Extraction of trypanosoma cruzi DNA from food: a contribution to the elucidation of acute Chagas disease outbreaks

Abstract: INTRODUCTION: Before 2004, the occurrence of acute Chagas disease (ACD) by oral transmission associated with food was scarcely known or investigated. Originally sporadic and circumstantial, ACD occurrences have now become frequent in the Amazon region, with recently related outbreaks spreading to several Brazilian states. These cases are associated with the consumption of açai juice by waste reservoir animals or insect vectors infected with Trypanosoma cruzi in endemic areas. Although guidelines for processing the fruit to minimize contamination through microorganisms and parasites exist, açai-based products must be assessed for quality, for which the demand for appropriate methodologies must be met. METHODS: Dilutions ranging from 5 to 1,000 T. cruzi CL Brener cells were mixed with 2mL of acai juice. Four Extraction of T. cruzi DNA methods were used on the fruit, and the cetyltrimethyl ammonium bromide (CTAB) method was selected according to JRC, 2005. RESULTS: DNA extraction by the CTAB method yielded satisfactory results with regard to purity and concentration for use in PCR. Overall, the methods employed proved that not only extraction efficiency but also high sensitivity in amplification was important. CONCLUSIONS: The method for T. cruzi detection in food is a powerful tool in the epidemiological investigation of outbreaks as it turns epidemiological evidence into supporting data that serve to confirm T. cruzi infection in the foods. It also facilitates food quality control and assessment of good manufacturing practices involving acai-based products.

Avaliação de um Sistema de Banco de Dados para Coleção de Fungos de Referência / Evaluation of a Database System for Reference Fungi Collection

De acordo com o Guia para Operação de Centros de Recursos Biológicos da Organização para Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OCDE), os Centros de Recursos Biológicos devem dispor os dados descritivos do e sua origem ao Global Biological Resource Center Network. Essa deliberação ratifica a preocupação da validação de ferramentas utilizadas no tratamento de dados pelas coleções e laboratórios prestadores de serviços no escopo indireto de suas rotinas, visando à qualidade. A avaliação do Sistema de Banco de Dados da Coleção de Culturas de Fungos de Referência (INFOGER_FUNGOS), do Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS), de acordo com a norma ISO/IEC nº 17.025:2005, estabelece um marco na qualidade e integridade das informações, economizando tempo na elaboração das estruturas do sistema permitindo ao profissional diretamente envolvido com a coleção e suas particularidades seja seu administrador. Este trabalho teve como objetivo demonstrar um método de avaliação de um sistema de gerenciamento de dados no cumprimento de sua finalidade atingindo níveis de qualidade satisfatórios. Ele servirá de modelo para avaliações de sistemas utilizados em coleções de micro-organismos dentro das normas da Qualidade e Acreditação de seus serviços e produtos, e colaborar no estabelecimento de padrão de dados baseado em experiências brasileiras, adaptado e estendido a modelos existentes.

Desenvolvimento de material de referência para ensaio de proficiência em microbiologia de alimentos / Development of reference materials for proficiency tests in food microbiology

Ensaios de proficiência (EP) são considerados importantes ferramentas para a condução de programas controle de qualidade, que possibilitam efetuar a avaliação da habilidade de laboratórios em obter resultados precisos. No Brasil é restrita a oferta de EP na área de microbiologia de alimentos. Além disso, os altos custos diminuem a participação regular de laboratórios nacionais nesses ensaios. O presente estudo teve como objetivo realizar a avaliação da técnica de liofilização no preparo de materiais de referência (MR) para EP destinados ao ensaio de detecção de Salmonella spp. em leite. Foi determinada a concentração do inóculo utilizado no preparo de dois lotes e, também, foi padronizado o procedimento de contaminação da matriz. Para monitorar a qualidade dos MR produzidos foram estabelecidos ensaios de controle, dentre eles o teste da homogeneidade e da estabilidade em longo e curto prazo. A técnica de liofilização mostrou ser adequada para a produção de MR de qualidade e aplicável para EP. Os MR apresentaram estabilidade à temperatura de estoque (-20ºC) durante os três primeiros meses, porém foi observada perda de viabilidade após doze meses de armazenamento. Na estabilidade em curto prazo, os MR foram estáveis a 4°C, contudo apresentaram redução significativa no número de células quando mantidos a temperaturas de 25ºC e 37ºC durante sete dias.

Proficiency tests are considered relevant tools of quality control programs used to monitor the laboratory performance and to assess the reliability of tests results. In Brazil, the provision of proficiency testing (PT) is restricted to food microbiology area. Furthermore, high costs reduce the regular participationof national laboratories in these tests. This study evaluated the freeze-drying technique employed forpreparing reference materials (RM) to be used in the PT schemes for detecting Salmonella spp. in milk.The concentration of inoculums used for preparing two batches of RM was determined, and the proceduresfor matrix contamination were standardized. The control trials were established in order to monitor thequality of the produced RM, and among them, there are long and short-term homogeneity and stability assays. The freeze-drying technique proved to be a suitable procedure for producing RM for PT. The RM were stable for the first three months when stored at -20ºC, nevertheless, viability loss could be observed after 12-month storage. The RM were stable at 4°C at short-term stability, although when the products were kept at 25°C and 37°C for seven days, a significant reduction in the number of cells could be observed.