Nitric oxide regulates adhesiveness, invasiveness, and migration of anoikis-resistant endothelial cells

Anoikis is a type of apoptosis that occurs in response to the loss of adhesion to the extracellular matrix (ECM). Anoikis resistance is a critical mechanism in cancer and contributes to tumor metastasis. Nitric oxide (NO) is frequently upregulated in the tumor area and is considered an important player in cancer metastasis. The aim of this study was to evaluate the effect of NO on adhesiveness, invasiveness, and migration of anoikis-resistant endothelial cells. Here, we report that anoikis-resistant endothelial cells overexpress endothelial nitric oxide synthase. The inhibition of NO release in anoikis-resistant endothelial cells was able to decrease adhesiveness to fibronectin, laminin, and collagen IV. This was accompanied by an increase in cell invasiveness and migration. Furthermore, anoikis-resistant cell lines displayed a decrease in fibronectin and collagen IV protein expression after L-NAME treatment. These alterations in adhesiveness and invasiveness were the consequence of MMP-2 up-regulation observed after NO release inhibition. The decrease in NO levels was able to down-regulate the activating transcription factor 3 (ATF3) protein expression. ATF3 represses MMP-2 gene expression by antagonizing p53-dependent trans-activation of the MMP-2 promoter. We speculate that the increased release of NO by anoikis-resistant endothelial cells acted as a response to restrict the MMP-2 action, interfering in MMP-2 gene expression via ATF3 regulation. The up-regulation of nitric oxide by anoikis-resistant endothelial cells is an important response to restrict tumorigenic behavior. Without this mechanism, invasiveness and migration potential would be even higher, as shown after L-NAME treatment.

Identification of a historic horse ecotype analyzing speech content in central Brazil / Resgate de um ecótipo equino histórico mediante análise de conteúdo de discurso no Brasil central

This study represents a first attempt to rescue germplasm of a traditional domestic equine cited in early Iberian and South American literature as Curraleiro horse. As an effort to identify and possibly characterize this type of horse we accessed traditional knowledge in strategic rural areas. Most areas were configured by hinterland settlements founded by runaway slave communities from the sixteenth century. Twenty interviews were conducted and analyzed using classical Speech Content Analysis. As a result, five response categories were recognized: 1) Identification and location of Curraleiro horses; 2) Characterization of Curraleiro horses; 3) Historical aspects; 4) Curraleiro horse conservation prospects and 5) Sanitary and productive aspects of Curraleiro horse breeding. We concluded that although scarce, the Curraleiro horse, cited in literature, still exists and showed phenotypical features which allow fine discrimination from any officially recognized breed in Brazil. Our findings may open the door for the recognition of a genuine animal resource which could play a role in rural development for specific regions and traditional communities. Speech Content Analysis was effective for in loco identification and characterization of rare traditional livestock. Thus, we encourage the usage of this tool as an alternative to subsidize identification and genetic conservation programs worldwide.(AU)

Esse estudo representa uma primeira tentativa de resgate de germoplasma em um equino doméstico tradicional citado em literatura precoce Iberiana e Sul Americana como um cavalo Curraleiro. Num esforço de identificar e possivelmente caracterizar esse tipo de cavalo, acessamos conhecimento tradicional em diversas áreas rurais estratégicas. A maioria consistia em assentamentos rurais fundados por comunidades escravas foragidas no século dezesseis. Vinte entrevistas foram conduzidas e analisadas utilizando análise de conteúdo de discurso clássico. Como resultado, cinco categorias de resposta foram reconhecidas: 1) Identificação e localização de cavalos Curraleiros; 2) Caracterização de cavalos curraleiros; 3) Aspectos históricos, 4) Perspectivas de conservação, e 5) Aspectos sanitários e produtivos da criação de cavalos Curraleiros. Concluímos que, apesar de escasso, o cavalo Curraleiro, citado na literatura, ainda existe e apresenta características fenotípicas que permitem discriminação de raças oficialmente reconhecidas no Brasil. Nossos achados podem abrir alas para o reconhecimento de um recurso animal genuíno que pode ter um papel no desenvolvimento rural em regiões específicas e comunidades tradicionais. Análise de conteúdo de discurso foi eficaz para identificação e caracterização in loco de criação tradicional rara. Desta forma, encorajamos o uso dessa ferramenta como alternativa para subsídio de identificação e programas de conservação genética ao redor do mundo.(AU)

SNPs rs471462296, rs456245081 and rs438495570 in the 5'UTR region of DGAT1 gene in Nelore / SNPs rs471462296, rs456245081 e rs438495570 na região 5'UTR do gene DGAT1 em Nelore

O objetivo desta pesquisa foi avaliar os SNPs rs471462296, rs456245081 e rs438495570 do gene DGAT1 em bovinos Nelore. Foram analisados 109 bovinos. A extração do DNA genômico foi realizada do sangue dos animais, usando-se o kit Ilustra Blood Genomic Prep Mini Spin® (GE Healthcare, UK). A concentração e o grau de pureza do DNA foram determinados por meio de espectrofotômetro (Nanodrop - Thermo Fisher Scientifc, USA). A genotipagem dos SNPs ocorreu mediante o emprego do ensaio Taqman® (Applied Biosystems, USA). Na análise genômica, não foram encontradas alterações nas frequências alélicas e genotípicas (P≥0,05) para os SNPs testados. Dessa forma, a região 5'UTR analisada apresentou-se monomórfica e a variação de SNPs não foi observada, o que limita seu uso como marcadores moleculares para o gene DGAT1 em Nelore.(AU)

Sensibilidade da PCR na amplificação do DNA bovino em diluição seriada e mistura de amostra macho e fêmea / Sensitivity of PCR to amplify sex-specific bovine DNA in diluted samples

A mixture of bovine DNA from a male and a female Jersey (Bos taurus taurus) bred in different proportions was used to determine the sensitivity of PCR to amplify and discriminate the bovine DNA samples. Samples were obtained from the peripheral blood of a bull and a heifer and DNA was isolated using a commercial kit for extraction and purification of nucleic acids. Two primers sets were designed to flank genomic regions: one autosomal and one Y-specific. DNA samples were diluted in water to a final concentration of 4x10-14 ng. The results showed positive amplification of the samples diluted to a concentration of 4x10-10ng and 4x10-4ng for the autosomal and Y-specific regions, respectively. PCR was able to discriminate the male DNA in a mixture of 99:1 (DNA ♀: DNA ♂) heifer to bull ratio. Therefore, the PCR was successful in amplifying the bovine genome in samples containing low concentrations of DNA. Thus, PCR can be used as a sensitive and efficient tool to determine the sex of the fetus in pregnant cows, helping to promote correct and efficient animal management, sex selection, and breeding in commercial herds.

Influência da Escherichia coli enteropatogênica clássica sobre a proliferaçäo bacteriana no intestino delgado na diarréia aguda e persistente do lactente / The influence of the classic enteropathogenic Escherichia coli on the small bowel bacterial proliferation in the infant's acute and persistent diarrhea

Proliferaçao bacteriana da microflora colônica pode ocorrer em até 50 por cento dos lactentes portadores de diarréia aguda e persistente. Cepas Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) estao freqüentemente associadas a proliferaçao bacteriana no lúmen do intestino delgado. A persistência da diarréia pode dever-se a proliferaçao de EPEC no lúmen intestinal. OBJETIVOS. O presente trabalho foi realizado para comparar a magnitude da proliferaçao bacteriana lúmen do intestino delgado em lactentes com diarréia aguda e persistente devido a sorogrupos de EPEC. PACIENTES E MÉTODOS. Quarenta lactentes internados para tratamento de diarréia (23 com diarréia, aguda e 17 com diarréia persistente) foram submetidos a intubaçao nasoduodenal para coleta de fluido intestinal e estudo da microflora aeróbia e anaeróbia do intestino delgado. Fezes foram coletadas para pesquisa de agentes enteropatogênicos. RESULTADOS. Proliferaçao bacteriana no intestino delgado (PBID) ocorreu em 32 (8O por cento) dos 40 pacientes. Trinta (75 por cento) eram portadores de PBID de aeróbios e 17 (43 por cento) eram portadores de PBID de anaeróbios. Nao houve diferença na incidência de PBID entre lactentes com diarréia aguda ou persistente. Dos 40 pacientes, 16 eram portadores de E. coli enteropatogênica clássica (EPEC) nas fezes. Destes, todos eram portadores de PBID acima de 10(3) organismos/mL. Dos 24 pacientes sem EPEC nas fezes, 16 (67 por cento) reveleram-se portadores de PBID (p<0,01). A concentraçao média de coliformes no intestino delgado foi de 8x10(5) organismos/mL entre os portadores de EPEC nas fezes e 3 x 10(2) organismos/mL entre os pacientes sem EPEC nas fezes (p<0,05). Para avaliar se a infecçao por EPEC favorece a proliferaçao de outras bactérias coliformes no intestino delgado utilizou-se recurso analítico que esteve próximo de revelar diferença significante entre os grupos com e sem EPEC nas fezes. CONCLUSAO. Infecçao por sorogrupos de EPEC favorece a proliferaçao bacteriana no intestino delgado.