Impact of autologous whole blood administration upon experimental mouse models of acute Trypanosoma cruzi infection

Autologous whole blood (AWB) administration is described as alternative/complementary medical practice widely employed in medical and veterinary therapy against infections, chronic pathologies and neoplasias. Our aim is to investigate in vivo biological effect of AWB using healthy murine models under the course of Trypanosoma cruzi acute infection. Methods: The first set of studies consisted of injecting different volumes of AWB and saline (SAL) into the posterior region of quadriceps muscle of healthy male Swiss mice under distinct therapeutic schemes evaluating: animal behavior, body and organ weight, hemogram, plasmatic biochemical markers for tissue damage and inflammatory cytokine levels and profile. To assess the impact on the experimental T. cruzi infection, different schemes (prior and post infection) and periods of AWB administration (from one up to 10 days) were conducted, also employing heterologous whole blood (HWB) and evaluating plasma cytokine profile. Results: No major adverse events were observed in healthy AWB-treated mice, except gait impairment in animals that received three doses of 20 µL AWB in the same hind limb. AWB and SAL triggered an immediate polymorphonuclear response followed by mononuclear infiltrate. Although SAL triggered an inflammatory response, the kinetics and intensity of the histological profile and humoral mediator levels were different from AWB, the latter occurring earlier and more intensely with concomitant elevation of plasma IL-6. Inflammatory peak response of SAL, mainly composed of mononuclear cells with IL-10, was increased at 24 h. According to the mouse model of acute T. cruzi infection, only minor decreases (< 30%) in the parasitemia levels were produced by AWB and HWB given before and after infection, without protecting against mortality. Rises in IFN-gamma, TNF-alpha and IL-6 were detected at 9 dpi in all infected animals as compared to uninfected mice but only Bz displayed a statistically significant diminution (p= 0.02) in TNF-alpha levels than infected and untreated mice. Conclusions: This study revealed that the use of autologous whole blood (AWB) in the acute model employed was unable to reduce the parasitic load of infected mice, providing only a minor decrease in parasitemia levels (up to 30%) but without protecting against animal mortality. Further in vivo studies will be necessary to elucidate the effective impact of this procedure.(AU)

Impact of autologous whole blood administration upon experimental mouse models of acute Trypanosoma cruzi infection

Background: Autologous whole blood (AWB) administration is described as alternative/complementary medical practice widely employed in medical and veterinary therapy against infections, chronic pathologies and neoplasias. Our aim is to investigate in vivo biological effect of AWB using healthy murine models under the course of Trypanosoma cruzi acute infection. Methods: The first set of studies consisted of injecting different volumes of AWB and saline (SAL) into the posterior region of quadriceps muscle of healthy male Swiss mice under distinct therapeutic schemes evaluating: animal behavior, body and organ weight, hemogram, plasmatic biochemical markers for tissue damage and inflammatory cytokine levels and profile. To assess the impact on the experimental T. cruzi infection, different schemes (prior and post infection) and periods of AWB administration (from one up to 10 days) were conducted, also employing heterologous whole blood (HWB) and evaluating plasma cytokine profile. Results: No major adverse events were observed in healthy AWB-treated mice, except gait impairment in animals that received three doses of 20 L AWB in the same hind limb. AWB and SAL triggered an immediate polymorphonuclear response followed by mononuclear infiltrate. Although SAL triggered an inflammatory response, the kinetics and intensity of the histological profile and humoral mediator levels were different from AWB, the latter occurring earlier and more intensely with concomitant elevation of plasma IL-6. Inflammatory peak response of SAL, mainly composed of mononuclear cells with IL-10, was increased at 24 h. According to the mouse model of acute T. cruzi infection, only minor decreases ( 30%) in the parasitemia levels were produced by AWB and HWB given before and after infection, without protecting against mortality. Rises in IFN-gamma, TNF-alpha and...

Caracterização do ambiente inflamatório cardíaco e estudo de interações células T/endotélio em camundongos mdx/mdx / Characterization of cardiac inflammatory environment interactions and study T cell / endothelium in mice mdx / mdx

A Distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma doença recessiva ligada ao cromossomo X que afeta 1 a cada 3500 meninos nascidos vivos e é causada por mutações no gene da distrofina. A ausência da distrofina leva à degeneração progressiva dos músculos esqueléticos e cardíaco assim como à inflamação crônica. O camundongo mdx/mdx é um dos modelos mais utilizados para estudo da DMD e apresenta muitas características da doença, embora a progressão da patologia seja mais branda e não letal. Este trabalho visa avaliar a migração de células T para o coração de camundongos mdx/mdx e possíveis alterações na expressão de moléculas de adesão que possam modular esse processo. Leucócitos sanguíneos, incluindo células T de camundongos mdx/mdx de 6 semanas de idade, são CD62L (mais) , mas sofrem uma modulação negativa nos animais de 12 semanas, com apenas 40(por cento) dos linfócitos T mantendo a expressão dessa molécula. Nossos resultados apontam para uma clivagem de CD62L dependente de P2X7 (com altos níveis de CD62L no soro) que reduz a competência dos linfócitos T sanguíneos de camundongos mdx/mdx de 12 semanas aderirem aos vasos sanguíneos cardíacos in vitro. In vivo, nós observamos que mesmo após a infecção com Trypanosoma cruzi, um conhecido indutor de miocardite linfóide, essas células raramente são encontradas no co ração. Quando camundongos mdx/mdx são tratados com BBG, um bloqueador de P2X7, esses linfócitos sanguíneos mantém a expressão de CD62L e são capazes de migrar para o coração. Esses resultados fornecem novas informações sobre os mecanismos de infiltração in flamatória e regulação imune na DMD.

Caracterização de populações inflamatórias cardíacas e avaliação de interações leucócitos/endotélio na distrofia muscular tipo Duchenne / Characterization of cardiac inflammatory populations and evaluation of interactions leukocytes/endothelium evaluation in the Duchenne type muscular distrophy

Distrofia muscular do tipo Duchenne (DMD) é uma miopatia inflamatória recessiva fatal ligada ao cromossomo X (locus Xp21) que afeta 1 a cada 3500 meninos nascidos vivos. A maioria dos pacientes apresenta deleção e/ou ampla mutação no gene dmd, o que determina a não expressão ou a expressão de uma molécula truncada não funcional da isoforma 427kDa da proteína distrofina nas células musculares esqueléticas e outros tipos celulares. As alterações clínicas são evidentes ainda na primeira infância, nas crianças com quatro a cinco anos de idade. A perda da capacidade de deambular ocorre entre oito a dez anos de idade e a evolução para o óbito é em torno da segunda década de vida, geralmente devido à insuficiência cardíaca ou respiratória. O camundongo mdx, um mutante natural que não expressa a distrofina, é amplamente utilizado como modelo animal da DMD e apresenta as alterações histológicas características da doença: mionecrose (6 semanas), regeneração (12 semanas) e fibrose (24 e 48 semanas). Dados anteriores mostram que os diferentes músculos esqueléticos, e cardíaco, se comportam de forma peculiar de acordo com o perfil de sub-populações de células inflamatórias encontradas e cinética de migração. Este trabalho visa avaliar a migração de sub-populações celulares para o músculo cardíaco com possíveis funções efetoras/reguladoras relacionadas à progressão da doença. Os tecidos foram coletados de animais com 2, 6, 12, 24 e 48 semanas de idade e a análise histopatológica mostrou principalmente macrófagos e fibroblastos nos infiltrados inflamatórios em todas as idades. Com relação aos mastócitos, encontramos células principalmente do fenótipo mucoso (MMC) no pericárdio de animais com 2 semanas. Porém, esses mastócitos aparentemente migram para o endocárdio enquanto assumem o fenótipo de mastócitos de tecido conjuntivo (CTMC). Com relação aos linfócitos de sangue, em animais de 6 semanas observamos um fenótipo compatível com a literatura, sendo...