Cultura de células da granulosa humanas com fenótipo de fase folicular: influência do sistema quimicamente definido na morfologia, ultraestrutura, secreção de esteroides e relaxina / Culture of human granulosa cells with follicular phase phenotype:influence of chemically defined system on morphology, ultrastructure,secretion of steroids and relaxin

Está bem descrito na literatura o padrão de cultivo de células da granulosa (CG) humanas que perpetua a luteinização, simulando a fase lútea do ciclo. Nesse sistema, há redução na secreção de estradiol (E2) e aumento na síntese de progesterona (P4) e relaxina (RLN). Objetivamos padronizar um sistema de cultura livre de soro, com o intuito de reverter o processo de luteinização de CG obtidas em ciclos de fertilização in vitro (FIV), pré-luteinizadas pela gonadotrofina coriônica humana (hCG), para aplicação na maturação in vitro de folículos ovarianos pré-antrais. Foi feito estudo experimental com GC obtidas de 10 mulheres em tratamento de reprodução assistida. As CG foram cultivadas em α-MEM contendo IGF-I, ITS, androstenediona, PVP-40 (meio quimicamente definido) ou TCM-199 contendo FSH/soro. Após 48, 96 e 144 horas, foram avaliados: morfologia das culturas, produção de E2, P4 (Quimioluminescência/Immulite), RLN (Elisa) e ultraestrutura (Microscopia Eletrônica). Os dados foram analisados por Anova e regressão linear com efeitos mistos (SAS versão 9.0). Células cultivadas em α-MEM apresentam alta capacidade estrogênica e padrão de produção hormonal característico da fase folicular, mantendo características morfológicas/ultraestruturais semelhantes a células in vivo. No sistema de cultura padronizado, as CG não completam in vitro o processo de luteinização deflagrado pela hCG, assumindo fenótipo de fase folicular.

It is well described in the literature the granulosa cells (GC) culture pattern that perpetuates human luteinizing simulating the luteal phase of the cycle. In this system, there is a reduction in the secretion of estradiol (E2) and increased synthesis of progesterone (P4) and relaxin (RLN). We aim to standardize a serum-free culture system, in order to reverse the luteinization process of GC obtained in IVF cycles, pre-luteinized by hCG, for use in in vitro maturation of preantral ovarian follicles. An experimental study was conducted with GC obtained from10 women undergoing treatment for assisted reproduction. The GC were cultured in α-MEM containing IGF-I, STI, androstenedione, PVP-40 (chemically defined medium) or TCM-199 containing FSH/serum. After 48, 96 and 144 h were analyzed: culture morphology, concentrations of E2, P4 (Chemioluminescence/Immulite), and RLN (Elisa), and ultrastructure (ElectronMicroscopy). Data were analyzed by Anova and linear mixed-effects regression (SAS version9.0). Cells cultured in α-MEM present estrogenic capacity and pattern of hormone production characteristic of the follicular phase, maintaining morphological/ultrastructural features similar that in vivo cell. In standard culture system, the CG not completes in vitro luteinization process triggered by hCG, assuming follicular phase phenotype.

Influência da interação entre o oócito e as células da granulosa nos resultados dos procedimentos de reprodução assistida / The influence of interaction between oocyte and granulosa cells on the results of procedures in assisted reproduction

A interação oócito-células da granulosa in vivo e sua influência na qualidade oocitária e embrionária tem sido alvo de inúmeros estudos, mas muitas questões ainda necessitam ser esclarecidas. O objetivo deste trabalho foi revisar a importância dessa comunicação, estabelecendo uma relação com a questão da maturação in vitro de oócitos imaturos humanos aplicando esses conhecimentos para definir possíveis marcadores moleculares que poderiam melhorar a seleção de oócitos e, consequentemente, selecionar embriões de boa qualidade para posterior transferência e sucesso de gravidez de pacientes submetidas ao tratamento da infertilidade conjugal. As células da granulosa têm um importante papel na maturação oocitária in vitro e os benefícios da presença dessas células durante essa etapa podem ser atribuídos à formação de um microambiente favorável (bioquímico e metabólico) ao redor do oócito. Foram identificados nesta revisão vários marcadores em potencial nas células do cumulus de oócitos competentes, incluindo vários genes que poderiam ser usados como preditores da competência oocitária, o que pode contribuir para a formulação de critérios mais objetivos e confiáveis para a seleção de oócitos e embriões, e consequente aprimoramento e otimização das técnicas em reprodução humana assistida que são aplicadas nos procedimentos clínicos atuais de fertilização in vitro.

The interaction of oocyte-granulosa cells in vivo and in vitro and its influence on oocyte and embryo quality has been the subject of numerous studies, but many issues still need to be clarified. The objective of this study was to promote a review about the importance of this communication establishing a connection with the issue of in vitro maturation of immature human oocytes by applying this knowledge to define potential molecular markers that could improve the selection of oocytes and consequently select good quality embryos for later transfer and success of pregnancy in patients undergoing treatment of infertility. The granulosa cells also have an important role in oocyte maturation in vitro and the venefits from the presence of these cells during this process can be atributed to the formation of a favorable micro-environment (biochemical and metabolic) around the oocyte. In this review, we identified several potential markers in the cumulus cells of competent oocytes, including several genes that could be used as predictors of oocyte competence, which contributes for more objective and reliable criteria for the selection of oocytes and embryos, thus improving and optimizing techniques in assisted human reproduction that are applied in current clinical in vitro fertilization.