois grupos experimentais (G I e G II) para estudar o efeito do local de deposição do sêmen no sistema genital sobre a fertilidade. As inseminações no ápice do corno uterino (G II) foram realizadas por via intravaginal profunda, utilizando-se a pipeta de inseminação IVI pippette (75cm), contendo 1/5 (3mL) da dose inseminante utilizada para o corpo do útero (15mL-G I). As éguas foram rufiadas diariamente e inseminadas às segundas, quartas e sextas-feiras, a partir de um folículo de 3,0 a 3,5cm de diâmetro, com sêmen fresco diluído em diluidor de leite desnatado-glicose. Apenas um garanhão de 20 anos e de fertilidade conhecida foi utilizado. As taxas de concepção/ciclo para as inseminações realizadas no corpo (42,9 por cento-15/35) e ápice do corno uterino (45,9 por cento-17/37) com concentrações médias de 489 e 102 milhões de espermatozoides móveis, respectivamente, não foram diferentes (P>0,05).

Seventy-two estral cycles of 37 mares, aging from four to 20-year-old, were randomly distributed in two experimental groups (G I and G II). The aim of the study was to evaluate the effect of the semen deposition placed in the female genital system on the fertility. The inseminations in uterine horn tip (G II) were carried out by deep intravaginal way, using the pipette of insemination IVI pippette (75cm), containing 1/5 (3mL) of the inseminant dose of that utilized in uterine body or horn (15mL-G I). The mares were daily teased and inseminated on Mondays, Wednesdays, and Fridays, starting from a follicle from 3.0 to 3.5cm diameter, with fresh semen diluted in skim milk glucose extender. Only one 20 year-old stallion with wellknown fertility was utilized. The conception rates/cycles for inseminations carried out in the uterine body (42,9 percent-15/35) and in the uterine horn tip (45,9 percent-17/37) utilizing average concentrations of 489 and 102 million of mobile spermatozoa, respectively, did not present difference (P>0.05).

Taxa de concepção de cabras inseminadas com sêmen caprino resfriado a 5ºC, por 12 ou 24 horas, em meio diluidor à base de gema de ovo / Conception rate of goats inseminated with semen cooled in egg yolk diluent at 5ºC, for 12 or 24 hours

Avaliou-se a capacidade fecundante do sêmen caprino resfriado a 5ºC, por 12 (TI) ou 24 horas (TII), em container especial. Para tanto, utilizaram-se 62 fêmeas e dois reprodutores (B1 e B2) da raça Toggenburg, distribuídos em um esquema fatorial 2x2 (dois reprodutores e dois períodos de estocagem do sêmen). Após a coleta, o sêmen foi diluído em Tris-frutose-gema de ovo a 2,5 por cento, envasado em palhetas de 0,25mL, com 150x10(6) espermatozoides móveis e resfriado a 5ºC. As fêmeas receberam duas doses de 22,5µg de PGF2α, em intervalos de 10 dias para a sincronização do estro. A partir da primeira aplicação de PGF2α, as fêmeas foram monitoradas para ocorrência de estro, três vezes ao dia. Realizou-se uma única inseminação, pela técnica de fixação da cérvice, 12 horas após o início do estro. A motilidade e o vigor, após 12 ou 24 horas de resfriamento, foram de 66,14±0,11 por cento e 62,50±0,05 por cento, e 3,46±0,61 e 3,27±0,50, respectivamente. Não houve influência (P>0,05) do reprodutor, nem do período de armazenamento do sêmen sobre a taxa de concepção das cabras, que foi de 49,1 por cento.

The fertilizing capacity of goat semen cooled in egg yolk diluent at 5ºC, for 12 or 24 hours was evaluated. Sixty-two Toggenburg does and two sexually mature Toggenburg bucks were used in a fatorial treatment combination (two bucks and two storage periods). The semen was diluted in 2.5 percent Tris-frutose-egg yolk; envased in 0.25mL plastic straws, with 150x10(6) mobile spermatozoa; and cooled at 5ºC for 12 or 24 hours. The females received two doses of 22.5µg of prostaglandine F2α, at each 10-day intervals in order to synchronize the estrous. From the first PGF2α injection, estrous occurrence was monitored three times per day. Only one insemination was used, using the cervix fixation method, 12 hours after the estrous onset. The means of motility and strength, 12 (TI) and 24 hours (TII) after semen cooling at 5ºC, were 66.14±0.11 percent and 62.50±0.05 percent, and 3.46±0.61 and 3.27±0.50, respectively. Neither the sire nor the period of semen influenced (P>0.05) the conception rate of the does, which was 49.1 percent.

Influência da presença do bezerro no momento da ordenha sobre o desempenho reprodutivo de vacas mestiças Holandês-Zebu / Effect of calf presence during milking on reproductive performance of Holstein x Zebu crossbred cows

Avaliou-se a influência da presença do bezerro no momento da ordenha sobre os parâmetros reprodutivos de 75 vacas primíparas e multíparas mestiças Holandês-Zebu, divididas em três grupos experimentais: GI - vacas ordenhadas sem a presença do bezerro; GII - vacas ordenhadas com a presença momentânea dos bezerros, sendo estes retirados da sala de ordenha logo após a descida do leite; e GIII - vacas ordenhadas com a presença constante dos bezerros, sendo estes amarrados ao lado da vaca durante toda a ordenha. O escore médio da condição corporal ao parto foi de 3,1. O período de serviço, dias para o retorno ao cio e as taxas de manifestação de cio e gestação até os 120 dias pós-parto não foram influenciados (P>0,05) pelo tipo de manejo de ordenha.

This study was carried out to evaluate the effect of calf presence in the milking parlour on the reproductive performance of seventy five crossbred (Holstein Î Zebu) cows randomly allocated into three groups: group I - cows milked without the calf presence; group II - cows mantained with their calves during short period of time before milking to promote milk ejection and thereafter the calves were put out the milking room until the cows had finished milking; and group III - cows mantained with the calf during milking. The average body condition score at calving was 3.1. The service period, number of days to return to estrous and estrous and pregnant rates until 120 day postpartum were not influenced (P>0.05) by milking management of cows. The calf presence in the milking parlour did not influence the reproductive performance of Holandês-Zebu crossbred cows.

Squamous cell carcinoma of esophagus masquerading as solitary thyroid nodule.

Secondary neoplasm of the thyroid mimicking a primary thyroid lesion is a rare finding, especially in an individual without a past history of malignancy. A case of squamous cell carcinoma metastatic to the thyroid (presenting as a solitary thyroid nodule), who had an unsuspected primary in the esophagus is described. Usually, multiple areas of the gland are involved in the secondary involvement of the thyroid. The clinical presentation of an apparently asymptomatic mass with neck lymphadenopathy, normal thyroid functions, and a cold nodule on 99mTcO4- thyroid scan can often lead to a misdiagnosis as primary thyroid neoplasm. The present case underscores the fact that due importance to the subtle signs and symptoms and a high degree of suspicion, whenever the histology is unusual for a thyroid primary, is needed and the workup should include ruling out other primary malignancies.

Efeito do resfriamento do sêmen eqüino sobre sua congelabilidade / Effect of freezing and thawing protocols on post-thaw quality of equine semen

Utilizaram-se 25 ejaculados de cinco garanhões da raca Mangalarga Marchador, para avaliar dois protocolos de congelamento. No primeiro tratamento, resfriou-se o sêmen até 5ºC (curva de resfriamento - CR) antes do congelamento, no segundo, congelou-se o sêmen sem resfriamento (SC). Compararam-se duas formas de descongelamento, a 37ºC e a 75ºC/sete segundos. Os protocolos foram avaliados pelo teste de termo resistência (TTR - motilidade total e vigor) e pela funcionalidade da membrana plasmática (teste hiposmótico e eosina nigrosina). A motilidade total no tempo zero do TTR foi melhor (P<0,05) para o sêmen do tratamento CR, quando comparado com o do SC, em ambas as temperaturas de descongelamento, respectivamente, 46,7 por cento e 21,0 por cento (descongelamento a 37ºC), e 44,2 por cento e 24,6 por cento (descongelamento a 75ºC). Na mesma ordem, o número de espermatozóides vivos foi maior (P<0,05) no tratamento CR, 71,0 por cento e 54,6 por cento (descongelamento a 37ºC), e 77,4 por cento e 54,1 por cento (descongelamento a 75ºC). O sêmen do tratamento CR apresentou maior reacão (P<0,05) ao teste hiposmótico e maior vigor (P<0,05) que o do SC. O sêmen descongelado a 75ºC apresentou melhor vigor (P<0,05) que o descongelado a 37ºC, independentemente do protocolo de congelamento. Os resultados mostraram, in vitro, o efeito benéfico do resfriamento do sêmen antes do congelamento.