Evaluación de la eficacia de la prueba de inmunodifusión en gel agar para la detección de anticuerpos contra el virus de la leucosis enzootica bovina / Assessment of the Efficacy of the Agar Gel Immunodiffusion Test for the Detection of Antibodies Against the Enzootic Bovine Leukosis Virus

contra el virus de la leucosis enzoótica bovina (VLEB), comparándola con el ensayo inmunoenzimático (ELISA). Se procesaron 360 muestras de suero bovino para ambas pruebas, siguiendo las indicaciones del fabricante. El grado de concordancia (GC), valores predictivos (VP) y razones de verosimilitud (RV) fueron determinados y analizados. El GC entre ambas pruebas resultó ser del 86,4%, con un coeficiente Kappa (K) = 0,7. La IDGA detectó una significativa (P<0,001) menor proporción (47,2%) de sueros positivos que el ELISA (60,8%). La sensibilidad de la IDGA resultó ser del 77,6% por debajo de lo deseado, mientras que tuvo un 100% de especificidad. El VP positivo de100% y la razón de verosimilitud positiva RV con valor indeterminado (∞), mostraron que ésta es una prueba segura para la identificación de bovinos infectados con el VLEB. Contrariamente, el VP negativo de 74,2% y la RV negativa de 0,2, indican que existe una baja probabilidad, de que los bovinos con resultados seronegativos alVLEB, estén realmente libres de la infección por el VLEB. Los resultados sugieren que la IDGA es una prueba adecuada para estudios epidemiológicos en poblaciones con alta prevalencia del VLEB, por ser baja la posibilidad de generar resultados falsos positivos. Sin embargo, en poblaciones de baja prevalencia, su uso estaría restringido, debido a la considerable probabilidad de emitir resultados falsos negativos. En consecuencia, el ELISA debería ser la prueba de elección en programas de erradicación. Este trabajo es una contribución para el control y erradicación de la leucosis enzoótica bovina, al aportar información que permite seleccionar la técnica más adecuada, según la situación epidemiológica de esa enfermedad en la zona y el objetivo sanitario que se persigan.

The efficacy of the agar gel immunodifusion test (AGID) for the detection of antibodies against the enzootic bovine leucosis virus (EBLV) was evaluated and compared with the ELISA test. A total of 360 bovine serum samples were tested for both tests, following the manufacturer instructions. The agreement degree (AD), predictive values (PV), and coefficient of probability (CP) were determined and analyzed. There was a good AD between both tests (86.4%; Kappa coefficient =0.7). The AGID test detected a significant (P<0.001) lesser proportion (47.2%) of positive sera than the ELISA test (60.8%). The AGID sensitivity was 77.6% lower than the expected, while there was 100% specificity. The positive PV of a 100% and the positive CP with an undetermined value (∞) showed that AGID is a safe test for the detection of cattle infected with EBLV. In contrast, the negative PV of 74.2% and the negative CP of 0.2 indicate that there is a slight probability that cattle, whose sera were negative to EBLV using the AGID, are really free of EBLV infection. These results suggest that AGID is a suitable test for epidemiological studies, inpopulations with high EBLV prevalence, due to the minor risk of producing false positive results. However in populations with low prevalence of the disease, the use of the AGID test would be restricted due to the high possibility of giving false negative results. Therefore, the ELISA should be the test selected for eradication programs. This work is a contribution to the control and eradication programs of the enzootic bovine leucosis, since it provides information which allows the selection of the most adequate technique, according to the epidemiological status of this disease in the zone and the sanitary target pursued.

seroprevalencia de la leucosis enzoótica bovina y su asociación con signos clínicos y factores de riesgo en rebaños lecheros del estado barinas, venezuela / Seroprevalence of Enzootic Bovine Leukosis and its Association with Clinical Signs and Risk Factors in Dairy Herds from Barinas State, Venezuela

Se realizó un estudio sobre la seroprevalencia de la leucosis enzoótica bovina (LEB) en 360 bovinos lecheros, representativos de los municipios Pedraza y Barinas del estado Barinas, Venezuela, durante el periodo comprendido entre julio y noviembre 2007. En todos ellos se evaluó la presencia de signos clínicos compatibles con LEB (caquexia, decaimiento, y tumefacciones en los ganglios linfáticos supraescapulares e inguinales superficiales). Se recolectaron muestras de sangre, para la detección de anticuerpos y la proporción de linfocitos, lo cual se hizo mediante la prueba de ELISA y por contaje de linfocitos, respectivamente, relacionándose el porcentaje de animales seropositivos con el hallazgo de signos, tumefacciones en los ganglios y valores linfocíticos. Adicionalmente, se evaluó la seropositividad entre sexos, grupos etarios y número de partos, como factores de riesgo, mediante la prueba de Chi cuadrado (X²). Se detectaron 219 de 360 (60,83%) bovinos con anticuerpos específicos contra el virus de la LEB (VLEB), indicando una prevalencia elevada de distribución uniforme, en ambos municipios. La proporción de animales seropositivos con signos clínicos resultó ligeramente superior (33,79%) a la de los seronegativos (19,86%), aunque estos valores no fueron estadísticamente significativos. De igual manera, no se encontraron diferencias entre los seropositivos y seronegativos, en cuanto a las tumefacciones detectadas en los ganglios detectados, indicando que la ausencia de ellas no implica ausencia de infección. Las elevadas proporciones de linfocitos en los bovinos seropositivos y seronegativos resultaron similares, revelando no estar relacionadas con la infección por el VLEB. Con respecto a los factores de riesgo, la edad y el número de partos, mostraron estar asociados con la presencia de anticuerpos (P=0,0030 y P=0,0001, respectivamente), mientras que para el sexo no se detectaron. Estos resultados representan una contribución al conocimiento del comportamiento de la LEB en Venezuela.

An investigation was conducted to study the seroprevalence of enzootic bovine leukosis (EBL) in dairy cattle from the municipalities of Pedroza and Barinas, located at the State of Barinas, Venezuela, from July to November 2007. A total of 360 dairy cows were used. In all animals, the presence of clinical signs compatible with EBL, such as emaciation, weakness, tumefaction in suprascapular and superficial inguinal lymph nodes, were assessed. Blood samples positive to antibodies against EBLV were collected, specific antibodies to EBLV and lymphocyte proportion in samples were determined through the ELISA test and lymphocyte count, respectively. The percentage of positive animals was related to clinical findings, tumors, and lymphocytes values. Additionally, seropositivity among sex, age groups, and calving number, considered as risk factors, were also analyzed using the Chi square (X²) test. Of a total of 360 animals, 219 (60.83%) were positive to EBLV antibodies, indicating an elevated prevalence of uniform distribution in both municipalities. The proportion of seropositive animals with clinical signs was slightly higher (33.79%), when compared to seronegative animals (19.86%), although these values were not statistically significant. Likewise, no differences were found between serpositives and seronegatives regarding tumefaction detected, indicating that absence of such tumefaction does not imply lack of infection. The elevated amount of lymphocytes in both seropositive and seronegative animals was similar, reflecting no relationship with the infection through the EBLV. Concerning risk factors, age and calving number showed to be associated with the presence of antibodies (P=0.0030 and P=0.0001, respectively). In contrast, such association was not found for the variable sex. These results represent a contribution to the comprehension of EBL behaviour in Venezuela.

Neospora caninum en un rebaño lechero y su asociación con el aborto / Neospora caninum in a dairy cattle herd and its association to abortion

Neospora caninum es uno de los agentes infecciosos que con frecuencia se reportan como causantes de abortos en la ganadería bovina. En Venezuela, apenas existen estudios puntuales sobre su grado de difusión, así como sobre su implicación en la fisiología de la gestación. A fin de contribuir al conocimiento de esta enfermedad, se llevó a cabo una evaluación para determinar su responsabilidad en la ocurrencia de abortos, para lo cual se seleccionó un rebaño con abortos endémicos, 11% en vacas y 20% en novillas, con edad promedio de 4,5 meses de gestación. Una muestra de 169 vacas (10%), 87 y 82 con y sin registros de abortos, respectivamente, fueron analizadas para la detección de anticuerpos específicos contra N. caninum, mediante la prueba de ELISA. La prevalencia resultó en 44%, confirmando la infección por el parásito. En el grupo con aborto 47 (54%) resultaron con anticuerpos específicos contra el protozoario, indicativo de infección, mientras que en el grupo sin aborto sólo 28 (34%). Se encontró una asociación importante entre la condición de infección con Neospora caninum y la ocurrencia de los abortos (P = 0,00934), indicando que N. caninum tuvo una elevada implicación en la etiología de los mismos. Los resultados de este trabajo son una contribución al conocimiento de la enfermedad.

Neospora caninun is one of the most frequent infectious organisms causing abortion in cattle. Nevertheless, few detailed studies have been done about this parasite in Venezuela. The present study was designed to assess the importance of bovine neosporosis for causing abortion in an infected herd, which has 11 and 20% of abortion in cows and heifers, respectively, most of them occurred at 4.5 months of gestation. A sample of 169 cows (10%), 87 and 82 with and without abortion, respectively, were tested for specific antibodies to N. caninum by ELISA. The prevalence was found to be 44% that confirmed the infection in the herd. A total of 47 of the aborted cows (54%) were seropositive to N. caninum indicating that they had been infected with the parasite, while only 28 (34%) of the non-aborted cows resulted infected. It was found a significant association between seropositivity to N.caninum and abortion (P = 0.00934), which revealed the role of Neospora caninum in the occurrence of the abortions. The result of this work is a contribution to the knowledge of the disease.

Identificación molecular de una cepa de herpesvirus bovino tipo 2 en Venezuela / Molecular identification of a bovine herpes virus type 2 strain in Venezuela

El herpesvirus bovino tipo 2 (HVB-2) es el agente responsable de la mamilitis bovina, enfermedad que puede ser confundida con la fiebre aftosa por las lesiones que ocasiona en la ubre y pezones de las vacas infectadas. Para investigar su presencia en el país, se procesaron con fines de diagnóstico virológico muestras de tejidos epiteliales de ubre, recolectadas de ocho vacas con sospecha clínica de fiebre aftosa. Todas las muestras resultaron negativas a fiebre aftosa y estomatitis vesicular, pero de una de ellas se aisló una cepa viral en cultivo primario de riñón fetal bovino, la cual ocasionó un efecto citopático característico al observado por la acción del virus HVB-2. Mediante la prueba de PCR se amplificó una banda de 422 pb, la cual se correspondió al producto esperado de acuerdo al protocolo empleado para el diagnóstico molecular de herpesvirus bovino tipo 2. El análisis por BLAST y la alineación de las secuencias del amplicon obtenido permitió confirmar la presencia de este virus en el país.

Bovine mamilitis is a viral disease which is caused by Bovine Herpes Virus type 2 (BHV - 2). This disease is difficult to differentiate of Food and Mouth Disease (FMD) because infected cows show vesicles and ulcerating lesions on teats and udder. In order to investigate if BHV-2 is present in Venezuelan cattle udder samples of eight cows undergoing clinical symptoms similar to FMD were taken and tested for viral diagnostic. All samples were negative to FMD and vesicular stomatitis, but a viral strain with cytopathic effect typical to BHV-2 was isolated from one of them when a primary cells culture of bovine kidney fetus was inoculated. The presence of BHV-2 was confirmed in Venezuela according with the cytopathic effect, the PCR product of 422 bp obtained by specific test and the significant alignments by BLAST.