Cultivo de Acanthamoeba spp. en agua apirógena / Acanthamoeba spp. culture in pyrogen-free water / Cultura de Acanthamoeba spp. em água apirogênica

Resumen El objetivo de este estudio fue evaluar el cultivo de cepas de Acanthamoeba spp. en agua destilada estéril apirógena de uso farmacéutico. Se utilizaron dos cepas de genotipo T4 [un aislamiento de encefalitis granulomatosa amebiana (EGA) y una ambiental] y cepas correspondientes a los genotipos T5 y T15. Los quistes de cada una de las cepas se sembraron en placas de Petri con agar no nutritivo con diferentes soluciones (agua destilada estéril apirógena uso médico para preparaciones inyectables, agua destilada filtrada, medio Page) y combinados con suspensiones de Escherichia coli. Las placas se incubaron a 37 °C y se monitorearon diariamente durante 15 días para la detección de trofozoítos. El crecimiento se evaluó mediante examen microscópico directo. Cada cultivo contó con cuatro repeticiones para cada una de las cepas (n=96). En conclusión, se hallaron diferencias estadísticamente significativas en el crecimiento de las cepas por día. Las cepas T5 y T4 (encefalitis amebiana granulomatosa) desarrollaron mayor cantidad de trofozoítos en el primer día respecto de la cepa T15 (H=16,42; p=0,001). En el agua apirógena con E. coli se obtuvo un crecimiento igual a la solución de Page con E. coli (H=24,64; p=0,0001). No se hallaron diferencias estadísticamente significativas en la cantidad de trofozoítos obtenidos en agua apirógena con E. coli y solución de Page con E. coli en la cepa T4 (EGA) (U=4; p<0,05) pero sí en la cepa T4 ambiental (U=0; p<0,05).

Abstract The objective of this study was to evaluate the culture of strains of Acanthamoeba spp. in sterile apyrogenic distilled water for pharmaceutical use. Two T4 genotype strains [one isolate of granulomatous amebic encephalitis (GAE) and one environmental], a T5 and T15 genotype strains were used. The cysts of each of the strains were seeded in Petri dishes with non-nutritive agar with different solutions (pyrogenic sterile distilled water for medical use for injectable preparations, filtered distilled water, Page medium) and combined with Escherichia coli suspensions. Plates were incubated at 37 °C and monitored daily for 15 days for the detection of trophozoites. Growth was assessed by direct microscopic examination. Each medium culture counted four replicates for each of the strains (n=96). Concluding, statistically significant differences were found in the growth of the strains per day. Strains T5 and T4 (granulomatous amebic encephalitis) developed a greater number of trophozoites on the first day compared to strain T15 (H=16.42; p=0.001). In apyrogenic water with E. coli, a growth equal to Page's solution with E. coli was obtained (H=24.64; p=0.0001). No statistically significant differences were found in the amount of trophozoites obtained in apyrogenic water with E. coli and Page's solution with E. coli in strain T4 (GAE) (U=4; p<0.05), but significant differences were found in the environmental T4 strain (U=0; p<0.05).

Resumo O objetivo deste trabalho foi avaliar o cultivo de cepas Acanthamoeba spp. em água destilada apirogênica estéril para uso farmacêutico. Foram utilizadas duas cepas de genótipo T4 [um isolamento de encefalite granulomatosa amebiana (EGA) e uma ambiental], e cepas correspondentes aos genótipos T5 e T15. Os cistos de cada uma das cepas foram semeados em placas de Petri com ágar não nutritivo com diferentes soluções (água destilada estéril apirogênica para uso médico para preparações injetáveis, água destilada filtrada, meio Page) e combinados com suspensões de Escherichia coli. As placas foram incubadas a 37 °C e monitoradas diariamente durante 15 dias para detecção de trofozoítos. O crescimento foi avaliado através de exame microscópico direto. Cada cultura contou com quatro réplicas para cada uma das cepas (n=96). Em conclusão, diferenças estatisticamente significativas foram encontradas no crescimento das cepas por dia. As cepas T5 e T4 (encefalite amebiana granulomatosa) desenvolveram maior número de trofozoítos no primeiro dia em relação à cepa T15 (H=16,42; p=0,001). Em água apirogênica com E. coli, foi obtido crescimento igual ao da solução de Page com E. coli (H=24,64, p=0,0001). Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas na quantidade de trofozoítos obtidos em água apirogênica com E. coli e solução de Page com E. coli na cepa T4 (EGA) (U=4; p%<0,05), mas sim na cepa T4 ambiental (U=0; p<0,05).

Aislamiento de Acanthamoeba spp. en salas cerradas de un hospital de la provincia de Buenos Aires, Argentina / Isolation of Acanthamoeba spp. in closed rooms of a hospital in Buenos Aires province, Argentina

Resumen Las amebas de vida libre (AVL) son protozoos ubicuos con cuatro géneros patógenos para el ser humano: Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia, y Sappinia. Acanthamoeba puede actuar como reservorio de microorganismos (endosimbiontes), por lo cual, en medio hospitalario, implicaría un riesgo para la transmisión de bacterias, virus y hongos intranosocomiales. Se investigó la presencia de AVL, con énfasis en Acanthamoeba spp., en un hospital pediátrico de la provincia de Buenos Aires, Argentina. Se colectaron 22 muestras de lavamanos e incubadoras en salas de Neonatología y Terapia Intensiva, las que fueron cultivadas a 37 y 42 °C. Los aislados fueron identificados molecularmente. El 63,64% de las muestras presentaron Acanthamoeba spp. Esta investigación representa el primer estudio realizado en la Argentina sobre la detección de Acanthamoeba spp. en salas cerradas de un hospital. Su presencia es una señal de alarma y resulta un blanco útil para investigar posibles reservorios de microorganismos patógenos en ambientes hospitalarios.

Abstract Free-living amoebae (FLA) are ubiquitous protozoa with four pathogenic genera for humans: Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia, and Sappinia. Acanthamoeba can act as a reservoir of microorganisms (endosymbionts), for which reason, in a hospital environment, it would imply a risk for transmission of nosocomial bacteria, viruses and fungi. The presence of AVL, with emphasis on Acanthamoeba spp., was investigated in a pediatric hospital. Twenty-two samples were collected from sinks and incubators in Neonatology and Intensive Care rooms, which were cultured at 37 and 42 °C. The isolates found were molecularly identified. A total of 63.64% of the samples presented Acanthamoeba spp. This research represents the first study in Argentina on the detection of Acanthamoeba spp. in closed rooms of a hospital. Its presence is an alarm signal, and it is a useful target to investigate possible reservoirs of pathogenic microorganisms in hospital environments.

Resumo As amebas de vida livre (AVL) são protozoários ubíquos com quatro gêneros patogênicos para o ser humano: Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia, e Sappinia. Acanthamoeba pode atuar como um reservatório de microrganismos (endossimbiontes), e portanto, em um ambiente hospitalar, representaria um risco de transmissão de bactérias, vírus e fungos intra-nosocomiais. A presença de AVL, com em Acanthamoeba spp. em um hospital pediátrico da província de Buenos Aires, Argentina, foi investigada. Vinte e duas amostras foram coletadas em lavatórios e incubadoras em Salas de Neonatologia e Cuidados Intensivos, cultivadas a 37 e 42 °C. Os isolados foram identificadas molecularmente. Foram encontradas Acanthamoeba spp. em 63,64% das amostras. Esta investigação representa o primeiro estudo realizado na Argentina sobre a detecção de Acanthamoeba spp. em salas fechadas de um hospital. A sua presença é um sinal de alarme e um alvo para investigar possíveis reservatórios de microrganismos patogênicos em ambientes hospitalares.

Alternativa rápida de extracción de ADN en quistes de Acanthamoeba para uso en el laboratorio de análisis clínicos / Rapid DNA extraction alternative in cysts of Acanthamoeba for use in clinical analysis laboratory

Resumen El objetivo del estudio fue comparar la extracción de ADN de quistes de Acanthamoeba sp. con un método disponible comercialmente y cuatro no comerciales utilizando tratamiento térmico y ultrasonido para la amplificación por una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) convencional, reduciendo tiempos de preparación y extracción de las muestras, como una herramienta para el diagnóstico en el laboratorio clínico. Se utilizó una cepa de Acanthamoeba, genotipo T4, cultivada en agar no nutritivo. Los quistes para analizar, en tres períodos de enquistamiento, se almacenaron a temperatura ambiente. Se extrajo ADN mediante cinco métodos: pretratamiento térmico, ultrasonido y combinaciones de ellos. La PCR se llevó a cabo utilizando cebadores específicos JDP1/JDP2. La concentración y pureza del ADN extraído con los protocolos evaluados revelaron diferencias estadísticamente significativas (p<0,0001). El método E (comercial), el A (térmico) y el B (ultrasonido) lograron los mejores rendimientos en la amplificación del fragmento específico de Acanthamoeba sp. por la PCR convencional.

Abstract The objective of the study was to compare the DNA extraction of Acanthamoeba sp. cysts with a commercially available method and four non-commercial ones, with heat and ultrasound treatment that allows amplification by conventional polymerase chain reaction (PCR), reducing sample preparation and extraction times, such as a tool for diagnosis in the clinical laboratory. To this aim, a strain of Acanthamoeba T4 grown on non-nutrient agar was used. Plates with cysts at three different encystation times were stored at room temperature until the study was carried out. DNA was extracted with five methods that included pretreatments (thermal and ultrasound) or combinations of them. PCR was performed using specific primers JDP1/JDP2. Concentration and purity of DNA revealed statistically significant differences (p<0.0001) between methods. Method E (commercial), method A (thermal) and B (ultrasound) got the best yields in amplifying the specific fragment of Acanthamoeba sp. by conventional PCR.

Resumo O objetivo do estudo foi comparar a extração de DNA de cistos de Acanthamoeba sp. com um método comercialmente disponível e quatro não comerciais utilizando tratamento térmico e ultrassom para amplificação por reação em cadeia da polimerase (PCR) convencional, reduzindo os tempos de preparo e extração das amostras, como ferramenta para o diagnóstico no laboratório clínico. Foi utilizada uma cepa de Acanthamoeba, genótipo T4, cultivada em ágar não nutritivo. Os cistos para analisar foram armazenados em temperatura ambiente, correspondendo a três períodos de encistamento. O DNA foi extraído por cinco métodos: pré-tratamento térmico, ultrassom e combinações deles. A PCR foi realizada usando iniciadores específicos JDP1/JDP2. A concentração e a pureza do DNA extraído com os protocolos avaliados revelaram diferenças estatisticamente significativas (p<0,0001). Os métodos E (comercial), A (térmico) e B (ultrassom) alcançaram os melhores rendimentos na amplificação do fragmento específico de Acanthamoeba sp. por PCR convencional.

Detección de Chlamydia abortus en pérdidas reproductivas de bovinos en la provincia de La Pampa, Argentina / Detection of Chlamydia abortus in bovine reproductive losses in the province of La Pampa, Argentina

Las pérdidas reproductivas constituyen una causa importante de pérdida económica en el ganado bovino, aunque en más del 50% de los casos la etiología es desconocida. Las especies de la familia Chlamydiaceae han sido asociadas con abortos en bovinos y otras espeChlamydia abortus; cies animales, pero no existen datos al respecto en la República Argentina. El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia de Chlamydia spp. y de Chlamydia abortus en pérdidas reproductivas de ganado bovino en La Pampa, Argentina. Se estudiaron 251 muestras provenientes de abortos y mortinatos. Se realizó PCR en tiempo real para la detección de la familia Chlamydiaceae y ArrayTube para la identificación de las especies presentes. Se detectó ADN de la familia Chlamydiaceae en 12 muestras (4,78%); el 83,33% (10/12) correspondió a abortos y el 16,66% (2/12) a mortinatos. El análisis por ArrayTube detectó C. abortus en 5 muestras (1,99% del total, 41,67% de las muestras con detección de Chlamydiaceae). Este trabajo presenta la primera confirmación de la presencia de ADN de diversas especies de Chlamydiaceae (incluida C. abortus) en muestras de pérdidas reproductivas de ganado bovino en Argentina. El valor de prevalencia hallado (4,78%) debe ser tomado como un valor basal, debido al tipo de muestras estudiadas. Se halló material genético de Chlamydiaceae que no coincidió con ninguna de las especies conocidas; esto podría deberse a variantes intraespecie o a especies autóctonas aún no descriptas. Es necesario avanzar en el estudio de la infección por estas bacterias en el ganado bovino de Argentina para conocer su dimensión y analizar su impacto económico y zoonótico, y también para planear medidas de prevención y control.

Reproductive losses linked to an infectious etiology in bovine cattle are a major economic concern worldwide. In Argentina, more than 50% of abortion cases have unknown causes. Species belonging to Chlamydiaceae family are frequent etiologic agents of abortion around the world; however, there is yet no information on their prevalence in Argentina. The objective of this work was to identify Chlamydia spp., and particularly C. abortus in reproductive losses from bovine cattle in La Pampa, Argentina. Real time PCR targeting Chlamydiaceae-specific DNA fragments was performed on 251 samples obtained from bovine abortions and stillborns, and ArrayTube was used for species identification on positive samples. Chlamydiaceae DNA was detected in 12 samples of aborted fetuses (4.78%), 83.33% (10/12) accounting for abortions and 16.66% (2/12) for stillborns. C. abortus was detected by ArrayTube in 5 cases (1.99% of all samples, and 41.67% of Chlamydiaceae positive samples). This study shows the first detection of Chlamydiaceae and C. abortus DNA on reproductive losses of bovine cattle in Argentina, and the described prevalence value (4.78%) should be taken as baseline value due to the type of samples analyzed. Detection of genetic material from Chlamydiaceae not matching any of the studied species could be due to intraspecies variants or local species not yet described. Further research on Chlamydia infections in bovine cattle in Argentina is imperative to describe their range, to analyze their economic and zoonotic implications and to make recommendations about prevention and control measures.

Aportes al diagnóstico de las infecciones por Acanthamoeba spp / Inputs for diagnosing Acanthamoeba spp. infections

Acanthamoeba spp., tiene capacidad para comportarse como parásito oportunista y ocasionar encefalitis granulomatosa amebiana (EGA), sinusitis y lesiones cutáneas, especialmente en pacientes inmunodeprimidos...

Spatial distribution of canine zoonotic enteroparasites in Bahía Blanca, Argentina / Distribución espacial de enteroparásitos zoonóticos de caninos en Bahía Blanca, Argentina

The objectives of this research were: (1) to determine the occurrence of zoonotic enteroparasites in dog feces from Bahía Blanca, Argentina; (2) to characterize the spatial distribution of the parasites found in association with the quality of life index (QLI) in neighborhoods of Bahía Blanca; and (3) to determine if the presence of a particular parasite genus in a stool sample was facilitated or impeded by the presence of other parasite genera. Samples of dog stools (n = 475) were collected between December 2012 and December 2013 in areas with varying QLI. The association between QLI values and the presence of parasites was analyzed using logistic regression. Overall enteroparasite occurrence was 36.6%. Parasitic forms found included nematode larvae, cysts of Blastocystis spp., Giardia spp., and oocysts of Cryptosporidium spp., and eggs of Ancylostoma caninum, Toxocara canis, cestodes and Trichuris spp. For certain enteroparasites, we detected significant associations between their occurrence and QLI. Feces collected in areas with medium and low QLI were 2.46 and 5.43 times more likely, respectively, to contain A. caninum than stools from the high-QLI area. Samples from areas with low QLI were 2.36 times more likely to contain Trichuris spp. than those from the high QLI area. Regarding protozoa, feces from areas with low QLI were 2.4 times more likely to be positive than those from areas with high QLI. We demonstrated that canine zoonotic parasites have a wide distribution in the study area, and that occurrence is higher in neighborhoods with lower QLI.

Los objetivos del presente trabajo fueron los siguientes: a) determinar la ocurrencia de enteroparásitos zoonóticos en heces de perros de Bahía Blanca, Argentina; b) caracterizar la distribución espacial de los parásitos hallados en función del índice de calidad de vida (ICV) en barrios de Bahía Blanca, y c) determinar si la presencia de un género parasitario en particular en las heces fue facilitada o impedida por la presencia de otro/s. Se recolectaron muestras de heces de perro (n = 475) durante el período diciembre 2012-diciembre 2013 en áreas con diferente ICV. La asociación entre el ICV y la presencia de parásitos fue analizada mediante regresión logística. La ocurrencia global de enteroparásitos fue del 36,6%. Las formas parasitarias detectadas correspondieron a larvas de nematodos, a quistes de Blastocystis spp., Giardia spp. y Cryptosporidium spp., y a huevos de Ancylostoma caninum, Toxocara canis, cestodes y Trichuris spp. Se hallaron asociaciones significativas entre ocurrencia de algunos enteroparásitos e ICV. Las heces recolectadas en áreas con ICV medio y bajo mostraron una probabilidad de contener A. caninum 2,46 y 5,43 veces mayor, respectivamente, que las recolectadas en la zona de ICV alto. Las muestras de zonas con ICV bajo tuvieron una probabilidad 2,36 veces mayor de contener Trichuris spp. que aquellas de áreas con ICV alto. En lo referido a protozoos, las heces de áreas con ICV bajo tuvieron una probabilidad 2,4 veces mayor de presentar quistes que las heces de áreas con ICV alto. Se demostró que los parásitos zoonóticos caninos tienen una amplia distribución en el área estudiada y que la ocurrencia es más alta en los barrios con menor ICV.

Determinantes de infestación durante un brote de trichinellosis en el sudoeste de la provincia de Buenos Aires / Determinants of infestation during an outbreak of trichinellosis in southwest Buenos Aires province / Determinantes da infecçâo durante um surto de triquinose no sudoeste da provincia de Buenos Aires

Se estudió la asociación entre infestación, parámetros de laboratorio y signos clínicos en personas expuestas a infestación por Trichinella spiralis durante un brote de trichinellosis en el sudoeste de la provincia de Buenos Aires, Argentina. Asimismo, se investigó el grado de concordancia entre las pruebas inmunoserológicas más comúnmente utilizadas en el diagnóstico de trichinellosis humana. En las personas expuestas, la presencia de síntomas clínicos y los niveles elevados de la enzima creatina fosfoquinasa al día 7 post-exposición se asociaron significativamente con la infestación al día 30 post-exposición. Por el contrario, la eosinofilia (>7%) a los siete días postexposición no se asoció al estado de infestación a los 30 días post-exposición. El mayor grado de concordancia entre pruebas inmunoserológicas se dio entre el par ELISA-Western Blot tanto al día 7 como 30 post-exposición.

The association between infestation, laboratory parameters and clinical signs was investigated in human patients exposed to Trichinella spiralis during an outbreak of human trichinellosis in southwest Buenos Aires province, Argentina. The degree of agreement between immunoserological tests commonly used for diagnosis of human trichinellosis was determined. Among exposed individuals, the presence of clinical symptoms and high concentration of the creatine phosphoquinase enzyme 7 days post-exposure was significantly associated with infestation by day 30 post-exposure. Contrarily, Randazzo V et al. a high level of eosinophils (>7%) 7 days post-exposure was not associated with infestation by day 30 post-exposure. Test agreement was highest between ELISA and Western Blot both by days 7 and 30 post-exposure.

Foi estudada a associagáo entre a infestagáo, parámetros laboratoriais e sinais clínicos em pessoas expostas à infestagáo por Trichinella spiralis durante um surto de triquinose, no sudoeste da provincia de Buenos Aires, Argentina. Também se pesquisou o grau de concordáncia entre os testes imunosorológicos mais comumente utilizados no diagnóstico de triquinose humana. Em pessoas expostas, a presenga de sintomas clínicos e os níveis elevados da enzima creatina fosfoquinase no dia 7 pós-exposigáo foram associados significativamente à infestagáo no dia 30 pós-exposigáo. Em contraste, a eosinofilia (> 7%) aos sete dias pós-exposigáo náo foi associada ao estado de infestagáo aos 30 dias pós-exposigáo. O maior grau de concordáncia entre testes imunoserológicos ocorreu entre o par de ELISA-Western Blot tanto no dia 7 quanto no dia 30 pós-exposigáo.

Adaptabilidad de cepas argentinas de Trypanosoma cruzi en Dipetalogaster maxima (Uhler, 1894) / Adaptability of Argentine strains of Trypanosoma cruzi in Dipetalogaster maxima

Dipetalogaster maxima habita el sur de la península de Baja California, México. La adaptabilidad de las cepas argentinas de Trypanosoma cruzi a vectores propios de otras latitudes podría tener importancia epidemiológica y para su uso en xenodiagnóstico. El objetivo principal del presente estudio fue investigar si existía buena adaptación de cepas de T. cruzi (circulantes en Santiago del Estero, Argentina) en D. maxima, comparativamente con Triatoma infestans. Se utilizaron ninfas I de D. maxima y ninfas III de T. infestans, criadas en laboratorio. Se realizaron diez xenodiagnósticos sobre pacientes chagásicos crónicos no tratados, con serología positiva para cada especie, en paralelo. El peso promedio de sangre ingerida por cada ejemplar fue 61.4 mg para T. infestans y 63.8 mg para D. maxima. A los 30 días, la materia fecal de los insectos fue examinada al microscopio óptico. Se encontró que el 30% de los ejemplares de T. infestans y el 20% de los de D. maxima estaban infectados. Todos los pacientes que mostraron positividad en el xenodiagnóstico con D. maxima también fueron positivos con T. infestans. Comparados los resultados de infectividad, existió significación estadística válida para afirmar que las cepas de T. cruzi argentinas estudiadas se adaptaban a D. maxima. Consideramos importante este primer registro de infectividad de D. maxima con T. cruzi de pacientes chagásicos crónicos de la Argentina debido a la adaptabilidad significativa demostrada, ya que posibilitaría su utilización para xenodiagnóstico. Además, y a pesar del hábitat y la distribución actual de D.maxima, podría tener repercusiones epidemiológicas futuras, como consecuencia de los procesos de globalización y cambios climáticos que se observan en el planeta.

Efecto de la temperatura sobre la viabilidad de larvas de Trichinella spiralis / Effect of temperature on the viability of Trichinella spiralis larvae

El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de diferentes temperaturas sobre la viabilidad de larvas libres y enquistadas de Trichinella spiralis aisladas en el sudoeste de la provincia de Buenos Aires, Argentina. Se trataron larvas libres y enquistadas a diferentes temperaturas (-30 °C, -20 °C, 4 °C, 20 °C, calentamiento gradual entre 0-100 °C). Se determinó el tiempo necesario para matar el 100 % de las larvas. Durante los primeros días, la mortalidad larvaria en todos los tratamientos con frío aumentó signifcativamente en función del tiempo. En todos los casos, las larvas libres sobrevivieron menor cantidad de días que las enquistadas. A -30 °C, -20 °C y 20 °C no se observaron diferencias signifcativas entre las curvas de mortalidad de cada estadio larvario, pero a 4 °C la mortalidad fue menos intensa entre las larvas enquistadas. El calentamiento disminuyó la viabilidad, sin observarse diferencias entre estadios larvarios. La totalidad de las larvas libres y enquistadas había muerto a los 61 y 95 días (-30 °C), a los 160 y 180 días (-20 °C), a los 280 y 330 días (4° C), y a los 460 y 590 días (20 °C), respectivamente. Fue necesaria una cocción durante 15 minutos a 90 °C para matar al 100 % de las larvas libres y a 100 °C para lograr igual mortalidad de las enquistadas. Nuestros resultados indican que la temperatura y los tiempos tradicionalmente utilizados para tratar productos cárnicos con potencial de transmisión de T. spiralis no serían los más efectivos para lograr la inactivación de la totalidad de larvas vivas de este parásito.

The aim of this work was to study the effect of temperature on the viability of free and encysted larvae of Trichinella spiralis from southwest Buenos Aires province, Argentina. Larvae were treated at variable temperatures (-30 °C, -20 °C, 4 °C, 20 °C, gradual heating between 0-100 °C). The time necessary to kill 100 % of larvae was calculated. During the frst days of freezing, larval mortality signifcantly increased as a function of time. Regardless of temperature, encysted larvae survived longer than the free ones. At -30 °C, -20 °C, and 20 °C there were no signifcant differences between the survival curves for each larval stage. At 4 °C, mortality was less severe for encysted larvae. All free and encysted larvae died at 61 days and 95 days (-30 °C), 160 days and 180 days (-20 °C), 280 days and 330 days (4 °C) and 460 days and 590 days (20 °C), respectively. Cooking at 90 °C and 100 °C during 15 minutes killed 100 % of free and encysted larvae, respectively. Our results suggest that temperatures and exposure times traditionally used to treat meat products with a potential to transmit T. spiralis are not entirely effcient.

Acanthamoeba spp. en piscinas cubiertas de la ciudad de Bahía Blanca, provincia de Buenos Aires, Argentina / Acanthamoeba spp. in indoor swimming pools in Bahía Blanca city, Buenos Aires province, Argentina

Acanthamoeba ha sido aislada de numerosos hábitats incluyendo piletas de natación. Estudiar su distribución es importante ya que algunas especies causan enfermedad en el hombre. El objetivo del presente trabajo fue la búsqueda, aislamiento y caracterización de protozoos del género Acanthamoeba en piscinas cubiertas de la ciudad de Bahía Blanca, Argentina, en las cuatro estaciones del año durante 2007-2008. Se estudiaron 7 piscinas y en cada una se tomaron cuatro muestras: fondo, superficie, raspado de pared y para análisis bacteriológico. Las muestras se analizaron por observación directa y por cultivo en agar no nutritivo a 37 °C y a 42 °C. La identificación genérica se realizó de acuerdo con las características morfológicas de quistes y trofozoítos y para identificar Naegleria se realizó la prueba de transformación ameboflagelar. En 5 de las 7 piscinas se aislaron amebas de vida libre al menos en una época del año. La prueba de transformación ameboflagelar resultó negativa, descartando al género Naegleria. Todos los aislamientos correspondieron al género Acanthamoeba Grupos II y III de Pussard y Pons. Si bien la eliminación de Acanthamoeba en las aguas de natatorios resulta muy difícil por tratarse de un protozoario ubicuo y sumamente resistente a los desinfectantes comúnmente utilizados, se recomienda una limpieza profunda de las piscinas que minimice los riesgos de infección.

Acanthamoeba spp. has been isolated from many habitats, including swimming pools. Investigations on its distribution are relevant because many of its species cause human diseases. The aim of the present work was to investigate, isolate and characterize protozoan of the genus Acanthamoeba from indoor swimming pools in Bahía Blanca, Argentina, in the four seasons, during the 2007-2008 period. Seven pools were studied and samples were collected from the bottom, surface and wall by scraping them. Besides, samples for bacteriological analysis were taken from each pool. The samples were analyzed by direct observation and by culturing on non nutritive agar at 37 °C and at 42 °C. The generic identification was performed according to the morphologic characteristics of cysts and trofozoites, while the amoebo-flagellate transformation test was carried out to identify Naegleria. Free-living amoebas were isolated from five of the seven swimming pools examinated, in at least one season. Naegleria genus was not found as the amoebo-flagellate transformation tests were negative in all samples. All the isolations corresponded to the genus Acanthamoeba belonging to Pussard & Pons morphological Groups II and III. Although elimination of Acanthamoeba from the water is difficult because it is a ubiquitous protozoan. which is highly resistant to the commonly used disinfectants, a thorough cleaning of the pools to minimize the risks of infection is recommended.

Acanthamoeba spp: ecoepidemiología, biología, ultraestructura, patogénesis y diagnóstico en el hombre / Acanthamoeba: ecoepidemiology, biology, ultrastructure, pathogenesis and diagnosis in humans

En el presente trabajo presentamos nuestros estudios referidos al protozoo Acanthamoeba, desde lo morfológico, diagnóstico de laboratorio, patología en el ser humano, aspectos epidemiológicos y resistencia al cloro. Se aisló Acanthamoeba en el 28.6% de los tanques domiciliarios de agua, en el 71% de piscinas cubiertas, en la totalidad de las muestras del arroyo Napostá, que cruza la ciudad de Bahía Blanca, y no fue detectada en el agua de la red. Con referencia a la acción quisticida del cloro, se logró inhibir el crecimiento recién a las tres horas de exposición en 60 ppm de cloro. Realizamos el primer aislamiento de un paciente con queralitis, en Bahía Blanca. Hasta el momento no aislamos Acanthamoeba de otras muestras biológicas. Con referencia a los aspectos morfológicos, documentamos la ultraestructura de las cepas regionales de Acanthamoeba y realizamos la tipificación molecular de la cepa aislada del paciente con queralitis, una afección que, si bien es de baja prevalencia y su diagnóstico etiológico es de fácil ejecución y bajo costo, no justifica no realizar el estudio oportuna y rápidamente. La sensibilidad de la observación directa por microscopia óptica fue del 11.43%, comparada con los cultivos. Finalmente efectuamos un listado de recomendaciones para usuarios de lentes de contacto.

Miasis humana en Bahía Blanca, Argentina: periodo 2000 / 2005 / Human myiasis in Bahía Blanca, Argentina: period 2000 / 2005

Se entiende por miasis a la infestación de vertebrados vivos por larvas de dípteros, que por lo menos durante un corto período, se alimentan de los tejidos vivos o muertos del hospedador, de sus sustancias corporales líquidas o del alimento por él ingerido. El objetivo del presente trabajo fue determinar las especies bioagentes de miasis humanas ocurridas en la ciudad de Bahía Blanca, Argentina, durante el período comprendido entre el 01/03/2000 y el 31/05/2005. Se estudiaron 17 casos clínicos. Las larvas extraídas de las lesiones fueron remitidas de laboratorios y hospitales públicos y privados de dicha ciudad. Parte de las larvas se fijó en alcohol 70° y se procesó según la técnica de Mazza & Jõrg (1939). El resto se crió en condiciones de laboratorio hasta la obtención de los adultos. Se observaron las características diagnósticas de las larvas III y de los ejemplares adultos y se clasificaron taxonómicamente. Las especies bioagentes fueron: Cochliomyia hominivorax (Coquerel) en trece de los casos y Phaenicia sericata (= Lucila sericata) (Meigen) (Diptera: Calliphoridae) en los cuatro restantes. Las miasis fueron traumáticas y aurales, se presentaron durante los meses de Diciembre a Marzo, en la franja etaria de 4 a 86 años, siendo el 76,5 por ciento de los casos de presentación en pacientes masculinos. Teniendo en cuenta la voracidad de las larvas, principalmente las de C. hominivorax, resulta claro que el diagnóstico rápido de miasis y la aplicación del tratamiento adecuado son decisivos para que esta parasitosis se resuelva sin consecuencias graves para el paciente.

Myiasis is the infestation of live human and vertebrate animals with dipterous larvae which, at least for a short period, feed on the host's dead or living tissue, liquid body-substance, or ingested food. The objective of this study was to identify the flies producing myiasis in Bahía Blanca city, Argentina, from 01/03/2000 to 31/05/2005. Seventeen clinical cases were studied. The larvae obtained from lesions were forwarded from laboratories and from public and private hospitals. Part of the larvae were fixed in alcohol 70° and processed according to the Mazza & Jõrg technique (1939). The other part continued growing in flasks with meat in laboratory conditions to obtain the adults. The etiological agents of myiasis were identified by observing the diagnostic characteristics of the larvae III and of the adults, and by using taxonomic keys. Myiasis was produced by Cochlyiomia hominivorax (Coquerel) in thirteen of the cases and by Phaenicia sericata (= Lucila sericata) (Meigen) (Diptera: Calliphoridae) in the other four. The cases were traumatic and aural myiasis and happened from December to March. The ages of patients were four to eighty-six years and 76.5 percent of the cases occurred in male patients. Given the aggressiveness of these larvae, mainly C. hominivorax, in causing human myiasis, the importance of specific and quick diagnosis and of adequate treatment must be acknowledged.

Contaminación de la vía pública con parásitos de importancia zoonótica, en un sector de Bahía Blanca, Provincia de Buenos Aires, Argentina / Urban contamination with zoonotic parasities in ana rea of Bahia Blanca city, Buenos Aires Province, Argentina

El objetivo del presente trabajo fue determinar la prevalencia de formas parasitarias, en heces de perros halladas en las calles del barrio Villa Nocito, de la ciudad de Bahía Blanca (Provincia de Buenos Aires, Argentina). Se recolectaron 647 muestras, y para el estudio parasitoscópico fueron seleccionadas 100, en forma aleatoria, analizándose dos preparados por cada una, entre porta y cubreobjeto, al microscopio óptico. De las 100 muestras analizadas, el 87 fueron positivas. Los parásitos más prevalentes fueron: Ancylostoma spp y Trichuris vulpis (81,6) y 51,7 respectivamente). Por otra parte, se encontró un 10,3 de muestras con huevos de Toxocara canis, estando el 33,3 viables. El 11,1 de los huevos de T. vulpis y el 64,8 de los de Ancylostoma spp. se encontraron larvados. También se detectaron huevos de Capillaria (2,2) y Taenia sp (1,15) y quistes de Giardia sp (1,15) y Coccidios (8,0). Los resultados demostraron una elevada prevalencia de parásitos de importancia zoonótica en heces de perro halladas en la vía pública, lo que significa un importante riesgo ambiental, en el sector estudiado. Además, sirven como información de referencia para la investigación de enfermedades tales como Toxocarosis, Larva Migrans Cutánea y otras, especialmente en los niños y permitirán orientar la aplicación de medidas sanitarias correspondientes, ya que, uno de los factores que facilitan la transmisión de estas infecciones e infestaciones, son la presencia de heces de perros en la vía pública, la falta de desparasitación de los mismos y una adecuada información y toma de conciencia de lo que significa la tenencia responsable de mascotas...

Prevalencia de la infección por Chlamydia trachomatis en mujeres de la ciudad de Bahía Blanca. Provincia de Buenos Aires, Argentina / Prevalence of infection by chlamydia trachomatis in women at Bahia Blanca city. Buenos Aires province, Argentina

Chlamydia trachomatis es considerada actualmente como uno de los agentes más comunes de enfermedades transmitidas sexualmente. En mujeres es causa de uretritis y cervicitis, y puede llevar a complicaciones, tales como enfermedad inflamatoria pélvica, embarazo ectópico e infertilidad tubaria. La transmisión al neonato durante el parto puede ocasionar infecciones graves. En el hombre, es responsable de uretritis y epididimitis. Los reportes de la OMS señalan una prevalencia del 4,4 al 6,6%. El objetivo del presente estudio fue investigar la prevalencia de C. trachomatis en mujeres sexualmente activas, atendidas en el Laboratorio del Hospital Municipal de la ciudad de Bahía Blanca (Argentina) incluyendo las trabajadoras sexuales. Para ello, se utilizó la técnica de amplificación génica, mediante la Reacción de la Polimerasa en Cadena (PCR). Se estudiaron 225 pacientes (140 mujeres sintomáticas y 85 Trabajo Original trabajadoras sexuales que tramitaban su libreta sanitaria). Los estudios demostraron que, en los 225 hisopados endocervicales efectuados, se encontró una tasa de prevalencia total de infección por C. trachomatis del 4,4%, siendo significativamente mayor en mujeres trabajadoras sexuales (8,2%), respecto de las mujeres que no practicaban el comercio sexual (2,2 %) χ2 = 4,62 p = 0,031 OR = 4,10. Estos primeros datos de prevalencia de infección por C. trachomatis en Bahía Blanca, permiten alertar respecto de la necesidad de continuar con otras investigaciones e implementar directivas, para que se incluya la búsqueda de C. trachomatis en mujeres trabajadoras sexuales, cuando solicitan su libreta sanitaria.

At present, Chlamydia trachomatis is considered as one of the most common agents for sexually transmitted diseases. In women, it causes uretritis and cervicitis, and can lead to complications, such as pelvic inflammatory disease, ectopic pregnancy or tubal infertility. Transmission to the newborn during delivery can cause serious infections. In men, it is responsible for uretritis and epididymitis. WHO reports show a 4.4 to 6.6% prevalence. The aim of this study was to find out the prevalence of C. trachomatis in sexually active women assisted at the Laboratory of the Municipal Hospital at Bahía Blanca city (Argentina) including sexual workers. For such purpose, the genic amplification technique, by means of Polymerase Chain Reaction (PCR) was used. 225 patients were studied (140 symptomatic women and 85 sexual workers who were requesting their health booklet). The studies showed that, in the 225 endocervical swabs performed, a total prevalence infection rate by C. trachomatis of 4.4% was found, being significantly higher in women sexual workers (8.2%), with regard to those women who were not (2.2 %) χ2 = 4,62 p = 0,031 OR = 4,10. These first data on the prevalence of infection by C. trachomatis in Bahía Blanca, allow us to alert on the need to continue with further research and to implement guidelines to include C. trachomatis detection tests in sexual workers when they request their health booklet.

Parásitos en aguas del arroyo Napostá, aguas de recreación y de consumo en la ciudad de Bahia Blanca (Provincia de Buenos Aires, Argentina) / Parasites in water used for consumption and for recreational purposes as well as in the water from arroyo Naposta in city of Bahia Blanca, Province of Buenos Aires, Argentina

The aim of the present study was to detect the presence of sanitarily important parasit es in the water from Arroyo Napostá as well as in the water used for recreational purposes (public swimming-pools) and for consumption in the city of Bahía Blanca, province of Buenos Aires, Argentina. To this end, 24,000 liters of water from different sectors of Arroyo Napostá; 2,000 liters of water from each of the three public swimming-pools of Bahía Blanca; and 8,000 liters of water for consumption were collected using polypropylene spun cartridge filters with a 1 mm porosity (Cuno Micro Wind II). Further processing was conducted following Madore´s technique (1987) modified by Pezzani (2000). Detection of Cryptosporidium sp. Giardia sp. was carried out via direct immunofluorescence. Our study confirmed the presence of the following parasites in the areas of study: Hymenolepis diminuta eggs, Giardia sp cysts, Toxocara sp eggs, Entamoeba sp cysts, Endolimax sp cysts, Nematode larvae, Trichostrongylus sp eggs, Ascaris sp eggs, and Cryptosporidium sp cysts in the water from Arroyo Napostá; Hymenolepis diminuta eggs, Giardia sp cysts, Toxocara sp eggs, Entamoeba sp cysts, Endolimax sp cysts, Nematode larvae, Trichostrongylus sp eggs, Ascaris sp in the water from swimming-pools; and Cryptosporidium sp in the water for consumption. The results from the present study urge sanitary authorities from the city of Bahía Blanca to take measures in order to prevent not only humans but also animals from getting in contact with these waters which are contaminated and dangerous to health.

El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de parásitos de importancia sanitaria para el hombre, en el arroyo Napostá, en aguas recreacionales (piscinas públicas) y de consumo en Bahía Blanca (Provincia de Buenos Aires) Argentina. Se recolectaron 24.000 litros de agua de diferentes sectores del arroyo Napostá, 2.000 litros de cada una de las tres piscinas públicas y 8.000 litros de agua de consumo, mediante filtros de poro de una micra de diámetro (Cuno Micro Wind). El procesamiento posterior se efectuó siguiendo la técnica de Madore (1) modificada por Pezzani (2). La detección de Cryptosporidium sp. Giardia sp. se realizó mediante inmunofluo-rescencia directa. Las formas parasitarias observadas, fueron: huevos de Hymenolepis diminuta, quistes de Giardia sp, huevos de Toxocara sp, quistes de Entamoeba sp. Quistes de Endolimax sp, larvas de Nematodos, huevos de Trichostrongylus sp, huevos de Ascaris sp y quistes de Cryptosporidium sp. en las aguas del Arroyo Napostá; huevos de Hymenolepis diminuta, quistes de Giardia sp, huevos de Toxocara sp, quistes de Entamoeba sp. quistes de Endolimax sp, larvas de Nematodos, huevos de Trichostrongylus sp, huevos de Ascaris sp. en agua de piscina; y quistes de Cryptosporidium sp. en agua de consumo.En conclusión es necesario que las autoridades sanitarias adopten medidas tendientes a evitar que el hombre y los animales tomen contacto con estas aguas contaminadas y peligrosas para la salud.

Effect of oral administration of probiotic agents on Trichinella spiralis infected mice

Objetivou-se determinar se a ingestão oral de Lactobacillus casei exerce uma ação antagônica na infestação de camundongos com larvas de T. spiralis (cepa BBSC 01), protegendo o hospedeiro da invasão à mucosa intestinal das fêmeas grávidas do parasito. Foram utilizados dez camundongos BALB/c, distribuídos ao acaso em dois grupos: Grupo C ou grupo controle e Grupo T ou grupo tratados com L. casei. Ao alimento do grupo C, foram inclusos 5 mL de solução fisiológica durante sete dias antes da infestação com larvas de T. spiralis. O Grupo T recebeu alimentação normal, diariamente, acrescida de 5mL de suspensão em solução fisiológica de L. casei durante sete dias, com larvas infestantes de T. spiralis. Ao oitavo dia, ambos os grupos (C e T) foram inoculados via oral com larvas infestantes de T. spiralis. Aos cinco dias após infestação, os animais foram sacrificados para determinação da carga parasitaria presente no intestino e na mucosa intestinal (fêmeas). O número médio de parasitos adultos de T. spiralis recuperados do conteúdo intestinal no grupo controle foi de 147, enquanto que no grupo tratados foi de 189, apresentando diferenças significativas para p<0,05 entre ambos os grupos analisados. O valor promédio de fêmeas recuperadas no Grupo C foi de 81 enquanto no grupo T foi de 12 fêmeas, apresentando diferenças altamente significativas para p<0,05. Os resultados obtidos indicam que o L. casei administrado pela via oral produz um efeito antagônico sobre a penetração do parasito na mucosa intestinal.

Aportes morfológicos y morfométricos sobre Echinococcus granulosus para vacuna ovina EG95 / Morphological and morphometric contributions on Echinococcus granulosus for EG95 sheep vaccine

Se describe el estadío adulto de la cepa de Echinococus granulosus, utilizada en la validación de la Vacuna Ovina EG95 en el marco del Programa de Control de Hidatidosis (Provincia de Chubut, Argentina), con el propósito de medir la efectividad de la Vacuna Ovina EG95, elaborada por el Laboratorio de Parasitología Molecular de la Universidad de Melbourne de Australia. Se estudiaron treinta ejemplares adultos de E. granulosus (conservados en formol al 10%) cuyo tamaño osciló entre 1,6 y 5,1 mm de largo. Los resultados mostraron que, además de su escólex, el parásito adulto presenta entre 3 y 5 proglótidos. En los ejemplares observados la proglótida grávida siempre era la última, independientemente de la cantidad de proglótidas presentes. El promedio de huevos de cada proglótido grávida fue 525 por parásito (rango de 405-808).

The adult stage of the Echinococus granulosus strain used in Sheep Vaccine EG95 validation within the framework of the Hydatidosis Control Program (Chubut Province, Argentina) is described in this work in order to measure the effectiveness of this vaccine developed by the Molecular Parasitology Laboratory of Melbourne University, Australia. Thirty adult specimens of E. granulosus (in 10% formalin) were studied. The size of these specimens ranged from 1.6 to 5.1 mm long. The results showed that, in addition to its scolex, the adult parasite presents 3 and 5 proglottids. In the specimens observed, the gravid proglottid was always the last one, regardless of the number of proglottids present. The average number of eggs of each gravid proglottid was 525 per parasite (range 405- 808).

Aspectos exocoriales de huevos de Triatoma patagonica Del Ponte, 1929 por microscopía electrónica de barrido / Exochorial aspects of eggs of Triatoma patagonica Del Ponte, 1929 shown by scanning electron microscopy

Se estudiaron por microscopía electrónica de barrido (SEM) los patrones geométricos de las células de huevos de Triatoma patagonica Del Ponte, 1929, especie considerada vector activo de la enfermedad de Chagas. Se seleccionaron huevos de edad conocida: 5 días, 14 días y eclosionados, según sus características morfológicas y se registraron imágenes del exocorion en las zonas cefálica (opérculo), caudal y media. Los resultados obtenidos mostraron que los huevos de T. patagonica presentan en sus zonas cefálica y caudal, células con forma de hexágonos, pentágonos y cuadriláteros y en la media principalmente hexágonos. Se observó que los patrones geométricos de las distintas partes del huevo no cambian durante el desarrollo embrionario.