Characterization of a clone from an adult worm cDNA library selected with anti-Schistosoma mansoni human antibodies dissociated from immune complexes: a preliminary report

Considering the scarcity of defined antigens, actually useful and reliable for use in the field studies, we propose an alternative method for selection of cDNA clones with potential use in the diagnosis of schistosomiasis. Human antibodies specific to a protein fraction of 31/32 kDa (Sm31/32), dissociated from immune complexes, are used for screening of clones from an adult worm cDNA library. Partial sequencing of five clones, selected through this strategy, showed to be related to Schistosoma mansoni: two were identified as homologous to heat shock protein 70, one to glutathione S-transferase, one to homeodomain protein, and one to a previously described EST (expressed sequence tag) of S. mansoni. This last clone was the most consistently reactive during the screening process with the anti-Sm31/32 antibodies dissociated from the immune complexes. The complete sequence of this clone was obtained and the translation data yielded only one ORF (open reading frame) that code for a protein with 57 amino acids. Based on this amino acid sequence two peptides were chemically synthesized and evaluated separately against a pool of serum samples from schistosomiasis patients and non-schistosomiasis individuals. Both peptides showed strong reactivity only against the positive pool, suggesting that these peptides may be useful as antigens for the diagnosis of schistosomiasis mansoni.

Considerando a escassez de antígenos quimicamente definidos, realmente úteis e confiáveis para aplicação na soroepidemiologia da esquistossomose em larga escala, foi proposto, neste trabalho, um método alternativo para a seleção de clones de cDNA que expressam proteínas com putativo potencial diagnóstico na esquistossomose. Empregando anticorpos específicos contra uma fração proteica de 31/32 kDa (Sm31/32), purificados através da dissociação de imunocomplexos, foram selecionados cinco clones de cDNA a partir de genoteca de verme adulto de Schistosoma mansoni. O seqüenciamento parcial destes clones demonstrou que todos eram relacionados ao S. mansoni: dois apresentaram homologia com a proteína de choque térmico de 70 kDa e os demais com glutationa S-transferase, "homeodomain protein" e uma etiqueta de seqüência expressa (EST). Este último foi o clone que melhor reagiu, durante o processo de seleção, com os anticorpos anti-Sm31/32 dissociados de imunocomplexos. Baseado na seqüência de aminoácidos deste clone, dois peptídeos foram quimicamente sintetizados e analisados separadamente frente a misturas de soros de indivíduos normais e de pacientes com esquistossomose mansoni. Ambos os peptídeos demonstraram uma intensa reatividade somente contra a mistura de soros positivos, sugerindo que estes peptídeos podem ser úteis como antígenos para o diagnóstico da esquistossomose mansoni.

Characterization of a Trypanosoma cruzi genomic fragment complementary to several species-specific mRNAs but different from the spliced leader sequence

Foi isolado um clone recombinante (lambda 3b2-5) de ADN genômico de Trypanosoma cruzi, o qual contém seqüências que estäo reiteradas no genoma. Análise através da técnica de "Northern blot" mostrou que o clone 3b2-5 hibridiza com diferentes espécies de ARNs mensageiros de 1.200 a 5.000 bases. O número de espécies de ARNs mensageiros que hibridiza com o clone 3b2-5 excede sua capacidade codante, sugerindo que este clone apresenta seqüências que säo comuns a muitas espécies de ARNs mensageiros e conservadas no ARN poliadenilado. Estas seqüências näo säo homológas a seqüência líder presente nos ARNs de T. cruzi, pois, o clone 3b2-5 näo hibridiza com um nucleotídeo sintético complementar a seqüência líder. O clone 3b2-5 näo hibridiza com o ADN e ARN de diferentes gêneros de tripanosomatídeos e outras espécies de tripanosomas indicando que ele apresenta seqüências específicas para o T. cruzi