Estudo comparativo da viabilidade de ovário criopreservado por congelamento lento e vitrificação em ratas / Comparative study of ovarian cryopreservation by slow freezing and vitrification in mice

INTRODUÇÃO: A criopreservação de células e tecidos germinativos objetiva proteger o potencial fértil em pacientes submetidas a tratamentos que induzam à infertilidade. Objetivo: Comparar congelamento lento e vitrificação de tecido ovariano e verificar o tipo folicular com maior viabilidade no tecido criopreservado. MATERIAL E MÉTODOS: 58 ratas tiveram seus ovários ressecados, dissecados e fragmentados e divididos em dois grupos: A (27 ratas): criopreservados por congelamento lento; e B (31 ratas) - vitrificados. As amostras foram submetidas à avaliação histológica geral pela coloração com H/E, e à avaliação imunohistoquímica com anti-Ki-67. RESULTADOS: Para análise estatística, os testes paramétricos Qui-quadrado de Student e o teste não-paramétrico de Wilcoxon, com nível de significância de 5% (p menor que 0,05). No momento 0 todas as amostras de ambos os grupos apresentaram histologia normal. Após a criopreservação, todas as amostras do Grupo A apresentaram alterações histológicas em diferentes níveis e, em 55,6% dos fragmentos houve sinais de necrose. Das amostras do Grupo B, 22,6% apresentaram alterações histológicas reversíveis e não houve necrose. A análise imunohistoquímica demonstrou que, na comparação entre os momentos, com relação à positividade para o Ki-67 em folículos primordiais, somente foi observada diferença significativa para o Grupo B. No momento 1, o Grupo B apresentou diferença significativa para a marcação em folículos primordiais (p igual a 0,026) e probabilidade limítrofe em folículos primários (p igual a 0,082). CONCLUSÃO: A vitrificação demonstrou menor grau de degeneração tissular e maior índice de viabilidade folicular. Folículos primordiais são os que apresentam maior viabilidade após a criopreservação

Marcador KI-67 como índice preditivo da viabilidade de ovário criopreservado por congelamento lento e vitrificação em ratas / Ki-67 marker used as a predictive index of the viability of cryopreserved ovaries through slow freezing and vitrification in rats

Avaliar duas técnicas de criopreservação de tecido ovariano: congelamento lento e vitrificação, por meio de marcação imunohistoquímica com anticorpo primário anti ki 67 e verificar o tipo folicular mais resistente à criopreservação. 58 ratas foram submetidas à ooforectomia bilateral e divididas em dois grupos: A: 27 ratas cujos fragmentos ovarianos foram criopreservados com a técnica de congelamento lento e B: 31 ratas cujas secções ovarianas foram criopreservadas por vitrificação. Amostras do tecido foram submetidas à avaliação imunohistoquímica com e observaram-se células foliculares positivas para o marcador. Analisaram-se os fragmentos no momento 0 (dia da ooforectomia) como controle e no 43 dia após esse procedimento, momento 1. Na comparação significativa para marcação em folículos primário e secundário, para ambos os grupos. Na comparação entre os grupos não foi observada diferença significativa no momentoO. No momento 1, o Grupo B apresentou diferença significativa para a marcação em folículos primordiais (p=0,026), ou seja, houve um número maior de amostras Ki67 positivas nesse grupo. A marcação com Ki67 demonstrou que, embora ambos os métodos de congelamento ovariano resultem em tecidos potencialmente viáveis, a vitrificação manteve maior número de folículos primordiais potencialmente funcionantes, podendo ser considerada melhor técnica de criopreservação de tecido ovariano do que o congelamento lento, em ratas. Os folículos primordiais são os que melhor resistem ao processo de criopreservação, tanto por congelamento lento como por vitrificação.

Avaliação da ação da Aroeira (Schinus terebinthifolius Raddi) na cicatrização de feridas cirúrgicas em bexiga de ratos / Evaluation of the aroreira (Schinus terebinthifolius Raddi) in the healing process of surgical incision in the bladder of rats

OBJETIVO: Avaliar a ação cicatrizante do extrato hidroalcoólico da aroeira em bexigas de ratos. MÉTODOS: Foram utilizados 40 ratos machos da linhagem Wistar, divididos em dois grupos de 20, denominados grupo aroeira (GA) e grupo controle (GC). Todos foram submetidos à incisão abdominal mediana com cistotomia de 1 cm, seguida de cistorrafia em plano único com pontos separados de poliglactina 910 5-0 (Vicryl®). Após este procedimento, nos animais GA injetou-se 100mg por quilo de peso de extrato hidroalcoólico da aroeira na cavidade peritoneal e nos GC injetou-se 1 ml por quilo de peso de solução salina a 0,9 por cento . Cada grupo foi dividido em dois sub-grupos de 10 animais de acordo com a data da morte: sub-grupo A3 e C3, sacrificados no 3° dia pós-operatório e sub-grupo A7 e C7, sacrificados no 7° dia. A parede, a cavidade abdominal e a sutura da bexiga foram avaliadas macroscopicamente. Amostras de tecido da bexiga foram retiradas e analisadas histologicamente, utilizando a coloração de Hematoxilina-Eosina (HE) e tricrômio de Masson. RESULTADOS: Na análise macroscópica observou-se infecção na incisão cirúrgica em três ratos do GC e em um do GA, e aderências peritoneais em 29 ratos do GC controle e 17 no GA. A avaliação microscópica mostrou processo inflamatório agudo mais severo no 3° (p=0,045) e no 7° dia (p=0,002). Evidenciou-se ainda diferença estatística nos parâmetros utilizados para a avaliação histológica da cicatrização da bexiga nas variáveis colagenização (p = 0.001), reepitelização (p = 0,046) e neoformação (p = 0) nos subgrupos GC e GA no 3° dia e na variável neoformação vascular (p=0,001) no subgrupo do 7° dia. CONCLUSÃO: O uso de extrato hidroalcoólico de aroeira mostrou efeito cicatrizante favorável nas cistotomias em ratos.

PURPOSE: To evaluate the hydroalcoholic aroeira extract in the healing process of surgical incisions in the bladder of rats in an experimental comparative study. METHODS: Forty male Wistar rats were used. All of them underwent a median abdominal incision, with an 1cm cistotomy, followed by one plan suture with separated stitches of poliglactine 910 5-0. The animals were then divided into two groups of 20 rats each, and named the aroeira group (GA) and the control group (GC). In the first one, 80 percent hydro-alcoholic plant extract was injected in the peritoneal cavity, in a one dose of 100mg/kg. The second group, a 0.9 percent saline solution was injected in place of aroeira extract. Each group was divided into two subgroups (SGA and SGC) of 10 animals. According to their scheduled death, they were named subgroups SGA3 and SGC3 when killed in the 3th day after surgery and subgroups SGA7 and SGC7 in the 7th day. The abdominal cavity and the bladder suture were macroscopically evaluated. RESULTS: The microscopic analysis of the surgical incision in the bladder was performed by means of the hematoxilin-eosine stain and the trichrome of Masson. The macroscopic analysis showed an infection in the surgical incision in three rats of the SGC group and in one of the SGA, and peritoneal adhesion in the 26 rats belonging nine to SGC and 17 in the SGA. The microscopic evaluation revealed a more severe acute inflammation process in the SGC on the 3th (p=0.045) and in the 7th (0=0.002) days. In the SGA, a more significant colagenization (p=0.001) could be seen, as far as the evidence of vascular neoformation (p=0.002) on the 3th day. Chronic inflammatory reaction (p=0.006) and a more intense vascular neoformation (p=0.001) were observed in the 7th day. CONCLUSION: The hydroalcoholic aroeira extract have a favorable effect in the healing process of cystotomies done in rats.

Avaliação hormonal indireta e estudo da preservação folicular em tecido ovariano autólogo transplantado para região inguinal em ratos / Indirect hormonal evaluation and study of the follicles preservation in the ovarian transplantation tissue in rats inguinal region

OBJETIVO: O transplante autólogo de tecido ovariano tem sido objeto de estudo de diversos pesquisadores pela perspectiva de manter a funcionalidade deste órgão, mesmo não localizado em seu sítio habitual, sendo daí removido, a fim de minimizar os efeitos causados, por exemplo, pela radioterapia. Este trabalho visa a analisar a efetividade da técnica de autotransplante subcutâneo de tecido ovariano bisseccionado em região inguinal de ratas albinas, próximo aos vasos femorais, através do estudo indireto da produção hormonal, feita pela avaliação da citologia de esfregaços vaginais e do estudo direto da viabilidade tecidual, realizado por meio da análise histológica. MÉTODOS: Analisaram-se 30 ratas, que sofreram ooforectomia bilateral, sendo 15 delas destinadas ao controle e 15 submetidas ao transplante ovariano. Decorridos 28 dias, recuperaram-se e avaliaram-se os enxertos. As análises da citologia dos esfregaços vaginais efetuaram-se no momento 0, ou seja, pré-transplante, e no momento 1, pós-transplante, para os animais de ambos os grupos e a avaliação histológica realizou-se no momento 0 para os dois grupos e no momento 1 para os animais transplantados. RESULTADOS: Os resultados do experimento demonstraram a viabilidade e funcionalidade dos enxertos em 100 por cento das lâminas analisadas, isso verificado através da obtenção de esfregaços em fase de estro para todas as ratas do grupo experimento e da presença de folículos em vários estágios de desenvolvimento, observados nos enxertos recuperados, indicando diretamente a viabilidade do tecido ovariano. CONCLUSÃO: o transplante de tecido ovariano é uma alternativa viável, nas condições do experimento, para a preservação hormonal e folicular, em ratas.