Sensibilidad in vitro de aislados del complejo Paracoccidioides spp a antifúngicos sistémicos utilizando el método de microdilución / In vitro susceptibility of isolates of Paracoccidioides spp complex to systemic antifungals using the microdilution method

El método de referencia, microdilución en caldo, recomendado por el Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorios (CLSI), no está disponible para hongos dimórficos, como los del género Paracoccidioides. En este trabajo se evaluó la sensibilidad in vitro del Complejo Paracoccidoides (n=19) frente a los antifúngicos sistémicos: anfotericina B, 5-fluorocitosina, ketoconazol, itraconazol, fluconazol, voriconazol y caspofungina empleando el método de microdilución (Documento M27-A3 y M27-S3), con algunas modificaciones: tiempo de cultivo en medio de Sabouraud dextrosa agar (7-10 días), medio RPMI 1640 suplementado con glucosa al 2%, tiempo de incubación (7, 8 y 18 días). La sensibilidad in vitro fue variable; la mayoría de los aislados de Paracoccidioides fueron sensibles a ketoconazol (73,7%), seguido de voriconazol (68,4%), itraconazol (63,1%), anfotericina B (52,6%), fluconazol (47,4%), 5-fluorocitosina (42,1%) y caspofungina (5%). La resistencia global fue mayor ante caspofungina (94,7%), seguido de 5-fluorocitocina (52,6%) and anfotericina B (47,4%). El 53% de los aislados fue sensible dosis dependiente a fluconazol, 15,7%, itraconazol y 5,3% a 5-fluorocitosina. Anfotericina B, itraconazol y voriconazol fueron los antifúngicos más potentes contra Paracoccidioides spp (CMI: 0,03-1µg/mL). Basándose en estos resultados, se propone tentativamente un protocolo de ensayo de microdilución para las pruebas de sensibilidad de Paracoccidioides spp frente a fármacos antimicóticos. Esta metodología podría ser clínicamente útil para predecir el desarrollo de resistencias, aunque son necesarios más estudios.

Broth microdilution, the reference method recommended by the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), is not available for use with dimorphic fungi, such as those of the Paracoccidioides genus. In this work, in vitro susceptibility of the Paracoccidioides complex (n=19) to systemic antifungals: amphotericin B, 5-flucytosine, ketoconazole, itraconazole, fluconazole, voriconazole and caspofungin, was evaluated using the microdilution method (Document M27-A3, M27-S3), with some modifications such as: culture time in Sabouraud dextrose agar (7-10 days), RPMI 1640 medium supplemented with 2% glucose and the incubation time (7, 8 and 18 days). The sensitivity in vitro was variable; the majority of Paracoccidioides isolates was susceptible to ketoconazol (73.7%), followed by voriconazole (68.4%), itraconazole (63.1%), amphotericin B (52.6%), fluconazole (47.4%), 5-flucytosine (42.1%) and caspofungin (5%). The overall resistance was mainly to caspofungin (94.7%), followed by 5-flucytosine (52.6%) and amphotericin B (47.4%). Fifty-three percent of the isolates were susceptible-dose dependent to fluconazole followed by itraconazole (15.7%) and 5-fluorocytosine (5.3%). Amphotericin B, itraconazole and voriconazole were the most potent antifungal drugs against Paracoccidioides spp (CMI: 0.03-1µg/mL). Based on these results, we tentatively propose a microdilution assay protocol for susceptibility testing of Paracoccidioides spp to antifungal drugs. This method may be clinically useful to predict resistance, even though further studies are needed.

Tuberculosis y micosis sistémicas en indígenas del Municipio Cedeño Estado Bolívar Venezuela / Tuberculosis and systemic mycoses in indigenous Cedeño Municipality Bolivar State Venezuela

Determinar la prevalencia de tuberculosis y micosis sistémicas endémicas, Paracoccidioidomicosis e Histoplasmosis, en poblaciones indígenas. Se realizó un estudio transversal en pacientes sintomáticos respiratorios de 3 comunidades indígenas del municipio Cedeño del estado Bolívar, Venezuela. Se obtuvieron muestras de esputo y secreción ganglionar para la búsqueda de bacilos ácido-resistentes, el complejo Paracoccidioides sppe Histoplasma capsulatum; se realizó cultivo en medio Lowëstein Jensen y medios selectivos para hongos, además estudio molecular para micobacterias. Se estudiaron muestras de suero para la demostración de anticuerpos específicos contra el Complejo Paracoccidioides sppe H. capsulatum. Se evaluaron 60 pacientes sintomáticos respiratorios. Se demostraron bacilos ácido-resistentes por baciloscopia en 26 casos (43,3%) y 29 cultivos positivos para Mycobacterium tuberculosis (48,3%) resultando un total de 33 pacientes con diagnóstico de tuberculosis; hubo correlación significativa entre los hallazgos en el Ziehl-Nielsen y el crecimiento de M. tuberculosis en cultivo (p=0,013). Se demostró la presencia del Complejo Paracoccidioides spp en 2 casos (3,3%), con coexistencia de bacilos ácido-resistentes. No se evidenció la presencia de H. capsulatum. La tuberculosis constituye la principal causa de infección respiratoria crónica en estas comunidades indígenas y obliga a que se revisen de forma urgente los programas regionales para la atención de estas poblaciones vulnerables, así como a realizar estudios en otras poblaciones.

To determine prevalence of tuberculosis and endemic systemic mycoses, Paracoccidiodomycosis (PCM) and Hystoplasmosis in native populations. A transversal study in individuals with respiratory symptoms from 3 native populations from Cedeño County from Bolivar state, Venezuela, was realized. Sputum and spontaneous lymphatic node secretion samples were obtained to look for acid-resistant bacilli, Paracoccidioides spp complex and Histoplasma capsulatum. Culture in Lowëstein-Jensen and selective media to fungi, andmolecular study formycobacteria were realized. Serum samples were studied to demonstrate specific antibodies against Paracoccidioides spp complex and H. capsulatum. Sixty individuals had respiratory symptoms. Acid-resistant bacilli were demonstrated in 26 cases by bacilloscopy (43.3%) and 29 positive cultures for Mycobacterium tuberculosis (48.3%), resulting 33 patients with diagnosis of tuberculosis; there was significative correlation between features in bacilloscopy and growing of M. Tuberculosis in Lowëstein-Jensen media (p=0.013). Presence of the characteristic yeastlike forms of Paracoccidioides spp complex was found in 2 cases (3.3%) with coexistence of acidresistant bacilli in both. There was no evidence of H. capsulatum. Tuberculosis constitutes the principal origin of chronic respiratory infection in these native populations and it should conduce to revise urgently the regional programs attending to these vulnerable populations.

Casuística de cromomicosis en el estado Bolívar (1987-2010) y evaluación de la sensibilidad in vitro de dos aislados de Fonsecaea pedrosoi / Chromomycosis cases in Bolivar State (1987-2010) and evaluation of the in vitro sensitivity of two Fonseca pedrosoi isolates

El objetivo de este estudio fue determinar la prevalencia de cromomicosis en un período de 23 años en dos hospitales de referencia del estado Bolívar. Se realizó un estudio retrospectivo, mediante la revisión de historias clínicas de pacientes con diagnóstico de cromomicosis, registrándose catorce casos de la enfermedad. El 78,6% correspondieron al sexo masculino, en su mayoría agricultores provenientes de zonas rurales; el 28,6% presentaron lesiones verrugosas. El tiempo de evolución de las lesiones osciló entre 5 meses y 35 años. Fonsecaea pedrosoi fue el agente etiológico aislado en tres (21,4%) de los cuatro pacientes en que las muestras fueron cultivadas. Sólo a dos aislados conservados de F. pedrosoi se les evaluó la sensibilidad in vitro mediante E-test®, demostrándose resistencia a los antifúngicos sistémicos: anfotericina B, 5-fluorocitosina, ketoconazol, fluconazol e itraconazol. Dos pacientes fueron tratados con itraconazol: uno de ellos mejoró; el otro presentó comorbilidad con micetoma eumicótico y falleció. La prevalencia de cromomicosis durante el período estudiado fue baja (0,6 casos/año), sin embargo esta infección representa un problema de salud en el personal de riesgo, principalmente agricultores y mineros del estado Bolívar, que presentan lesiones verrugosas de evolución crónica.

The purpose of this study was to determine chromomycosis prevalence during a 23-year period at two reference hospitals of Bolivar State. A retrospective study was carried out through the revision of clinical case histories of patients with a chromomycosis diagnosis, registering fourteen cases of this disease. Of these cases, 78.6% corresponded to males, most of them agricultural workers from rural areas; 28.6% presented verrucous lesions. The period of evaluation of the lesions varied between 5 months and 35 years. Fonsecae pedrosoi was the etiologic agent isolated in three (21.4%) of the four patients whose samples were cultured. Sensitivity was evaluated in vitro in only two cases through E-test®, showing resistance to systemic antifungals agents: amphotericine-B, 5-fluorocytosine, ketoconazole, fluconazole and itraconazole. Two patients were treated with itraconazol, one of them improved and the other presented co-morbility with eumycotic mycetoma and died. Chromomycosis prevalence during the period studied was low (0.6 cases/year); nevertheless, this infection constitutes a health problem for risk populations, mainly agricultural and mining workers at Bolivar State who present verrucous lesions with a chronic evolution.

Zigomicosis en el Complejo Hospitalario Universitario “Ruiz y Páez”, Ciudad Bolívar, período 1984-2007 / Zygomycosis at the “Ruiz y Paez” University Hospital Complex, Ciudad Bolivar, during the 1984-2007 period

La zigomicosis es una infección grave en pacientes inmunocomprometidos. El objetivo de este estudio fue presentar los casos de zigomicosis registrados en un período de 23 años en el hospital de referencia del estado Bolívar. Se realizó una investigación retrospectiva de las historias clínicas de pacientes en el hospital de referencia del estado Bolívar. Todos los pacientes a quienes se les realizó diagnóstico de zigomicosis por biopsia entre enero 1984 y enero 2007 fueron incluidos en este estudio. Se identificaron 6 casos de pacientes con zigomicosis. Todos los casos tuvieron como factor predisponente la diabetes mellitus. Tres casos correspondieron a la forma rinosinusal, de los cuales uno tuvo complicación cerebral y los otros 3 casos presentaron compromiso cutáneo. Hubo 2 casos de mortalidad. El tratamiento agresivo de la enfermedad localmente invasiva es importante para prevenir la diseminación rápida y fatal de esta micosis. Los pacientes con diabetes mellitus descompensada están en riesgo de desarrollarla.

Zygomycosis is a serious infection in immunocompromised patients. The purpose of this study was to present the zygomycosis cases registered during a 23 year period at the reference hospital in Bolivar State. A retrospective analysis of all the clinical case histories was done at the mentioned hospital in Bolivar State. All patients who were diagnosed with zygomycosis through a biopsy between January 1984 and January 2007 were included in the study. Six patients were identified with zygomycosis. All cases had diabetes mellitus as predisposing factor. Three cases corresponded to the rinosinusidal form, one of which had a cerebral complication, and the other 3 presented cutaneous compromise. There were 2 deaths. Aggressive treatment of the locally invasive disease is important to prevent a fast and fatal dissemination of this mycosis. Patients with uncompensated diabetes mellitus are under risk of developing it.

Etiología de diarrea aguda en niños menores de 5 años Ciudad Bolívar, Venezuela / Etiology of acute diarrhea in children under five years of age in Ciudad Bolivar, Venezuela

Se determinó la etiología infecciosa de la diarrea aguda en niños menores de 5 años en Ciudad Bolívar, Estado Bolívar. Para ello, se procesaron 110 muestras de heces. Se realizó un examen directo de heces, métodos de concentración Kato-Katz, formol-éter y Kinyoun para identificación de parásitos; detección de antígenos virales de Adenovirus y Rotavirus mediante Látex Diarlex®, coprocultivo y Tricrómica modificada de Ryan-Blue para Microsporidium spp. La prevalencia de parasitosis intestinal fue 27,3%, siendo Blastocystis hominis y Giardia lamblia las más frecuentes (11,8% y 9,2% respectivamente). Once muestras resultaron positivas para Rotavirus (10,0%) y 3 para Adenovirus (2,7%). Las enterobacterias diagnosticadas fueron Escherichia coli enteropatógena (2,7%; 3/110), Salmonella spp (1,8%; 2/110) y Shigella spp (0,9%; 1/110). Los síntomas más frecuentes fueron: fiebre (40,1%) y dolor abdominal (27,3%). No se observó Microsporidium spp. No hubo asociación significativa entre la presencia de enteropatógenos y los síntomas (p>0,05). Se concluye que la etiología de las diarreas agudas en niños menores de 5 años en Ciudad Bolívar, durante el período de estudio, fue principalmente de origen parasitario y viral.

The infectious etiology of acute diarrhea in children under five years of age in Ciudad Bolivar, Bolivar State was determined. One hundred and ten stool samples were processed. The tests included direct examination, the Kato-Katz concentration method, the formol-ether method and the Kinyoun method for parasite identification, detection of viral Adenovirus and Rotavirus antigens through Latex Diarlex ®, stool culture, and modified Ryan-Blue trichromic stain for Microsporidium spp. Prevalence of intestinal parasitosis was 27.3% and Blastocytis hominis and Giardia lamblia were the most frequent parasites (11.8% and 9.2% respectively). Eleven samples were positive for Rotavirus (10.0%) and 3 for Adenovirus (2.7%). The enterobacteria diagnosed were enteropathogenic Escherichia coli (2.7%; 3/110), Salmonella spp (1.8%; 2/110) and Shigella spp (0.9%; 1/110). The most frequent symptoms were: fever (40.1%) and abdominal pain (27.3%). Microsporidium spp was not observed. There was no significant association between presence of enteropathogens and symptoms (p>0.05). It is concluded that the etiology of acute diarrhea in children under five years of age in Ciudad Bolivar during the study period was mainly of parasite and viral origin.

Sistemic mycosis associated to tuberculosis in Bolívar state Venezuela

Se determinó la frecuencia y características clínicas de las micosis sistémicas endémicas asociadas a tuberculosis en el estado Bolívar. Se revisaron las historias clínicas de los casos con diagnóstico confirmado de micosis sistémicas y tuberculosis en un período de cinco años. Se detectaron 7 casos de las micosis sistémicas endémicas en la región, Paracoccidioidomicosis e Histoplasmosis, asociadas a tuberculosis. Todos los pacientes procedían del estado Bolívar, sólo uno era del sexo femenino y ninguno tenía serología positiva para la infección por el Virus de Inmunodeficiencia Humana. Todos presentaron manifestaciones pulmonares, la mayoría sintomáticos y con pérdida de peso (6 de 7). En todos los casos, se evidenciaron alteraciones en el estudio radiológico del tórax, con diferentes patrones, predominando el compromiso alveolar difuso bilateral. En 6 de los 7 pacientes, se observaron bacilos ácidos resistentes en muestras de esputo. La micosis más frecuentemente asociada a tuberculosis fue Paracoccidioidomicosis (6 de 7). Todos los pacientes recibieron tratamiento antimicótico y tratamiento antituberculoso con cuatro drogas y todos mostraron mejoría. La asociación de micosis sistémicas endémicas con tuberculosis no es rara en el estado Bolívar, por tanto, la asociación de estas infecciones deberían investigarse sistemáticamente.

The frequency and clinical characteristics of endemic systemic mycosis associated with tuberculosis were determined in Bolívar State. Clinical case records with confirmed diagnoses of systemic mycosis and tuberculosis were reviewed for a 5-year period. Seven cases of systemic mycoses endemic to the region were detected: Paracoccidioidomycosis and Histoplasmosis, associated with tuberculosis. All patients came from Bolívar state; only one was feminine and no one was seropositive for the Human Immunodeficiency Virus. All presented pulmonary compromise, mostly symptomatic, accompanied by weight loss (6 of 7). In all cases, alterations appeared on the radiological study of the thorax, mainly diffuse bilateral alveolar compromise. In 6 of the 7 patients, acid-resistant bacilli were observed in sputum samples. The mycosis most frequently associated with tuberculosis was Paracoccidioidomycosis (6 of 7); the other associated mycosis was Histoplasmosis (1 of 7). All patients received antimycotic and 4-drug anti-tuberculosis treatments and all of them improved. The association of endemic systemic mycosis with tuberculosis is not unusual in Bolívar state and therefore, the association of these infections should be systematically investigated.

Meningoencephalitis by Naegleria fowleri: epidemiological study in Anzoategui state, Venezuela

Um caso de meningoencefalite amebiana primária, causada por Naegleria fowleri, foi diagnosticada no município de Independência no Estado de Anzoategui, Venezuela. Este caso motivou a realização deste estudo epidemiológico com o objetivo de identificar amebas de vida livre nessa área. Foram colhidas amostras representativas de água e realizadas análises fisicoquímicas e microbiológicas. Trofozoítos e cistos de Naegleria spp foram detectados em 44,4% (n=4). Verificou-se excelente concordância entre a observação das amebas de vida livre em esfregaços e aquelas de culturas monoxênicas em ágar não nutriente com Klebsiella pneumoniae (Kappa=1; p=0,003). Obteve-se uma carga variável de microrganismos mesófilos aeróbicos. As médias de mofos e leveduras foram de 3,0 CFU/ml (SD+2,0) e 102,9 CFU/ml(SD+32,2), respectivamente. Cem por cento das amostras apresentaram um número maior provável de coliformes totais e fecais de 240.000 NMP/100ml. Naegleria spp estava presente nas águas do município de Independência no Estado de Anzoategui, o que constitui um risco para a população que usa essas fontes.

Casuística de las micosis en el hospital universitario "Ruiz y Páez" Ciudad Bolívar Venezuela 2002 / Mycoses at hospital universitario

Con el objetivo de determinar la prevalencia de las micosis en el Hospital Universitario "Ruiz y Páez" (Ciudad Bolívar, Venezuela) durante el año 2002, se realizó un estudio retrospectivo de los casos con diagnóstico de micosis. Hubo 456 casos de micosis de un total de 250.956 pacientes atendidos en el período 2002 (0,2 por ciento). El 94,5 por ciento eran micosis cutáneas. Estas infecciones fueron debidas a dermatofitos, Malassezia furfur y Candida spp. en el 90,0 por ciento de las veces. Las micosis profundas ocurrieron en un 4,7 por ciento, consistentes en histoplasmosis (2,6 por ciento), paracoccidioidomicosis (1,7 por ciento) y criptococosis (0,4 por ciento). Varios de los pacientes afectos de micosis sistémicas presentaban otras patologías concomitantes, como infección por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana, tuberculosis, neoplasias y trastornos hematológicos. La frecuencia de micosis en la población general atendida en el Hospital Universitario "Ruiz y Páez" es baja, predomina la afectación superficial, y la profunda suele evidenciarse en pacientes con factores predisponentes

Prevalencia de blastocistosis y otras parasitosis intestinales en una comunidad rural del Estado Anzoátegui, Venezuela / Prevalence of blastocistosis and others intestinal parasitoses in rural community from anzoategui state, Venezuela

Para determinar la prevalencia de infección por Blastocystis hominis y otros parásitos intestinales en habitantes de "Tamarindo", comunidad rural del estado Anzoátegui, Venezuela, se evaluaron 138 pobladores. Una muestra fecal obtenida por evacuación espontánea de cada persona fue analizada mediante la técnica de examen directo y el método de concentración de Willis. La prevalencia de parasitosis intestinal fue de 95,7 por ciento los protozoarios fueron más frecuentes que los helmintos con 90,1 por ciento. B. hominis fue el parásito más común (66,7 por ciento) y no se observó diferencias de infección según el sexo y edad (p > 0,05) en las personas. El 73, 9 por ciento de las personas infectadas con este protozoo tenían además infecciones por otros parásitos o comensales.