RESUMO
Se prepararon receptores de hígado de rata por centrifugación diferencial y cromatografía en Sepharosa CL-68 (purificación aproximada 1.000veces) y se inocularon con aquellos 4 conejos. La calidad de los receptores fue controlada por marcación con ATP-Y-32P, electroforesis en poliacrilamida y autorradiografía. Se observó en curvas dosis/respuesta con insulina-125I e IGF-I125I, que el aislamiento usado no excluía el receptor de IGF-I (insulina: 36 fmoles/ml, IGF-I:3,2 fmoles/ml), por lo cual se continuó la purificación en una cromatografía de afinidad de insulina-Sepharosa y posterior marcación con 125I. El antisuero seleccionado C21 demostró una inmunoprecipitación elevada con insulina y baja con IGF-I(insulina: 62,5+4,71%, IGF-I: 24,7+3,16%). En hepatocitos aislados este antisuero no compite con la insulina por su receptor y a una dilución de 1/200 tiene poca capacidad de convertir glucosa-14C a glucógeno-14C, ya que a esa dilución asocia el 50% de los receptores presentes (0,76+0,16 ng/ml, expresado en respuesta biológica equivalente a insulina). para determinar el sitio de unión del antisuero C21 se dirigial receptor de insulina con colagenasa (que digiere específicamente la subunidad B) y se observan estas condiciones la inmunoprecipitibilidad del antisuero C21 cae dramáticamente (receptor de insulina 75,6+2,04%, receptor de insulina digerido: 14,9+1,28%). Se determinó, además, la inmonorreactividad cruzada con receptores humanos para la insulina, observándose un débil cruzamiento a alta concentración (1/75: 1,95+1,32%). El estudio demuestra que el antisueroC21 es predominantemente inmunorreactivo con el receptor de insulina, al que une por su subunidad B, induciendo una escasa respuesta biológica en hepatocitos aislados.