Detection of salmonella sp in chicken cuts using immunomagnetic separation

The immunomagnetic separation (IMS) is a technique that has been used to increase sensitivity and specificity and to decrease the time required for detection of Salmonella in foods through different methodologies. In this work we report on the development of a method for detection of Salmonella in chicken cuts using in house antibody-sensitized microspheres associated to conventional plating in selective agar (IMS-plating). First, protein A-coated microspheres were sensitized with polyclonal antibodies against lipopolysacharide and flagella from salmonellae and used to standardize a procedure for capturing Salmonella Enteritidis from pure cultures and detection in selective agar. Subsequently, samples of chicken meat experimentally contaminated with S. Enteritidis were analyzed immediately after contamination and after 24h of refrigeration using three enrichment protocols. The detection limit of the IMS-plating procedure after standardization with pure culture was about 2x10 CFU/mL. The protocol using non-selective enrichment for 6-8h, selective enrichment for 16-18h and a post-enrichment for 4h gave the best results of S. Enteritidis detection by IMS-plating in experimentally contaminated meat. IMS-plating using this protocol was compared to the standard culture method for salmonellae detection in naturally contaminated chicken cuts and yielded 100 percent sensitivity and 94 percent specificity. The method developed using in house prepared magnetic microespheres for IMS and plating in selective agar was able to diminish by at least one day the time required for detection of Salmonella in chicken products by the conventional culture method.

A separação imunomagnética (IMS) é uma técnica que tem sido associada a diferentes métodos de detecção de Salmonella em alimentos para aumentar a sensibilidade e a especificidade e diminuir o tempo de análise. Neste trabalho é comunicada a obtenção de microesferas magnéticas sensibilizadas com anticorpos anti-Salmonella e seu uso em associação com a metodologia de cultivo convencional para desenvolver um método de detecção de salmonelas em cortes de frango (IMS-plaqueamento). Inicialmente, microesferas cobertas com proteína A foram sensibilizadas com anticorpos policlonais contra lipopolissacarídeo e flagelo de salmonelas e usadas na padronização de um procedimento que captura Salmonella Enteritidis em cultivo puro e faz posterior detecção em ágar seletivo. A seguir, amostras de carne de frango experimentalmente contaminadas com S. Enteritidis foram analisadas imediatamente após a contaminação e após 24h de refrigeração utilizando três protocolos de enriquecimento. O limite de detecção foi cerca de 2x10 UFC/mL. O protocolo que incluiu enriquecimento não-seletivo por 6-8h, enriquecimento seletivo por 16-18h e pós-enriquecimento por 4h foi o que proporcionou melhor resultado na detecção de S. Enteritidis em carne de frango experimentalmente contaminada. Este protocolo foi comparado à metodologia convencional em estudo de detecção de salmonelas em cortes de frango naturalmente contaminados e obteve 100 por cento de sensibilidade e 94 por cento de especificidade. O método desenvolvido foi capaz de diminuir em pelo menos um dia o tempo de detecção de salmonelas em cortes de frango pela metodologia convencional.

Isolamento de Salmonella de produtos de frango e perfil de suscetibilidade dos isolados a antimicrobianos / Salmonella isolation from poultry products and antimicrobial susceptibility

Salmonella Enteritidis tem sido o principal sorotipo causador de salmonelose. O uso de antimicrobianos na prevenção e no tratamento dessa infecção, assim como a utilização destes como promotores de crescimento, tem provocado o aparecimento de cepas resistentes. O trabalho teve por objetivo investigar a presença de Salmonella em produtos de frango e verificar a resistência dos isolados frente a agentes antimicrobianos. Foram analisadas 120 amostras de produtos de frango, segundo metodologia preconizada pela Food and Drug Administration. Salmonella foi isolada de sete (15,83%) amostras e foram identificados quatro sorotipos, Enteritidis, Newport, Derby e Agona. Enteritidis foi o sorotipo de maior prevalência (71,4%). Trinta e seis (94,7%), 34 (89,5%), 32 (84,2%) e 32 (84,2%) isolados foram sensíveis aos antimicrobianos cloranfenicol, norfloxacina, ciprofloxacina e ampicilina, respectivamente. Trinta e três (86,8%) isolados foram resistentes ao ácido nalidíxico. Todos os isolados (100%) foram sensíveis à cefatriaxona. Vinte e cinco isolados (65,8%) foram resistentes à tetraciclina. Foram encontrados cinco(13,2%) isolados multirresistentes. A fiscalização dos produtos de frango deve ser mais rigorosa, quanto a possível presença de Salmonella. O aparecimento de cepas de Salmonella resistentes a agentes antimicrobianos é indicativo da necessidade de maior controle no uso desses fármacos.

Escherichia coli verotoxigênica: isolamento e prevalência em 60 propriedades de bovinos de leite da região de Pelotas, RS, Brasil / Verotoxin-producing Escherichia coli: isolation and prevalence in 60 dairy cattle farms from Pelotas-RS, Brazil

A produção de verotoxinas foi investigada em 1.127 isolamentos de Escherichia coli feitos a partir de 243 bovinos de leite, de água de consumo humano e animal e de amostras de leite de 60 propriedades da bacia leiteira de Pelotas, no período de dezembro de 1999 a dezembro de 2000, com o objetivo de determinar a prevalência de E. coli verotoxigênicas (VTEC) nas propriedades e no rebanho, de detectar a presença de sorotipos ligados a infecções humanas e de identificar, nas propriedades e na região de Pelotas, potenciais fatores de risco de infecção para os animais. A detecção das toxinas em sobrenadante de culturas de E. coli isoladas foi realizada através do ensaio de citotoxicidade em células Vero. VTEC foi isolada em 95 por cento (57/60) das propriedades estudadas, em 49 por cento (119/243) dos animais testados, em 5 por cento (3/60) das amostras de água de consumo humano, em 8,35 por cento (5/60) das amostras de água de consumo animal e em 5 por cento (3/60) das amostras de leite. A prevalência de bovinos infectados em cada propriedade variou de 0 a 100 por cento. Em 2,9 por cento (7/243) dos animais testados, foram isoladas VTEC pertencentes aos sorogrupos O157, O91 e O112, que incluem cepas responsáveis por casos de colite hemorrágica e síndrome urêmica hemolítica em humanos. Fatores de risco de contaminação, como a precipitação pluviométrica, a temperatura, o tamanho da propriedade e a concentração de animais, apresentaram evidências de influenciarem a prevalência de VTEC nos animais. Estes resultados sugerem que o grupo VTEC está amplamente distribuído na bacia leiteira de Pelotas e inclui organismos pertencentes a sorogrupos patogênicos para humanos.

The production of verotoxin was investigated in 1127 Escherichia coli isolated from 243 dairy cattle, water for human and animal consumption, and milk samples from 60 dairy farms from Pelotas-Brazil, from December of 1999 to December of 2000, to determine the prevalence of verotoxigenic E. coli (VTEC) in farms, to detect the presence of serotypes involved in human infections and to identify potential risk factors for animal infection. Vero cell assay was used to detect toxins in culture supernatants from E. coli isolated. VTEC was isolated in 95 percent (57/60) from farms and in 49 percent (119/243) from cattle, 5 percent (3/60) from water of human consumption, in 8.35 percent (5/60) from water animal consumption and 5 percent (3/60) from milk samples. The prevalence of cattle infected for each farm ranged from 0 to 100 percent. VTEC belonging to serogroups O157, O91 and O112, which include strains responsible for cases of hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome in humans, were isolated from 7 (2.9 percent) out of 243 cattle. Risk factors for contamination, such as amount of rain, farm size and cattle number, influenced cattle prevalence rate. These results suggest that VTEC is widely distributed among dairy cattle in the region surveyed and includes organisms from serogroups pathogenic for humans.

Intoxicaçäo estafilocócica em restaurante institucional / Staphylococcal intoxication in a institutional restaurant

Foi investigado um surto de intoxicaçäo alimentar ocorrido em um restaurante institucional. Cinqüenta e seis pessoas, de um total de 88, foram acometidas de vômitos, diarréia, dores abdominais, prostraçäo, febre e cefaléia após ingerirem uma refeiçäo composta de sanduíche de galinha, refresco de laranja e pudim de leite. Os sintomas apareceram entre uma hora e meia e 12 horas após a ingestäo da refeiçäo e duraram 24 a 36 horas. As taxas de ataque específico foram de 64 por cento para o sanduíche de galinha, de 61 por cento para o refresco de laranja e de 60 por cento para o pudim. A contagem de Staphylococcus aureus secretores de enterotoxina A no sanduíche de galinha foi de 2 X 10(8)UFC.g-1. Estes resultados, juntamente com os obtidos nos questionários aplicados às pessoas que ficaram doentes, forneceram provas circunstanciais que permitiram concluir que ocorreu uma intoxicaçäo alimentar provocada pelo sanduíche de galinha contaminado com enterotoxina A de Staphylococcus aureus.

Aflatoxinas, contaminação fúngica e teor de umidade em produtos utilizados como fonte de fibra alimentar / Afaltoxins, contamination of molds and tenor of humidity used as sources of dietary fiber

A aveia e o farelo de trigo são produtos muito utilizados como fonte de fibra alimentar. Por terem um baixo teor de umidade, estes produtos estão sujeitos à contaminação por mofos e suas toxinas, entre estas as aflatoxinas. Foi investigada a ocorrência de aflatoxinas e determinada a contagem de mofos e o teor de umidade de 25 amostras de aveia e 25 amostras de farelo de trigo. Para quantificação das aflatoxinas foi utilizada a técnica de cromatografia em camada delgada e comparação visual com padrões. A contagem de fungos e a determinação da umidade foram realizadas por métodos padrões. Duas amostras de aveia estavam contaminadas com aflatoxina G1 (2,5 ppb) e cinco amostras de farelo de trigo contaminadas com aflatoxina B2 (duas amostras com 4 ppb e três com 2 ppb). Nos dois produtos a contagem de mofos variou entre 10 e 1000 UFC/g. Os teores de umidade variaram entre 6 e 11 por cento na aveia e 9 e 15 por cento no farelo de trigo. Estes resultados sugerem que estes produtos não apresentam uma importante contaminação por mofos ou aflatoxinas, apresentado-se relativamente seguros para o consumo.

Prevalência de Salmonella em produtos de frangos e ovos de galinha comercializados em Pelotas, RS, Brasil / Prevalence of Salmonella in chicken products and hen's eggs from Pelotas, RS, Brazil

A prevalência de Salmonella em produtos de frangos e ovos de galinhas, os sorovares mais freqüentes e sua sensibilidade a antimicrobianos, foram investigados em Pelotas, Brasil, no período de maio de 1997 a outubro de 1998. Um total de 124 amostras de produtos de frangos obtidas em supermercados e açougues e 94 amostras de 6 unidades de ovos de galinhas obtidas em supermercados e feiras-livres foram analisadas através do método convencional de cultivo. Entre as amostras de produtos de frangos analisadas, 13 (10,48 por cento) continham salmonelas. Os 13 isolamentos de salmonelas realizados foram sorotipificados como S. enteritidis (10), S. anatum (1) e S. enterica subespécie enterica sorovar 3,10:e,h:- (2). Todas as cepas isoladas foram resistentes à penicilina G e sensíveis aos demais antimicrobianos testados. Em amostras de ovos, näo foram detectadas salmonelas.