Toll-like Receptors 2, 3, and 4 in Childhood Acute Lymphocytic Leukemia / Receptores do Tipo Toll 2, 3 e 4 em Leucemia Linfocítica Aguda Infanti / Receptores Tipo Toll 2, 3 y 4 en la Leucemia Linfocítica Aguda Infantil

Introduction: Acute lymphocytic leukemia (ALL) is the most common cancer type in children and accounts for 80% of pediatric leukemias. Novel targets are necessary to improve survival rates for refractory and relapsed disease. There is accumulating evidence that Toll-like Receptor (TLR) signaling may be associated with outcomes in cancer however little has been described in leukemias. Objective: Analyze the expression and contribution of TLRs to the development of childhood ALL. Method: To evaluate the effect of specific TLR2, TLR3, and TLR4 agonists on the viability and proliferation of childhood ALL cell lines and to analyzed the mRNA expression of these types of TLR in bone marrow blast cells at diagnosis (D0) and induction (D35) in pediatric ALL patients. Results: Treatment with TLR agonists reduced the cell viability of Jurkat and Sup-B15 cell lines. Cell cycle distribution in Jurkat was altered, reducing polyploid cells and increasing sub-G1 phase. Conclusion: It was observed that the cell viability of the cell lines responded with different sensitivities to the agonists. The polyploidy associated with tumor malignancy was reduced, in addition to the increase in the sub-G1 phase indicating an increase in apoptosis. There were differences in TLR expression at D35 between groups at risk of the disease. Patients with high expression of TLR2 and low expression of TLR4 on D35 demonstrated a worse prognosis

Introdução: A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é o tipo de câncer mais comum em crianças e representa 80% das leucemias pediátricas. Novos alvos são necessários para melhorar as taxas de sobrevivência para doença refratária e recidivante. Há evidências acumuladas de que a sinalização de receptores Toll-Like (TLR) pode estar associada a resultados em câncer, embora pouco tenha sido descrito em leucemias. Objetivo: Analisar a expressão e a contribuição dos TLR para o desenvolvimento da LLA infantil. Método: Avaliar o efeito de agonistas específicos de TLR2, TLR3 e TLR4 na viabilidade e proliferação de linhagens celulares de LLA infantil e analisar a expressão do RNAm desses tipos de TLR em células blásticas da medula óssea no diagnóstico (D0) e na indução (D35) em pacientes LLA pediátricos. Resultados: O tratamento com agonistas de TLR reduziu a viabilidade celular das linhagens celulares Jurkat e Sup-B15. A distribuição do ciclo celular em Jurkat foi alterada, reduzindo as células poliploides e aumentando a fase sub-G1. Houve aumento na expressão dos receptores entre D0 e D35 em amostras de pacientes. Conclusão: Observou-se que a viabilidade celular das linhagens celulares respondeu com diferentes sensibilidades aos agonistas. A poliploidia associada à malignidade tumoral foi reduzida, além de o aumento da fase sub-G1 indicar aumento da apoptose. Houve diferenças na expressão de TLR em D35 entre os grupos de risco da doença. Pacientes com alta expressão de TLR2 e baixa expressão de TLR4 no D35 demonstraram pior prognóstico.

Introducción: La leucemia linfocítica aguda (LLA) es el tipo de cáncer más común en los niños y representa el 80 % de las leucemias pediátricas. Se necesitan nuevos objetivos para mejorar las tasas de supervivencia de la enfermedad refractaria y recidivante. Cada vez hay más pruebas de que la señalización del receptor Toll-Like (TLR) puede estar asociada con resultados en el cáncer, aunque se ha descrito poco en las leucemias. Objetivo: Analizar la expresión y la contribución de los TLR al desarrollo de la LLA infantil. Método: Evaluar el efecto de agonistas específicos de TLR2, TLR3 y TLR4 en la viabilidad y proliferación de líneas celulares de LLA infantil y analizar la expresión de ARNm de estos tipos de TLR en células blásticas de médula ósea en el momento del diagnóstico (D0) y la inducción (D35) en pacientes pediátricos con LLA. Resultados: El tratamiento con agonistas de TLR redujo la viabilidad celular de las líneas celulares Jurkat y sup-B15. Se alteró la distribución del ciclo celular en Jurkat, reduciendo las células poliploides y aumentando la fase sub-G1. Hubo un aumento en la expresión de los receptores entre D0 y D35 en muestras de pacientes. Conclusión: Se observó que la viabilidad celular de las líneas celulares respondía con distintas sensibilidades a los agonistas. Se redujo la poliploidía asociada con la malignidad del tumor, además de un aumento de la fase sub-G1 que indica un aumento de la apoptosis. Hubo diferencias en la expresión de TLR en D35 entre los grupos de riesgo de enfermedad. Los pacientes con alta expresión de TLR2 y baja expresión de TLR4 en D35 mostraron peor pronóstico

GGAA-Microsatellites of NR0B1 Promoter Region in Ewing's Sarcoma Patients and Healthy Individuals of a Southern Brazilian Population / Microssatélites GGAA na Região Promotora de NR0B1 em Pacientes com Sarcoma de Ewing e Indivíduos Saudáveis de uma População no Sul do Brasil / Microsatélites GGAA en la Región Promotora de NR0B1 en Pacientes con Sarcoma de Ewing y Individuos Sanos de una Población del Sur de Brasil

Introduction: The very aggressive soft tissue and bone pediatric tumor Ewing's sarcoma (ES) is caused in most cases by the chromosomal translocation t(11;22)(q24;q12), which encodes an aberrant chimeric transcription factor (EWS-FLI1) that regulates target genes, including the critical oncogene NR0B1 (Xp21.2),via GGAA-microsatellites. Objective: Analyze the GGAA-microsatellites of NR0B1promoter region of ES patients and healthy subjects in the population investigated. Method: Ten male ES patients and 71 adult healthy males from Rio Grande do Sul state, Brazil, were included in this study. DNA from peripheral blood samples was extracted, amplified by PCR, sequenced by the Sanger method and analyzed by capillary electrophoresis. Total number of GGAA-motifs, length of microsatellite in base pairs, number of segments separated by "A" insertions, and the greatest number of consecutive GGAA-motifs were analyzed as well. Statistical analyses were performed in the SPSS statistical software and p-value <0.05 was considered significant. Results: A total of 21 different alleles was identified in the 81 subjects, with 24.2 allele [(GGAA)7A(GGAA)7A(GGAA)10] being the most frequent, but when comparing the data between the two groups, no significant difference was found. Conclusion: The sample investigated had a wide variation of microsatellite structure, including the presence of rare alleles, allowing the opportunity to describe this population as an essential step to identify genetic implications in ES tumorigenesis

Introdução: O sarcoma de Ewing (ES) é um tumor pediátrico de ossos e partes moles muito agressivo, causado, na maioria das vezes, pela translocação cromossômica t(11;22)(q24;q12), codificando um fator de transcrição quimérico aberrante (EWS-FLI1) que regula genes-alvo, incluindo o oncogene NR0B1 (Xp21.2), via microssatélites GGAA. Objetivo: Analisar os microssatélites GGAA da região promotora de NR0B1 em pacientes com ES e indivíduos saudáveis da população em investigação. Método: Foram incluídos dez pacientes do sexo masculino com diagnóstico de ES e 71 indivíduos adultos hígidos do sexo masculino do Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. O DNA foi extraído de sangue periférico e amplificado por PCR, sequenciado pelo método de Sanger e analisado por eletroforese capilar. Foram analisados o número total de repetições GGAA, comprimento total do microssatélite em pares de bases, número de segmentos separados por inserções "A" e maior número de repetições GGAA consecutivas. As análises estatísticas foram realizadas no software estatístico SPSS e o valor de p<0,05 foi considerado significativo. Resultados: Um total de 21 alelos diferentes foi identificado nos 81 indivíduos, com o alelo 24,2 [(GGAA)7A(GGAA)7A(GGAA)10], sendo o mais frequente; mas, ao comparar os dados entre os dois grupos, nenhuma diferença significativa foi encontrada. Conclusão: A amostra estudada é altamente variável em termos de estrutura de microssatélites, incluindo a presença de alelos raros, dando a oportunidade de descrever essa população, o que é uma etapa fundamental na identificação de implicações genéticas na tumorigênese do ES

Introducción: El sarcoma de Ewing (ES) es un tumor pediátrico de huesos y tejidos blandos muy agresivo, que se presenta con mayor frecuencia por translocación cromosómica t(11;22)(q24;q12), que codifica un factor de transcripción quimérico aberrante (EWS-FLI1) que regula los genes diana, incluido el oncogén NR0B1 (Xp21.2), a través de microsatélites GGAA. Objetivo: Analizar los microsatélites GGAA de la región promotora de NR0B1en pacientes con ES y personas sanas de la población investigada. Método: Este estudio incluyó a diez pacientes varones con diagnóstico de ES y 71 varones adultos del estado de Rio Grande do Sul, Brasil. El ADN se extrajo de sangre periférica y se amplificó por PCR, secuenciado por el método de Sanger y analizado por electroforesis capilar. El número total de repeticiones GGAA, longitud total de microsatélites en pares de bases, número de segmentos separados por inserciones "A" y el mayor número de repeticiones GGAA consecutivas fueran analizados. Los análisis estadísticos se realizaron con el software estadístico SPSS y se consideró significativo un valor de p<0,05. Resultados: Se identificaron un total de 21 alelos diferentes en los 81, siendo el alelo 24,2 [(GGAA)7A(GGAA)7A(GGAA)10] el más frecuente, pero al comparar los datos entre los dos grupos, no hubo diferencia estadísticamente significativa. Conclusión: La muestra estudiada es muy variable en cuanto a estructura de microsatélites, incluyendo la presencia de alelos raros, lo que nos permite la oportunidad de describir la población estudiada, lo cual es un paso fundamental en la identificación de implicaciones genéticas en la tumorigénesis de ES

Expressão de neurotrofinas e de seus receptores no osteossarcoma primário / Expression of neurotrophins and their receptors in primary osteosarcoma

RESUMO Objetivo: determinar a expressão de neurotrofinas e seus receptores tirosina quinases em pacientes com osteossarcoma (OS) e sua correlação com desfechos clínicos. Métodos: biópsias de tumores primários de pacientes com OS tratados em uma única instituição, consecutivamente, entre 2002 e 2015, foram analisados através de imuno-histoquímica para expressão de receptores de tirosina quinase A e B (TrKA e TrKB), fator de crescimento neural (NGF) e fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF). De forma independente, dois patologistas classificaram os marcadores de imuno-histoquímica como negativos (negativos e focais fracos) ou positivos (moderado focal/difuso ou forte focal/difuso). Resultados: foram analisados dados de 19 pacientes (10 do sexo feminino e 9 do masculino) com mediana de idade de 12 anos (5 a 17,3 anos). Dos tumores, 83,3% estavam localizados em membros inferiores e 63,2% dos pacientes eram metastáticos ao diagnóstico. A sobrevida global em cinco anos foi de 55,3%. BDNF foi positivo em 16 pacientes (84%) e NGF em 14 pacientes (73%). TrKA e TrKB apresentaram coloração positiva em quatro (21,1%) e oito (42,1%) pacientes, respectivamente. A análise de sobrevida não demonstrou diferença significativa entre receptores TrK e neurotrofinas. Conclusão: amostras de OS primário expressam neurotrofinas e receptores TrK através de imuno-histoquímica. Estudos futuros podem auxiliar na identificação do papel das mesmas na patogênese do OS e determinar se há possível correlação prognóstica.

ABSTRACT Objective: to determine the expression of neurotrophins and their tyrosine-kinase receptors in patients with osteosarcoma (OS) and their correlation with clinical outcomes. Methods: we applied immunohistochemistry to biopsy specimens of patients consecutively treated for primary OS at a single institution between 2002 and 2015, analyzing them for expression receptors of tyrosine kinase A and B (TrKA and TrKB), neural growth factor (NGF) and brain derived neurotrophic factor (BDNF). Independently, two pathologists classified the immunohistochemical markers as negative (negative or weak focal) or positive (moderate focal/diffuse or strong focal/diffuse). Results: we analyzed data from 19 patients (10 females and 9 males), with median age of 12 years (5 to 17.3). Tumors' location were 83.3% in the lower limbs, and 63.2% of patients had metastases at diagnosis. Five-year overall survival was 55.3%. BDNF was positive in 16 patients (84%) and NGF in 14 (73%). TrKA and TrKB presented positive staining in four (21,1%) and eight (42,1%) patients, respectively. Survival analysis showed no significant difference between TrK receptors and neurotrophins. Conclusion: primary OS samples express neurotrophins and TrK receptors by immunohistochemistry. Future studies should explore their role in OS pathogenesis and determine their prognostic significance in larger cohorts.