Thermotolerance of Histoplasma capsulatum at 40 °C predominates among clinical isolates from different Latin American regions

ABSTRACT The yeast phase of 22 Histoplasma capsulatum clinical isolates from Mexico, Argentina, Colombia, and Guatemala and three reference strains, one from Panama and two from the United States of America (USA), were screened for thermosensitivity characteristics using different analyses. Growth curves at 0, 3, 6, 12, 24, and 30 h of incubation at 37 and 40 °C, the growth inhibition percentage at 40 °C, and the doubling time at 37 and 40 °C were determined for all yeasts studied. Most of the isolates examined exhibited thermotolerant phenotypes at 40 °C, whereas a thermosensitive phenotype at 40 °C was only detected in the Downs reference strain from the USA. Growth inhibition values lower than 33.8% supported the predominance of the thermotolerant phenotype at 40 °C. The doubling time means found for the different isolates were 5.14 h ± 1.47 h at 37 °C and 5.55 h ± 1.87 h at 40 °C. This is the first report to underscore the predominance of thermotolerant and delayed doubling time phenotypes in H. capsulatum clinical isolates from different regions of Latin America.

Neurohistoplasmosis y leishmaniasis cutánea en paciente inmunocompetente / Neurohistoplasmosis and cutaneous leishmaniasis in an immunocompetent patient

La histoplasmosis y la leishmaniasis son enfermedades olvidadas, endémicas en Argentina, y generalmente se asocian a inmunocompromiso. Presentamos el caso de un varón de 16 años, inmunocompetente, con histoplasmosis del sistema nervioso central y leishmaniasis cutánea. Inicialmente, el paciente presentó una lesión en la pierna de un mes de evolución seguida de paraparesia leve, diagnosticada como un proceso de desmielinización mediante estudios de imágenes. El cuadro fue tratado con altas dosis de corticoides y en 72 horas evolucionó a paraparesia grave con lesiones nodulares en las vértebras cervicales, observadas en las imágenes de resonancia magnética nuclear. Se aisló Histoplasma capsulatum de líquido cefalorraquídeo, genotípicamente identificado como perteneciente a la especie filogenética LamB. El paciente recibió tratamiento intravenoso con anfotericina B deoxicolato durante 30 días y posteriormente fluconazol e itraconazol oral durante un año. A los tres meses de iniciado el tratamiento con antifúngicos se reactivó la lesión de la pierna y en el examen directo se observaron amastigotes de Leishmania. La leishmaniasis cutánea fue tratada con antimoniato de meglumina intramuscular. La respuesta clínica al tratamiento de ambas enfermedades fue favorable.

Histoplasmosis and leishmaniasis are neglected and endemic diseases in Argentina, and generally are found associated with immunosuppression. We report the case of an immunocompetent 16-years-old man with simultaneous occurrence of central nervous system histoplasmosis and cutaneous leishmaniasis. Upon admission, the patient showed a one-month old skin lesion in a leg and mild paraparesis. Imaging studies detected thickening and edema in the spinal cord and the cerebrospinal fluid analysis was within normal range. The case was diagnosed as a demyelinating disorder and treated with high-dose short-term steroids. Seventy-two hours later the patient showed severe paraparesis and nuclear magnetic resonance imaging revealed nodular lesions in the spinal cord. Histoplasma capsulatum belonging to the phylogenetic species LamB was isolated from cerebrospinal fluid samples. The patient received intravenous antifungal therapy with amphotericin B for 30 days, followed by oral fluconazole and itraconazole for one year. Three months after initiation of antifungal treatment, the cutaneous lesion recrudesced and Leishmania amastigotes were observed on microscopic examination. The cutaneous leishmaniasis was treated with intramuscular meglumine antimoniate. The patient´s outcome was favorable after treatment for both diseases.

Paracoccidioidomicosis: crónica de una enfermedad olvidada / Paracoccidioidomycosis: chronicle of a neglected disease

La paracoccidioidomicosis (PCM) es una de las micosis sistémicas que son endémicas exclusivamente en América Latina. Está causada por hongos termodimorfos del género Paracoccidoides: P. brasiliensis (S1), P. americana (PS2), P. restrepiensis (PS3), P. venezuelensis (PS4) y P. lutzii. Paracoccidioides habita y produce conidios infecciosos en suelos de zonas subtropicales húmedas. En Argentina está presente al norte del paralelo 34.5° S. Poco se sabe sobre su nicho ecológico específico, lo que dificulta el diseño de medidas de control de la PCM. La infección ocurre en hospederos susceptibles cuando inhalan conidios aerosolizados. Los trabajadores rurales varones son el grupo más expuesto a contraer PCM. La primoinfección puede ser asintomática o causar un cuadro respiratorio leve; este, a su vez, puede autolimitarse o progresar a enfermedad, ya sea pulmonar o diseminada. Existen dos formas de presentación: (i) aguda/subaguda, en niños, adolescentes y personas con sistemas inmunes comprometidos; y (ii) crónica progresiva, en adultos. La cicatrización de las lesiones resulta en secuelas fibróticas que pueden causar disfagia, disfonía, insuficiencia suprarrenal y obstrucción intestinal. Aunque existen herramientas para su diagnóstico, la PCM es rara vez sospechada precozmente porque sus manifestaciones clínicas iniciales son inespecíficas. Sumados, el diagnóstico tardío y la baja adherencia a los efectivos pero largos tratamientos antimicóticos permiten el avance de la enfermedad y el desarrollo de fibrosis tisular extensa, lo que compromete gravemente la función respiratoria y suprarrenal, altera permanentemente la calidad de vida del paciente y puede causar su muerte.

Paracoccidioidomycosis (PCM) is among the systemic mycoses which are endemic only in Latin America. In Argentina, the vast majority of the cases are reported at north of latitude 34.5° S. The disease is produced by thermodimorphic fungi of the genus Paracoccidoides: P. brasiliensis (S1), P. americana (PS2), P. restrepiensis (PS3), P. venezuelensis (PS4) y P. lutzii. The natural habitat of members of this genus is the soil, where they produce infectious conidia. Little is known, however, about their specific ecologic niche(s), and this knowledge gap hampers the design of measures to control the infection. Rural male workers are the group most at risk of developing PCM. Infection occurs by inhalation of aerosolized conidia and may either be asymptomatic or cause mild respiratory symptoms. In turn, this primary infection may be self-limited or progress to severe pulmonary or disseminated disease. The disease has two clinical presentations: (i) acute or subacute (juvenile), frequent in children, adolescents and people with immunodeficiencies; and (ii) chronic progressive, in adults. Active lesions often resolve into fibrotic scars which can cause dysphagia, dysphonia, adrenal insufficiency, and intestinal obstruction. Although efficient tools are available for diagnosis and treatment, the nonspecific nature of PCM clinical manifestations frequently delay the diagnosis. In addition, the poor adherence to long antifungal treatments allows the advance of the disease and the development of extensive fibrosis compromising severely and permanently respiratory and adrenal functions, thus altering the patient´s quality of life and even causing his/her death.

Identidad genética del hongo causante del primer caso de coccidioidomicosis descripto por Alejandro Posadas en 1892 / Genetic characterization of the fungus involved in the first case of coccidioidomycosis described by Alejandro Posadas in 1892

En 1892, Alejandro Posadas documentó el primer caso mundial de coccidioidomicosis en un paciente argentino de nombre Domingo Escurra. Con el objetivo de identificar la especie de Coccidioides involucrado en ese caso, analizamos una pieza de necropsia del paciente, conservada en el Museo de Patología de la Facultad de Medicina de la Universidad de Buenos Aires, Argentina. La porción del tejido con mayor número de endosporas del hongo libres e integras fue elegida utilizando una coloración inmunohistoquímica específica. El ADN fúngico fue amplificado usando una PCR anidada que reconoce un fragmento del gen Ag2/PRA cuyo polimorfismo diferencia Coccidioides immitis y C. posadasii. Se amplificó además, el ADN de dos cepas de referencia: C. immitis (M38-05) y C. posadasii (1-NL) y de cuatro aislamientos de Coccidioides de pacientes argentinos. Los fragmentos amplificados fueron secuenciados en ambas hebras. Las secuencias fueron editadas, alineadas y comparadas con las depositadas en GenBank C. posadasii (Acceso N° AY536446, cepa Silveira) y C. immitis (Acceso N° AY536445). Las secuencias del Coccidioides del caso Escurra, de los aislamientos argentinos y de la cepa 1-NL fueron idénticos entre sí y mostraron una mutación puntual de C→G en la posición 1228 en comparación con la secuencia de C. posadasii, cepa Silveira. Este es el primer trabajo donde se busca ADN de Coccidioides en una pieza anatómica de museo con más de 100 años de antigüedad. Los resultados confirman que el primer caso de coccidioidomicosis o enfermedad de Posadas documentado mundialmente fue producido por el recientemente descripto C. posadasii.

In 1892 Alejandro Posadas described the first worldwide case of coccidioidomycosis in a patient named Domingo Escurra. A preserved necropsy piece from the patient's remains is conserved in the Museum of Pathology of the Medical School, Buenos Aires University. Paraffin-embedded specimens obtained from this piece served to identify the fungus involved in the case. Histological slices from different lesion sites were submitted to a genus-specific immunohistochemical staining in order to select the more suited areas in terms of abundance/integrity of fungal esporangia and endospora. Fungal DNA was amplified from selected deparaffinated slices using a nested PCR designed to amplify a segment of the gen Ag2/PRA and differentiate C. immitis from C. posadasii. This PCR was also applied to two reference strains (C. immitis M38-05, C. posadasii 1-NL) and isolates obtained from four recent coccidioidomycosis cases occurred in Argentina. Amplified products were submitted to sequencing of both DNA strands. The obtained sequences were edited, aligned and compared with C. posadasii (Access N° AY536446, strain Silveira) and C. immitis (Access N° AY536445) deposited in GenBank. DNA sequences from Escurra's lesions were 100% homologous to the recent Argentinean cases and the reference strain 1-NL. A single point C→G difference in position 1228 was observed with respect to sequence of strain C. posadasii Silveira. For the first time, Coccidioides DNA is recovered from a museum piece which is more than 100-year-old. Our results confirm that the original case of Posadas's disease was caused by the recently described C. posadasii.