RESUMO
A reaçäo de marcaçäo do hormônio de crescimento humano (hGH) com 125I e sua purificaçäo cromatográfica foram estudadas focalizando-se especialmente a reprodutividade dos rendimentos, as recuperaçöes quantitativas e as atividades específicas obtidas. Através da rigorosa padronizaçäo de uma técnica de monitoraçäo foi confirmado que näo há perdas significativas de radioatividade ou proteína durante o processo de marcaçäo ou purificaçäo. Controlando rigorosamente as condiçöes de reaçäo foi obtida uma reprodutibilidade satisfatória na marcaçäo de varios extrados de hGH usando diferentes embarques de 125I após curtos ou longos períodos de estocagem deste radioisótopo. Finalmente a atividade específica (ou massa absoluta) da proteína radioiodada foi determinada mediante a análise da mistura de reaçäo, sendo comparada àquela obtida pelo método radioimunológico (self-displacement) mais universalmente usado. Para poder expressar as atividades específicas diretamente em microcuries por micrograma, uma técnica simples de contagem em coincidência, que permite a determinaçäo da atividade absoluta de fontes de 125I, foi adaptada às nossas condiçöes laboratoriais. A purificaçäo e os controles de qualidade descritos permitem a obtençäo de produtos marcados de boa reprodutibilidade, o que é indispensável para alcançar uma maior precisäo inter-ensaio e inter-laboratorial
Assuntos
Humanos , Hormônio do Crescimento/análise , Radioisótopos do Iodo , RadioimunoensaioRESUMO
Descreve-se a otimizaçäo de um método de extraçäo de hormônio de crescimento humano (hGH) a partir de hipófises humanas congeladas. As alteraçöes introduzidas na metodologia permitiram aumentar o rendimento para 8,7 mg de hGH por glândula processada. O hormônio obtido possui 21.587 daltons de peso molecular e a forma íntegra (hGH-22k) constitui 68% da preparaçäo. O hormônio isolado mostrou-se ativo em radioimunoensaio