RESUMO
El desarrollo de la tecnología del P.C.R. y RFLP constituyen metodologías adecuadas para la identificación y tipificación del Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Mtpbc), microorganismo que produce paratuberculosis animal y que está relacionado a la Enfermedad de Crohn en humanos. Los objetivos del presente trabajo fueron: 1) Aislar cepas de Mptbc a partir de materia fecal y órganos e identificar M. paratuberculosis. 2) Establecer mediante R.F.L.P. el patrón genético de las cepas aisladas. 3) Analizar las proteínas celulares y extracelulares expresadas en Mptbc. Se cultivó materia fecal y órganos de ciervos en los medios Herrold yema-huevo, con y sin el agregado de mycobactina, adicionando piruvato y antibióticos, para el aislamiento de Mptbc. Las cepas aisladas fueron identificadas por P.C.R., y analizadas por R.F.L.P., e Inmunoblotting (IB). Se aislaron 12 cepas de Mptbc, 6 de materia fecal y 6 a partir de los órganos. Las cepas aisladas se desarrollaron únicamente en el medio Herrold con mycobactina evidenciando su dependencia característica. El análisis por P.C.R. realizado a partir de cepas desarrolladas en el medio de cultivo resultó positivo. Los aislamientos revelaron idéntico patrón genético de R.F.L.P. del tipo "A", con la sonda de 217 pares de bases (endonucleasa BstE II y Pst I). Con el inmunoblotting se detectaron antígenos proteicos de 65 KDa (shock térmico), 42 KDa, 35 KDa y 28 KDa, correspondientes a Mptbc de un animal con sintomatología clínica y lesiones histológicas características en órganos. Se identificó un único patrón genético "A", en la población estudiada; se amplificó la secuencia IS900 específica de Mptbc. y se identificaron las proteínas excretadas y contenidas en el soma bacteriano, pero para aumentar la sensibilidad de las pruebas inmunológicas se considera necesario caracterizar mejor los antígenos específicos de Mptbc