Avaliação da atividade esquistossomicida do carvacrol em experimentos in vitro e in vivo / Evaluation of Schistosomal Activity of Carvacrol in in vivo and in in vitro experiments

A atividade esquistossomicida do carvacrol e do acetato de carvacrol foi avaliada utilizando-se camundongos Swiss, com peso aproximado de 20g, infectados com cercarias de Schistosoma mansoni. Os experimentos in vitro e in vivo foram realizados conforme a metodologia descrita no tópico específico do presente artigo. Nos dois experimentos in vitro, as concentrações foram de 4 µg/mL ou 8µg/mL. Nas experiências in vivo, um grupo de dez animais foi tratado, por via oral, com 300mg/kg durante cinco dias consecutivos e, em outros dois grupos também de dez animais, foram administradas, por via oral, as doses únicas de 15 mg/kg ou 30 mg/kg. Os dois compostos mostraram-se ativos na concentração de 4µg/mL, causando a morte dos vermes adultos de S. mansoni em menos de 24 horas de contato, quando os testes foram realizados in vitro. Nos experimentos in vivo, considerados os três esquemas terapêuticos utilizados, não se observou diferença significativa na eficácia dos compostos. Diante dos resultados obtidos, conclui-se que os compostos estudados são viáveis para estudos in vitro, mas não apresentam atividade in vivo, indicando que testes in vitro não são suficientes para caracterizar um agente esquistossomicida. A falta de atividade in vivo sugere que estes compostos, na forma utilizada, não podem ser considerados como esquistossomicidas para uso clínico. É importante ter em mente que, apesar de útil, a abordagem in vitro é uma simulação da realidade, mas, definitivamente, uma abordagem não substituirá a outra

Performance of POC-CCA® in diagnosis of schistosomiasis mansoni in individuals with low parasite burden

Abstract: INTRODUCTION: Schistosomiasis, caused by Schistosoma mansoni, is a public health concern in Brazil. However, the most popular diagnostic method, the Kato-Katz technique, exhibits low sensitivity in low-endemicity areas. We aimed to compare the performance of an immunological assay, the point-of-care circulating cathodic antigen (POC-CCA®) test, with that of two parasitological techniques in a low-endemicity population. METHODS: Our study included 141 individuals living in Estreito de Miralta, Minas Gerais, Brazil. Fecal samples were obtained from all participants and analyzed for schistosomiasis using two parasitological techniques: the Kato-Katz technique and the saline gradient technique. Additionally, POC-CCA® strips were utilized for testing urine samples. The results obtained by the different techniques were compared. RESULTS: Analysis of two or 24 slides using the Kato-Katz technique resulted in a positivity rate of 10.6% (15/141) or 19.1% (27/141), respectively. The saline gradient technique yielded a positivity rate of 17.0% (24/141). The prevalence according to both parasitological techniques was 24.1% (34/141). The POC-CCA® test yielded a positivity rate of 22.7% (32/141); however, the positivity rate was merely 2.1% if trace results were considered negative. The agreements observed between POC-CCA® and the parasitological techniques were good (Kappa indexes > 0.64). The POC-CCA® test was more sensitive than the two-slide Kato-Katz technique (p < 0.05) in detecting cases of S. mansoni infection when trace results were considered positive. CONCLUSIONS: These findings reinforce the importance of using multiple diagnostic techniques in low-endemicity areas for effective control of disease.

Estudo da resistência do Schistosoma mansoni Sambon, 1907 ao praziquantel / Study of resistance of Schistosoma mansoni Sambon, 1907 to praziquantel

Atualmente, a droga utilizada no tratamento da esquistossomose é o praziquantel (PZQ). Alguns casos de isolados de S. mansoni resistentes ao PZQ no campo e em laboratório já foram relatados. Estes relatos refletem uma parcela ínfima do problema real, devido às dificuldades para a comprovação dessa resistência em condições de laboratório. Recentemente, nosso grupo conseguiu induzir resistência,em laboratório, a uma cepa de S. mansoni, utilizando sucessivos tratamentos com PZQ em B. glabrata infectadas com o S. mansoni (cepa LE-PZQ). Diante disso, este trabalho teve como objetivo geral avaliar a resistência/ suscetibilidade da cepa LEPZQ ao longo de seu desenvolvimento no hospedeiro vertebrado bem como avaliara ação do PZQ em cercárias sensíveis e resistentes ao PZQ a fim obter um teste rápido para detecção de resistência e, por fim, estudar o envolvimento das proteínas SMDR2, SmMRP1 e SmMVP na resistência do S. mansoni ao PZQ. Para isso,camundongos infectados com a cepa LE-PZQ ou com a cepa suscetível (LE) foram tratados com PZQ após 2, 6, 16, 23 e 45 dias de infecção...

Os resultados mostraram maior recuperação de vermes da cepa resistente tratadas com PZQ após 16 e 23 dias de infecção em comparação com a cepa LE. Outro objetivo do nosso estudo foi avaliar a perda da cauda de cercárias LE e LE-PZQ após 1 e 2 horas de contato com o PZQ em diferentes concentrações. Cercárias LE-PZQ apresentaram uma perda da cauda estatisticamente menor após exposição nas diferentes concentrações de PZQ por 1 ou 2 horas. Artigos sobre resistência à multidrogas(MDR) têm sido importantes para estudo de resistência em diversos organismos. Por isso, investigamos os níveis de RNA de SMDR2 e SMRP1 por qRT-PCR. SMDR2 mostrou níveis maiores em fêmeas quando comparados com machos e vermes empares na cepa LE. Na cepa LE-PZQ, vermes fêmeas apresentaram níveis maiores quando comparados apenas com vermes machos. Quando comparadas as duas cepas, a resistente apresentou níveis estatisticamente maiores em machos, fêmea se vermes em pares. SmMRP1 demonstrou expressão significativamente maior em machos e machos e fêmeas nas duas cepas quando comparados com fêmeas. Na comparação entre a cepa sensível e a resistente, a LE-PZQ apresentou maiores níveis de expressão em machos e vermes em pares. Investigamos também os níveis de RNA e proteínas de SmMVP. Foi possível observar que SmMVP está diferencialmente expressa entre machos, fêmeas e vermes em pares quando comparados entre si em cada cepa e quando compara-se cepa sensível e resistente...

Estudo da resistência do Schistosoma mansoni Sambon, 1907 ao praziquantel

Atualmente, a droga utilizada no tratamento da esquistossomose é o praziquantel (PZQ). Alguns casos de isolados de S. mansoni resistentes ao PZQ no campo e em laboratório já foram relatados. Estes relatos refletem uma parcela ínfima do problema real, devido às dificuldades para a comprovação dessa resistência em condições de laboratório. Recentemente, nosso grupo conseguiu induzir resistência,em laboratório, a uma cepa de S. mansoni, utilizando sucessivos tratamentos com PZQ em B. glabrata infectadas com o S. mansoni (cepa LE-PZQ). Diante disso, este trabalho teve como objetivo geral avaliar a resistência/ suscetibilidade da cepa LEPZQ ao longo de seu desenvolvimento no hospedeiro vertebrado bem como avaliara ação do PZQ em cercárias sensíveis e resistentes ao PZQ a fim obter um teste rápido para detecção de resistência e, por fim, estudar o envolvimento das proteínas SMDR2, SmMRP1 e SmMVP na resistência do S. mansoni ao PZQ. Para isso,camundongos infectados com a cepa LE-PZQ ou com a cepa suscetível (LE) foram tratados com PZQ após 2, 6, 16, 23 e 45 dias de infecção.

Os resultados mostraram maior recuperação de vermes da cepa resistente tratadas com PZQ após 16 e 23 dias de infecção em comparação com a cepa LE. Outro objetivo do nosso estudo foi avaliar a perda da cauda de cercárias LE e LE-PZQ após 1 e 2 horas de contato com o PZQ em diferentes concentrações. Cercárias LE-PZQ apresentaram uma perda da cauda estatisticamente menor após exposição nas diferentes concentrações de PZQ por 1 ou 2 horas. Artigos sobre resistência à multidrogas(MDR) têm sido importantes para estudo de resistência em diversos organismos. Por isso, investigamos os níveis de RNA de SMDR2 e SMRP1 por qRT-PCR. SMDR2 mostrou níveis maiores em fêmeas quando comparados com machos e vermes empares na cepa LE. Na cepa LE-PZQ, vermes fêmeas apresentaram níveis maiores quando comparados apenas com vermes machos. Quando comparadas as duas cepas, a resistente apresentou níveis estatisticamente maiores em machos, fêmea se vermes em pares. SmMRP1 demonstrou expressão significativamente maior em machos e machos e fêmeas nas duas cepas quando comparados com fêmeas. Na comparação entre a cepa sensível e a resistente, a LE-PZQ apresentou maiores níveis de expressão em machos e vermes em pares. Investigamos também os níveis de RNA e proteínas de SmMVP. Foi possível observar que SmMVP está diferencialmente expressa entre machos, fêmeas e vermes em pares quando comparados entre si em cada cepa e quando compara-se cepa sensível e resistente.

Antischistosomal activity of a calcium channel antagonist on schistosomula and adult Schistosoma mansoni worms

Current schistosomiasis control strategies are largely based on chemotherapeutic agents and a limited number of drugs are available today. Praziquantel (PZQ) is the only drug currently used in schistosomiasis control programs. Unfortunately, this drug shows poor efficacy in patients during the earliest infection phases. The effects of PZQ appear to operate on the voltage-operated Ca2+channels, which are located on the external Schistosoma mansoni membrane. Because some Ca2+channels have dihydropyridine drug class (a class that includes nifedipine) sensitivity, an in vitro analysis using a calcium channel antagonist (clinically used for cardiovascular hypertension) was performed to determine the antischistosomal effects of nifedipine on schistosomula and adult worm cultures. Nifedipine demonstrated antischistosomal activity against schistosomula and significantly reduced viability at all of the concentrations used alone or in combination with PZQ. In contrast, PZQ did not show significant efficacy when used alone. Adult worms were also affected by nifedipine after a 24 h incubation and exhibited impaired motility, several lesions on the tegument and intense contractility. These data support the idea of Ca2+channels subunits as drug targets and favour alternative therapeutic schemes when drug resistance has been reported. In this paper, strong arguments encouraging drug research are presented, with a focus on exploring schistosomal Ca2+channels.

Resistência ao praziquantel por pressão quimioterápica em Biomphalaria glabata infectada com Schistosoma mansoni / Resistência ao praziquantel por pressão quimioterápica em Biomphalaria glabrata infectada com Schistosoma mansoni

Diversos autores já relataram a existência de cepas de Schistosoma mansoni resistentes ao praziquantel (PZQ). No entanto, um dos grandes problemas envolvidos no estudo destas cepas está relacionado com as dificuldades operacionais do método clássico utilizado para seleção em condições laboratoriais. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar se sucessivos. tratamentos com PZQ em Biomphalaria glabrata infectadas com o parasito poderiam. selecionar um isolado resistente de maneira rápida, simples e econômica. Para avaliar o grau desta resistência, comparou-se a cepa padrão (LE) e o isolado selecionado após sucessivos tratamentos na fase intramolusco (LE-PZQ) utilizando camundongos infectados. Para avaliação da suscetibilidade do S. mansoni ao PZQ após tratamentos na fase intramolusco, caramujos da espécie B. glabrata foram infectados com S. mansoni (cepa LE) e tratados com PZQ. No período em que os caramujos voltaram a eliminar cercárias, camundongos foram. infectados e tratados com diferentes dosagens de PZQ. Os cálculos da ED50 da cepa LE e do isolado LE-PZQ foram realizados. Para o cultivo de vermes adultos, camundongos infectados com cercárias LE ou LE-PZQ, após 45 dias de infecção, foram tratados com PZQ e após 2 horas, perfundidos. Os vermes recuperados foram cultivados por 7 dias. Para comparar a atividade excretora, vermes LE ou LE-PZQ foram colocados em contato com a sonda resorufim e, posteriormente, exposto ao PZQ.

Para avaliação do dano causado ao tegumento, os vermes LE e LE-PZQ foram expostos diretamente ao fármaco ou recuperados após duas horas do tratamento de animais infectados com LE ou LE-PZQ e, posteriormente, incubados com a sonda Hoechst 33258. Os valores das ED50 obtidos foram de 68mg/Kg e 362mg/kg para a cepa LE e isolado LE-PZQ (p<0,05), respectivamente. Quanto ao cultivo dos vermes adultos após tratamento com dos camundongos com PZQ, verificou-se que os parasitos do isolado LE-PZQ apresentaram-se menos contraídos do que a cepa LE. Em relação aos ovos, observou-se ovos de todos os estádios e mortos no isolado LE-PZQ (>300) enquanto na cepa LE, os ovos estavam em quantidade bem inferiores e, praticamente todos, mortos (±30 ovos).. Nos experimentos com a resorufim, os vermes adultos da cepa LE não apresentaram. marcação pela sonda após a exposição ao PZQ in vitro, enquanto os do isolado LE-PZQ permaneceram com o sistema excretor ativo e, portanto marcado. Nos experimentos com a Hoechst 33258, parasitos do isolado LE-PZQ apresentaram lesões menos intensas em seus tegumentos do que os da cepa LE tanto após exposição ao PZQ in vivo quanto in vitro. Desta forma, foi demonstrado que a pressão quimioterápica com PZQ utilizando B. glabrata infectadas com S. mansoni é um método eficiente para seleção de isolados resistentes a este fármaco.

Resistência ao praziquantel por pressão quimioterápica em Biomphalaria glabata infectada com Schistosoma mansoni

Diversos autores já relataram a existência de cepas de Schistosoma mansoni resistentes ao praziquantel (PZQ). No entanto, um dos grandes problemas envolvidos no estudo destas cepas está relacionado com as dificuldades operacionais do método clássico utilizado para seleção em condições laboratoriais. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar se sucessivos. tratamentos com PZQ em Biomphalaria glabrata infectadas com o parasito poderiam. selecionar um isolado resistente de maneira rápida, simples e econômica. Para avaliar o grau desta resistência, comparou-se a cepa padrão (LE) e o isolado selecionado após sucessivos tratamentos na fase intramolusco (LE-PZQ) utilizando camundongos infectados. Para avaliação da suscetibilidade do S. mansoni ao PZQ após tratamentos na fase intramolusco, caramujos da espécie B. glabrata foram infectados com S. mansoni (cepa LE) e tratados com PZQ. No período em que os caramujos voltaram a eliminar cercárias, camundongos foram. infectados e tratados com diferentes dosagens de PZQ. Os cálculos da ED50 da cepa LE e do isolado LE-PZQ foram realizados. Para o cultivo de vermes adultos, camundongos infectados com cercárias LE ou LE-PZQ, após 45 dias de infecção, foram tratados com PZQ e após 2 horas, perfundidos. Os vermes recuperados foram cultivados por 7 dias. Para comparar a atividade excretora, vermes LE ou LE-PZQ foram colocados em contato com a sonda resorufim e, posteriormente, exposto ao PZQ.

Para avaliação do dano causado ao tegumento, os vermes LE e LE-PZQ foram expostos diretamente ao fármaco ou recuperados após duas horas do tratamento de animais infectados com LE ou LE-PZQ e, posteriormente, incubados com a sonda Hoechst 33258. Os valores das ED50 obtidos foram de 68mg/Kg e 362mg/kg para a cepa LE e isolado LE-PZQ (p300) enquanto na cepa LE, os ovos estavam em quantidade bem inferiores e, praticamente todos, mortos (±30 ovos).. Nos experimentos com a resorufim, os vermes adultos da cepa LE não apresentaram. marcação pela sonda após a exposição ao PZQ in vitro, enquanto os do isolado LE-PZQ permaneceram com o sistema excretor ativo e, portanto marcado. Nos experimentos com a Hoechst 33258, parasitos do isolado LE-PZQ apresentaram lesões menos intensas em seus tegumentos do que os da cepa LE tanto após exposição ao PZQ in vivo quanto in vitro. Desta forma, foi demonstrado que a pressão quimioterápica com PZQ utilizando B. glabrata infectadas com S. mansoni é um método eficiente para seleção de isolados resistentes a este fármaco.