Acute gastroenteritis and enteric viruses in hospitalised children in southern Brazil: aetiology, seasonality and clinical outcomes

Viral acute gastroenteritis (AG) is a significant cause of hospitalisation in children younger than five years. Group A rotavirus (RVA) is responsible for 30% of these cases. Following the introduction of RVA immunisation in Brazil in 2006, a decreased circulation of this virus has been observed. However, AG remains an important cause of hospitalisation of paediatric patients and only limited data are available regarding the role of other enteric viruses in these cases. We conducted a prospective study of paediatric patients hospitalised for AG. Stool samples were collected to investigate human adenovirus (HAdV), RVA, norovirus (NoV) and astrovirus (AstV). NoV typing was performed by nucleotide sequencing and phylogenetic analysis. From the 225 samples tested, 60 (26%) were positive for at least one viral agent. HAdV, NoV, RVA and AstV were detected in 16%, 8%, 6% and 0% of the samples, respectively. Mixed infections were found in nine patients: HAdV/RVA (5), HAdV/NoV (3) and HAdV/NoV/RVA (1). The frequency of fever and lymphocytosis was significantly higher in virus-infected patients. Phylogenetic analysis of NoV indicated that all of these viruses belonged to genotype GII.4. The significant frequency of these pathogens in patients with AG highlights the need to routinely implement laboratory investigations.

Parasites of the Mutton Snapper Lutjanus analis (Perciformes: Lutjanidae) in Alagoas, Brazil / Parasitas de Cioba Lutjanus analis (Perciformes: Lutjanidae) em Alagoas, Brasil

A parasitological survey was carried out on a sample of sixty mutton snappers (Lutjanus analis) that were caught on the coast of Alagoas, northeastern Brazil. The parasite diversity and infection levels were low. The ectoparasite Rocinela signata Schioedte & Meinert, 1879 (Isopoda: Aegidae), and larvae of two endoparasites, Trypanorhyncha gen. sp. and Hysterothylacium sp. (Nematoda: Anisakidae), were detected. The significance of these parasites is discussed in the context of their transmission pathways and potential impact.

Um estudo parasitológico foi realizado em 60 exemplares de cioba, Lutjanus analis, capturados ao largo de Alagoas, no Nordeste do Brasil. A diversidade e níveis de infecção parasitária foram baixos. Foram detectados o ectoparasito Rocinela signata Schioedte & Meinert, 1879 (Isopoda: Aegidae) e dois endoparasitos, larvas de Trypanorhyncha gen. sp. e larvas de Hysterothylacium sp. (Nematoda: Anisakidae). O significado desses parasitos é discutido no âmbito das suas vias de transmissão e potencial impacto.

Caracterização molecular dos genótipos do rotavírus em pacientes pediátricos imunossuprimidos e não imunossuprimidos / Molecular characterization of rotavirus genotypes in immunosuppressed and non-immunosuppressed pediatric patients

OBJETIVO: Descrever a variabilidade genotípica do rotavírus grupo A (RVA) encontrado em pacientes pediátricos imunocompetentes e imunocomprometidos tratados no Hospital de Clínicas/Universidade Federal do Paraná (HC/UFPR), Curitiba, Paraná. MÉTODOS: Foi realizado um estudo transversal com 1.140 amostras de fezes coletadas, de abril de 2001 a dezembro de 2008, em pacientes ambulatoriais e pacientes hospitalizados com gastroenterite aguda encaminhados ao hospital. As técnicas usadas foram o método da aglutinação do látex e imunoensaio enzimático para diagnóstico de RVA. Foi realizada transcrição reversa, seguida por PCR multiplex semi-nested e sequência de nucleotídeos para caracterização do genótipo. Foram relatados dados de combinações de genótipos, clínicos, epidemiológicos, laboratoriais e sobre a presença de infecções hospitalares. RESULTADOS: Foi analisado um total de 80 amostras de fezes positivas para rotavírus. As associações mais frequentes entre os genótipos G e P foram: G4 P[8] (38,9%), G1 P[8] (30,5%), G9 P[8] (13,9%), G2 P[4] (6.9 %) e G3 P[8] 1,4%). O genótipo prevalente foi G2 P[4] depois da implementação da vacina nos anos de 2006 e 2008. Verificou-se que um total de 62,5% das crianças com idade abaixo de 12 meses estavam infectadas. Destas, 55,6% tinham grave desidratação, e 26,7% precisaram de cuidados intensivos. Encontrou-se uma frequência de 12,5% de infecções hospitalares. Não se observou correlação entre o genótipo e a gravidade da infecção nos pacientes estudados. CONCLUSÃO: As infecções por RVA podem associar-se a manifestações clínicas graves e é crucial a vigilância da variabilidade genotípica desse vírus para monitorizar a emergência de novas cepas e o impacto da imunização nesses pacientes.

OBJECTIVE: To describe the genotypic variability of group A rotavirus (RVA) found in immunosuppressed and non-immunosuppressed pediatric patients treated at the Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná (HC-UFPR), Curitiba, Paraná. METHODS: A cross-sectional study was conducted with 1,140 stool samples collected from April, 2001 to December, 2008 in outpatients and hospitalized patients with acute gastroenteritis referred to the hospital. RVA diagnosis was performed through the latex agglutination method and enzyme immunoassay. Reverse transcription followed by multiplex hemi-nested polymerase chain reaction (PCR) and nucleotide sequencing were used for genotype characterization. Genotype combinations, clinical data, epidemiological data, laboratory data, and presence of hospital-acquired infections were reported. RESULTS: A total of 80 rotavirus-positive stool samples were analyzed. The most frequent associations between genotypes G and P were: G4 P[8] (38.9%), G1 P[8] (30.5%), G9 P[8] (13.9%), G2 P[4] (6.9%), and G3 P[8] (1.4%). G2 P[4] was the most prevalent genotype after the vaccine implementation in the years 2006 and 2008. A total of 62.5% of children aged less than 12 months were found to be infected. Of these, 55.6% had severe dehydration and 26.7% needed intensive care. A frequency of 12.5% of nosocomial infections was found. No correlation was observed between genotype and severity of infection in the study patients. CONCLUSION: RVA infections can be associated with severe clinical manifestations, and the surveillance of genotypic variability of this virus is crucial to monitor the emergence of new strains and the impact of the immunization in these patients.

Meningite bacteriana aguda na infância: fatores de risco para complicações agudas e sequelas / Childhood acute bacterial meningitis: risk factors for acute neurological complications and neurological sequelae

OBJETIVO: Estudo retrospectivo que visa avaliar as complicações neurológicas agudas e sequelas neurológicas das meningites bacterianas agudas na infância, a fim de determinar possíveis sinais de alerta. MÉTODOS: Foram avaliadas crianças (entre 1 mês e 14 anos) internadas entre 2003 e 2006, com meningite bacteriana aguda. RESULTADOS: Dos 44 pacientes incluídos, 17 (38,6%) apresentaram complicações neurológicas agudas, sendo crise convulsiva a mais frequente (31,8%). Os pacientes com complicações neurológicas agudas apresentaram com mais frequência: menor contagem de neutrófilos (p = 0,03), crise convulsiva na admissão (p < 0,01) e S. pneumoniae como agente etiológico (p = 0,01). Os fatores de risco para o desenvolvimento de complicações neurológicas agudas foram: S. pneumoniae [razão de chances (odds ratio, OR) = 6,4; intervalo de confiança (IC) 1,7-24,7] e contagem de neutrófilos < 60% (p < 0,01). De 35 pacientes seguidos ambulatorialmente, 14 apresentaram sequelas neurológicas (40%), sendo alteração comportamental a mais frequente. A ocorrência de crise convulsiva na internação (OR = 5,6; IC 1.2-25,9), proteinorraquia > 200 mg/dL (p < 0,01) e menor relação glicorraquia/glicemia (p < 0,01) foram identificadas como variáveis de risco para sequelas. CONCLUSÃO: Contagem de neutrófilos < 60%, crise convulsiva na admissão e S. pneumoniae como agente etiológico foram identificados como sinais de alerta para a ocorrência de complicação neurológica aguda, enquanto que proteinorraquia, menor relação glicorraquia/glicemia e crise convulsiva na internação foram observados como fatores de risco para a ocorrência de sequelas neurológicas.

OBJECTIVE: To assess acute neurological complications and neurological sequelae of childhood acute bacterial meningitis in order to determine possible warning signs. METHODS: This retrospective study evaluated children with acute bacterial meningitis (between 1 month and 14 years of age) admitted between 2003 and 2006. RESULTS: Of the 44 patients studied, 17 (38.6%) had acute neurological complications. Seizure was the most frequent (31.8%) complication. Patients with acute neurological complications showed a higher frequency of lower neutrophil count (p = 0.03), seizure at admission (p < 0.01), and S. pneumoniae as the etiologic agent (p = 0.01). Risk factors for the development of acute neurological complications were S. pneumoniae (odds ratio [OR] = 6.4, confidence interval [CI] 1.7-24.7) and neutrophil count < 60% (p < 0.01). Of the 35 patients who were followed up, 14 had neurological sequelae (40%). Behavioral change (22.9%) was the most frequent sequela. Seizures at admission (OR = 5.6, CI 1.2-25.9), cerebrospinal fluid protein concentration > 200 mg/dL (p < 0.01), and cerebrospinal fluid glucose concentration/glycemia ratio (p < 0.01) were identified as risk variables for sequelae. CONCLUSION: Neutrophil count < 60%, seizure at admission, and S. pneumoniae as the etiologic agent were identified as warning signs for acute neurological complications, while protein levels, cerebrospinal fluid glucose concentration/glycemia ratio, and seizure at admission were seen as risk factors for neurological sequelae.

Soroprevalência de hepatite A em crianças e adolescentes / Seroprevalence of hepatitis A in children and adolescents

OBJETIVOS: Avaliar a soroprevalência de hepatite A (VHA) em crianças e adolescentes com idade entre 1 e 14 anos, e identificar fatores associados à infecção prévia. MÉTODO: Estudo epidemiológico transversal, realizado entre fevereiro e agosto de 2006, em Curitiba, Paraná, Brasil, e em sua região metropolitana. A análise laboratorial constituiu-se de pesquisa qualitativa de anticorpos totais para o VHA em amostra de sangue total. RESULTADOS: No estudo, 901 crianças e adolescentes foram incluídos. A distribuição por faixa etária foi: 237 (26,3 por cento) entre 1 e 4 anos; 313 (34,7 por cento) entre 5 e 9 anos; e 351 (39 por cento) entre 10 e 14 anos. A taxa de soroprevalência geral encontrada foi de 19,8 por cento, e por grupo etário foi de 3, 21,1 e 29,9 por cento (p < 0,01), respectivamente. Na análise multivariada, demonstrou-se que os fatores que, em conjunto, mantiveram associação positiva com as prevalências de anticorpos contra o VHA na população estudada foram: faixa etária de 5 a 9 e 10 a 14 anos, morar em casas com um ou mais habitantes por cômodo, frequentar refeitório comunitário e ter baixa renda per capita. CONCLUSÕES: Os resultados demonstraram uma baixa prevalência de anticorpos contra o VHA, o que justifica o uso de medidas profiláticas, que incluem a vacinação precoce.

OBJECTIVES: To determine the seroprevalence of hepatitis A (HAV) in children and adolescents aged 1 to 14 years, and to identify factors associated with a history of infection. METHOD: This was a cross-sectional epidemiological study, conducted form February to August 2006 in the city of Curitiba, Paraná, Brazil, and the surrounding municipalities (Greater Curitiba). Laboratory analysis comprised qualitative assay for total HAV antibodies in whole blood samples. RESULTS: A total of 901 children and adolescents were recruited for the study. Age distribution was as follows: 1 to 4 years, n = 237 (26.3 percent); 5 to 9 years, n = 313 (34.7 percent); and 10 to 14 years, n = 351 (39 percent). The global rate of seroprevalence was 19.8 percent, and seroprevalence rates by age group were 3 percent, 21.1 percent and 29.9 percent respectively (p < 0.01). Multivariate analysis demonstrated that the following factors, in combination, had a positive association with the prevalence rate of antibodies against HAV in the study population: age groups 5 to 9 and 10 to 14 years, living in a household with more than one inhabitant per room, shared eating area and low per capita income. CONCLUSIONS: The results show a low prevalence of antibodies against HAV, which justifies the use of prophylactic measures, including early vaccination.

Rotavirus infection in a tertiary hospital: laboratory diagnosis and impact of immunization on pediatric hospitalization

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Rotavirus (RV) is the main etiological agent of diarrhea in childhood; its laboratory diagnosis is crucial to guide the clinical management and prevention of its spread. RV immunization was introduced in Brazilian 6-month-old children in 2006. The present study was aimed to evaluate three methodologies used for human RV detection in stool samples obtained from patients hospitalized due to gastroenteritis in a teaching hospital and report the impact of RV immunization in hospitalization by diarrhea. METHODS: 293 stool samples collected in the 2001-2008 period were analyzed by enzyme immunoassay (EIA), latex agglutination (LA) and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). RESULTS: Rotavirus was detected in 34.8 percent of samples by LA assay, 28.3 percent of samples by EIA assay and in 25.6 percent of samples by PAGE assay. Considering the PAGE method as gold standard, the sensitivity, specificity and accuracy of EIA were 94.6 percent, 94.4 percent and 94.5 percent, and to LA were 82.6 percent, 81.6 percent and 81.9 percent, respectively. CONCLUSION: These results indicate that antigen detection by EIA is a rapid, sensitive and specific method, and could be used in large-scale applications for screening stool samples suspected of RV infection. This study showed decreased incidence of RV infection in hospitalized children prior to the implementation of the national immunization program against RV.

Adenovirus respiratory infection: significant increase in diagnosis using PCR comparing with antigen detection and culture methods / Infecção respiratória aguda por adenovirus: comparação dos métodos de PCR e imunofluorescência indireta para o seu diagnóstico e dados clínicos dos pacientes infectados

Adenovirus (AdV) respiratory infections are usually described as being associated with high mortality rates. Laboratory diagnosis is essential for the establishment of the appropriate therapy, and for guiding the implementation of preventive measures in order to prevent the spread of the infection. Aiming to analyze the sensitivity and specificity of the laboratorial diagnosis methods available, we compared antigen detection by indirect immunofluorescence assay (IF), and a specific nested polymerase chain reaction (PCR), to detect AdV in respiratory samples collected from patients admitted to hospital with acute respiratory disease. Positive samples were inoculated into a cell culture to confirm the results. We analyzed 381 samples from the nasopharyngeal aspirates collected during the year 2008; of these, 2.6 percent tested were positive for adenovirus through IF and 10 percent through PCR; positive isolation was obtained in 40 percent and 26 percent of these cases, respectively. Most infected patients were children under six months of age, and despite of the fact that a significant number of patients required intensive care, the mortality rate was low (5 percent). In conclusion, molecular methods were found to be useful for rapid diagnosis of adenovirus infections with higher sensitivity than antigen detection; their introduction permitted a significant increase in diagnoses of adenovirus infections.

Infecções respiratórias por Adenovírus (ADV) são geralmente descritas associadas com alta mortalidade. O diagnóstico laboratorial é essencial para o estabelecimento da terapêutica adequada e para orientar a implantação de medidas preventivas evitando a propagação da infecção. Com o objetivo de analisar a sensibilidade e a especificidade dos métodos de avaliação de diagnóstico laboratorial, foi comparada a detecção de antígeno por imunofluorescência indireta (IF) com a reação em cadeia da polimerase específica (PCR) para detectar AdV em amostras respiratórias coletadas de pacientes internados com doença respiratória aguda. As amostras com resultados positivos foram inoculadas em cultura celular. Foram analisadas 381 amostras da secreção nasofaríngea coletadas durante o ano de 2008, das quais 2,6 por cento foram positivas pela IF e 10 por cento pela PCR, isolamento positivo foi obtido em 40 por cento e 26 por cento dos casos positivos pelos testes anteriores, respectivamente. A maioria dos pacientes infectados eram crianças com menos de seis meses de idade, e apesar do fato de que um número significativo de pacientes necessitou de cuidados intensivos, a taxa de mortalidade foi baixa (5 por cento). Em conclusão, os métodos moleculares são úteis para o diagnóstico rápido de infecções por adenovírus com maior sensibilidade do que a detecção do antígeno, a sua introdução na rotina permitiu um aumento significativo no diagnóstico de infecções por adenovírus.

Laboratorial atopy markers in children with human immunodeficiency virus

Changes in immune system functions are one of the most important consequences of human immunodeficiency virus (HIV) infection. Studies have reported a higher prevalence of disease mediated by immunological hypersensitivity mechanisms in HIV-positive patients. This study aims to observe how immunological changes in HIV-infected children interfere in atopy determinants. Fifty-seven HIV-positive children were studied between June 2004-August 2005 to evaluate the possible modifications in atopy diagnosis from prick test environmental allergen reactivity. Patients were subjected to two evaluations: on both occasions, atopic and non-atopic groups were correlated with immunological (CD4+ and CD8+ lymphocyte concentrations and serum levels of IgA, IgM, IgG and IgE) and viral parameters (HIV viral load). The percent atopy was 20.05 in the first and 29.82 in the second evaluation and atopy was diagnosed in patients without immunosuppression or with moderate immunosuppression. Six patients changed from a negative to a positive atopy profile. One patient with a decreased CD4+ T lymphocyte concentration failed to demonstrate prick test positivity between evaluations. Multivariate analysis showed that the variables associated with atopy diagnosis included a personal history of allergic diseases as well as elevated IgE for age and elevated IgE levels. Atopy development in HIV-infected children seems to be modulated by genetic and environmental factors as well as immunological condition.

Estudio de 312 niños con meningitis atendidos en un Hospital Universitario en el Sur de Brasil / Study of 312 children with meningitis treated at a University Hospital in the South of Brazil

El objetivo de este trabajo fue evaluar los aspectos clínicos, análisis de laboratorio, el perfil etiológico y las características evolutivas de los distintos tipos de meningitis aguda atendidos en un Servicio de Pediatría de un Hospital Público Universitario. Fueron evaluados a partir de un estudio descriptivo y retrospectivo de niños atendidos en el Servicio de Pediatría del Hospital de Clínicas de la Universidad Federal del Paraná, durante el periodo entre enero 2003 a enero 2007, con el diagnóstico probable de meningitis basado en manifestaciones clínicas y en alteraciones citológicas y bioquímicas del LCR. Se diagnosticó meningitis viral (MV) en 140 niños (45%), meningitis bacteriana (MB) en 58 (19%) y en 114 la etiología fue indeterminada (36%). Entre las MB el agente etiológico más frecuente fue Neisseria meningitidis (25 casos). Lo datos clínicos predominantes fueron fiebre, vómitos y cefalea. En el LCR de la MB hubo predominio de polimorfonucleares, proteína elevada y glucosa baja. En la MV predominaron los mononucleares. Las complicaciones neurológicas fueron más frecuentes en la MB, siendo la convulsión el hallazgo más común (6/58 pacientes). El óbito ocurrió en un caso en la MV y tres en la MB. Se llegó a la conclusión de que la clásica tríada fue la manifestación clínica más común, las anormalidades citológicas y bioquímicas fueron típicas auxiliando en la diferenciación entre las MB y MV, aunque un gran número de casos haya quedado sin definición etiológica; las complicaciones neurológicas inmediatas y los óbitos han sido pocos frecuentes en esta muestra.

The aim of this study is to evaluate the clinical and laboratorial aspects, as well as the etiological profile and the evolution characteristics, of the diverse types of severe meningitis treated at a Pediatric Clinic of a public university hospital. From a descriptive and retrospective study, 312 children at the Pediatric Clinic of the Hospital de Clínicas of the Federal University of Paraná were evaluated between January 2003 and January 2007. All of them had a probable diagnosis of meningitis based on clinical signs, and on the cytological and biochemical alterations in the cerebrospinal fluid routine examination. Viral meningitis (VM) was present in 140 children (45%), 58 had bacterial meningitis (BM - 19%) and etiology was undetermined in 114 (36%). In MB, Neisseria meningitidis was the most frequent etiological agent (25 cases). Predominant clinical symptoms were fever, sickness and headache. The cerebrospinal fluid test showed a high number of polymorphonuclear leukocytes, high protein and low glucose level in MB; mononuclear cells were predominant in VM. Neurological complications were more frequent in BM, and convulsion the most common symptom (6/58 patients). Death happened to one case in VM and 3 in BM. Our conclusions were that the classical triad (headache, vomiting and fever) was the most common clinical manifestation, the cytological and biochemical abnormalities were typical, helping in the differentiation of MB from VM, although a good number of cases ended up with no etiological definition and, finally, immediate neurological complications and death were rare.

Doença de Lyme: diagnóstico e tratamento / Lyme Disease: diagnosis and treatment

A doença de Lyme é uma infecção bacteriana sistêmica causada pela espiroqueta Borrelia burgdoferi e transmitida por carrapatos do gênero Ixodes e Amblyomma. Ela é doença endêmica em áreas de animais silvestres, carrapatos e florestas, sendo pouco relatada no Brasil. É a patologia mais comum transmitida por carrapatos. As manifestações clínicas iniciam-se com aparecimento de eritema migratório no local da picada, seguido de sintomas semelhantes ao da gripe. Com a evolução da doença, pode ocorrer acometimento dos sistemas nervoso central, cardiovascular, ocular e articulações.Odiagnóstico é feito pelas características clínicas, dados epidemiológicos e exames laboratoriais; já o tratamento é realizado com administração de antibióticos conforme o estágio da doença.

Lyme disease is a multisystem bacterial infection caused by the spirochete Borrelia burgdorferi. It is transmitted by the bite of infected ticks of the genus Ixodes and Amblyomma. The disease is endemic in wooded, brushy areas, which are habitats for wild animals and ticks. It is the disease most commonly transmitted by ticks, but rarely reported in Brazil. Early local Lyme Disease often starts with erythema migrans at the site of the tick bite, followed by flu-like symptoms. In advanced stage the disease may cause symptoms in the joints, eyes, heart and nervous system. Diagnosis is based on clinical symptoms, epidemiology and laboratory tests. Lyme disease is treated with antibiotics according to the stage of the disease.

Heterogeneidade da virulência de cepas de Listeria monocytogenes, pertencentes a diferentes sorotipos, isoladas de amostras de alimento, do ambiente de processamento e de amostra clínica / Virulence heterogeneity of Listeria monocytogenes strains isolates from food, food processing line and clinical samples belonging to different serotypes

Listeria monocytogenes é um patógeno intracelular facultativo responsável por listeriose, uma doença de origem alimentar. Dentre os 13 sorotipos de L. monocytogenes existentes, o sorotipo 4b é o mais freqüentemente isolado de humanos, enquanto os sorotipos 1/2a, 1/2b e 1/2c são mais freqüentes em alimentos e amostras ambientais. O estudo da variabilidade de virulência de quatro cepas de L. monocytogenes recentemente isoladas (1/2B - alimento; 1/2C e 4BENV - ambiente de processamento de alimento; 4BCLIN - sangue), além de duas outras cepas de casos de listeriose (P14 e P14A), foi o objetivo deste trabalho. Avaliou-se a capacidade de invasão, proliferaçãao intracelular, citotoxicidade, disseminação intercelular, polimerização de filamentos de actina e transcrição gênica dos genes de virulência actA, plcA e plcB das cepas em modelos celulares eucarióticos MDBK, HeLa e L929. A cepa de origem alimentar 1/2B apresentou características de invasão, taxa de multiplicação (IGC), assim como a disseminação intercelular, semelhantes às cepas clínicas P14 e 4BCLIN em células HeLa. As cepas de origem ambiental (1/2C e 4BENV), apesar da baixa capacidade de invasão em todas linhagens celulares empregadas, apresentaram IGC superior às demais cepas estudadas e disseminação intercelular superior ou similar às cepas clínicas, dependendo da célula eucariótica. As cepas de origem clínica 4BCLIN, P14, P14A tiveram maiores porcentagens de invasão nas linhagens MDBK e L929, porém, em relação a população intracelular (UFC/mL), as cepas 4BCLIN e P14A foram superiores as demais. Estas últimas também foram citotóxicas às células HeLa, induzindo a liberação de LDH e à morte por necrose. Já as cepas de origem alimentar, ambiental e a cepa clínica P14 não foram citotóxicas às células HeLa e MDBK. Em relação à polimerização dos filamentos de actina não houve diferença estatística entre as cepas...

Pheno- and genotypic characterization of Listeria monocytogenes clinical isolates from the southwestern region of the State of São Paulo, Brazil

Considering the lack of information available in Brazil concerning listeriosis, the present study aimed to analyze phenotypic and genotypically Listeria monocytogenes clinical isolates from the Southwestern region of the State of São Paulo, Brazil. From January 1995 to May 2005, thirteen isolates of L. monocytogenes from twelve patients with listeriosis were sent to the Adolfo Lutz Institute (Campinas Regional Laboratory, São Paulo, Brazil). The antimicrobial susceptibility of the isolates was evaluated by the microdilution broth method for ampicillin, gentamicin, trimethoprim, sulfamethoxazole and vancomycin. They were also serotyped (Denka Seiken, Japan), and sub-typed by PFGE employing ApaI and AscI and the American CDC protocol. None of the isolates showed resistance to the antibiotics tested; however, seven of them presented increased values for sulfamethoxazole MICs. Ten isolates belonged to serotype 4b, two to serotype 1/2a and only one to serotype 1/2b. After digestion with ApaI and AscI, the strains were distributed in 3 different groups according to their profile. It was observed that the spatial or temporally unrelated strains exhibited similar PFGE profiles, indicating a possible clonal relationship among them.

No Brasil, dados sobre a ocorrência de surtos ou casos esporádicos de listeriose são raros, assim como estudos que tratem da caracterização de cepas de L. monocytogenes isoladas destes episódios. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo avaliar feno e genotipicamente 13 cepas de Listeria monocytogenes isoladas de 12 casos clínicos de listeriose ocorridos em 6 municípios da região sudoeste do Estado de São Paulo, Brasil, no período de janeiro de 1995 a maio de 2005. As cepas foram submetidas ao teste de sensibilidade a cinco antimicrobianos (ampicilina, gentamicina, trimetoprim, sulfametoxazol e vancomicina) pelo método de microdiluição em caldo; à sorotipagem (Denka Seiken, Japão) e à determinação do perfil de macro-restrição por eletroforese em campo pulsado (PFGE, Pulsenet, CDC, USA, 2001). Nenhuma das cepas foi resistente aos antimicrobianos testados; entretanto, sete tiveram valores da CIM aumentados para o sulfametoxazol. Dez cepas pertenciam ao sorotipo 4b, duas ao sorotipo 1/2a e apenas uma ao sorotipo 1/2b. Com o emprego da técnica de PFGE e as enzimas Apa I e Asc I as cepas foram separadas em três grupos diferentes, de acordo com seus perfis moleculares. É interessante destacar que cepas não relacionadas (temporal ou espacialmente) apresentaram perfis moleculares semelhantes indicando uma possível relação clonal entre elas.

Heterogeneidade da virulência de cepas de Listeria monocytogenes, pertencentes a diferentes sorotipos, isoladas de amostras de alimento, do ambiente de processamento e de amostra clínica / Virulence heterogeneity of Listeria monocytogenes strains isolates from, food, food processing line and clinical samples belonging to different serotypes

Listeria monocytogenes é um patógeno intracelular facultativo responsável por listeriose, uma doença de origem alimentar. Dentre os 13 sorotipos de L. monocytogenes existentes, o sorotipo 4b é o mais freqüentemente isolado de humanos, enquanto os sorotipos 1/2a, 1/2b e 1/2c são mais freqüentes em alimentos e amostras ambientais. O estudo da variabilidade de virulência de quatro cepas de L. monocytogenes recentemente isoladas (1/2B - alimento; 1/2C e 4BENV - ambiente de processamento de alimento; 4BCLIN - sangue), além de duas outras cepas de casos de listeriose (P14 e P14A), foi o objetivo deste trabalho. Avaliou-se a capacidade de invasão, proliferação intracelular, citotoxicidade, disseminação intercelular, polimerização de filamentos de actina e transcrição gênica dos genes de virulência actA, plcA e plcB das cepas em modelos celulares eucarióticos MDBK, HeLa e L929. A cepa de origem alimentar 1/2B apresentou características de invasão, taxa de multiplicação (IGC), assim como a disseminação intercelular, semelhantes às cepas clínicas P14 e 4BCLIN em células HeLa. As cepas de origem ambiental (1/2C e 4BENV), apesar da baixa capacidade de invasão em todas linhagens celulares empregadas, apresentaram IGC superior às demais cepas estudadas e disseminação intercelular superior ou similar às cepas clínicas, dependendo da célula eucariótica. As cepas de origem clínica 4BCLIN, P14, P14A tiveram maiores porcentagens de invasão nas linhagens MDBK e L929, porém, em relação à população intracelular (UFC/mL), as cepas 4BCLIN e P14A foram superiores às demais. Estas últimas também foram citotóxicas às células HeLa, induzindo à liberação de LDH e à morte por necrose. Já as cepas de origem alimentar, ambiental e a cepa clínica P14 não foram citotóxicas às células HeLa e MDBK. Em relação à polimerização dos filamentos de actina não houve diferença estatística entre as cepas. Todos os genes de virulência estudados apresentaram maior número de transcritos para as cepas de origem não clínica (1/2B, 1/2C e 4BENV). Sendo assim, todas as cepas de L. monocytogenes estudadas possuem potencial patogênico, por apresentar pelo menos duas características relacionadas à virulência da espécie. Alimentos possivelmente contaminados com estas cepas representam risco à saúde pública

Listeria monocytogenes is a facultative intracellular pathogen responsible for listeriose, a foodborne disease. Amongst the 13 serotypes of L. monocytogenes, the serotype 4b is more frequently isolated from clinical samples while the serotypes 1/2a, 1/2b and 1/2c are associated with food and food processing environment. The study of the virulence variability of four L. monocytogenes strains recently isolated (1/2B - food; 1/2C and 4BENV - food processing environment; 4BCLIN blood), as well as two strains of listeriosis (P14 and P14A) was the aim of this work. Eukaryotic cellular models HeLa, MDBK and L929 were used to evaluate the invasion capacity, intracellular proliferation, cytotoxicity, intercellular dissemination and polymerization of actin tails of L. monocytogenes strains. Gene transcription of the virulence genes actA, plcA and plcB was also conducted. The food isolate 1/2B presented invasion characteristics, multiplication index (IGC), as well as the intercellular dissemination, similar to the clinical strains P14 and 4BCLIN in HeLa cells. Environmental strains (1/2C and 4BENV), although showing a low capacity of invasion in all cellular models, had the highest IGC comparing to the other isolates. They also showed similar to or higher intercellular dissemination than the clinical ones, depending on the cell line used. The clinical strains 4BCLIN, P14, P14A presented greater invasion capacity in MDBK and L929 cells than all other isolates. However, in relation to the intracellular population (CFU/mL) the isolates 4BCLIN and P14A showed superior results. These strains were also cytotoxic to HeLa cells, inducing LDH release and death due to necrosis. The food, environmental and P14 isolates were not cytotoxic to HeLa and MDBK cells. There was no statistical difference in actin tail polymerization between the strains. The non-clinical isolates (1/2B, 1/2C and 4BENV) presented higher number of transcripts for than the clinical ones. In conclusion, all L. monocytogenes strains studied showed pathogenic potential, based on expression of at least two characteristics related to the virulence of the species. The presence of these strains in food represents public health risk

Neurological profile and neurodevelopment of 88 children infected with HIV and 84 seroreverter children followed from 1995 to 2002

This study evaluated the degree of neurological compromise in HIV-infected children accompanied by the outpatient clinic of infectious diseases and pediatric neurology of the Clinical Hospital of the Federal University of Paraná (UFPR) starting in 1995. Long-term progressive prospective and cross sectional study of 88 children infected by HIV and 84 seroreverter children, using data from general neurological examinations, neuroimaging procedures (brain CT scan) and neurodevelopmental tests (CAT/CLAMS and DENVER I and II). Neurological and neurodevelopmental alterations were found in 82 percent of the HIV-infected patients and in 36 percent of the HIV-seroreverter group (P <0.01). In the CAT/CLAMS test, the development quotient (DQ) of the HIV-infected group was significantly lower than that of the HIV-seroreverter group. CAT/CLAMS scores lower than 70 (mental deficiency) were found in 31 percent of the HIV-infected patients during the first year of life and in only 1 percent of the patients of the HIV-seroreverter group, demonstrating the validity of this screening test for precocious detection of alterations in the neurodevelopment of infected patients. The same occurred with the Denver I and II tests, as the HIV-infected group failed more frequently than the HIV-seroreverter group. Nine HIV-infected children presented altered brain CT scans; calcification of basal ganglia was the main finding (five cases). Encephalopathy due to HIV causes early arrest of neurodevelopment, which can be detected with screening tests during the first year of life.

Detecção de Escherichia coli Shiga Toxigênica (STEC) através da amplificação dos genes Stx / Detection of Shiga Toxigenic Escherichia coli (STEC) by amplification of Stx genes

As Escherichia coli Shiga Toxigênicas (STEC) são patógenos emergentes, causadores de diarréia e doenças graves como colite hemorrágica e síndrome hemolítico-urêmica. As STEC diferenciam-se das demais estirpes de E. Coli pela produção de um ou mais tipos de toxina denominadas toxina Shiga 1 e 2, codificadas pelos genes Stx1 e Stx2, respectivamente. O diagnóstico microbiológico das infecções causadas por STEC é dificultado pelo rápido decréscimo no número de organismos excretados nas fezes após o início dos sintomas e pela diversidade bioquímica e sorológica das estirpes de STEC. O objetivo deste trabalho é estabelecer um protocolo de PCR para a detecção de STEC que seja adequado para a rotina dos laboratórios clínicos. As culturas de estirpes de STEC e outros organismos usados como controles e das amostras de fezes diarréicas foram realizadas em ágar MacConkey e incubadas a 36ºC por 18-24 horas. A extração de DNA foi realizada pelo métoda da fervura. Na PCR foi utilizado um único par de iniciadores, ATACAGAGGGA/GGA/GATTTCGT e CC/ATGATGATGG/ACAATTCAG, capaz de detectar os genes Stx, Stx2 e seus variantes numa mesma reação através da ampliação de um fragmento de DNA de aproximadamente 220 pares de base (pb). A PCR foi realizada em volume de 50ml, contendo 10 ml de DNA, tampão Taq 1X; MgCl2, 1,5mM, dNTP 200mM, iniciadores 1mM cada, Taq DNA polimerase 2U. Empregou-se 1 ciclo de 94ºC por 5 minutos e 35 ciclos de 94ºC por 1 minuto, 47ºC por 30 segundos e 72ºC por 30 segundos, seguidos de 1 ciclo de 72ºC por 10 minutos. Os produtos de amplificação foram detectados através de eletroforese em gel de agarose a 2%. DNA extraído das estirpes de STEC O157:H7 (Stx1, Stx2) e O111 (Stx1) permitiu a amplificação de um fragmento de cerca de 220pb, mas nenhum produto de amplificação foi produzido quando o DNA de E. coli ATCC 25922 e de outros organismos controle não produtores de Stx foi utilizado. Foram analisadas 123 cultura de fezes e 3 apresentaram amplificação do fragmento de DNA de cerca de 220 pb, sugerindo a presença de Stx. O protocolo descrito neste trabalho mostrou-se sensível, específico e adequado ao laboratório clínico.

Measles in children with HIV infection: report of five cases

Patients with AIDS have a high incidence of skin problems due to the immunosuppression and malnourishment that are inherent to the progression of this disease. Clinical manifestation of these skin lesions and their severity are different in AIDS patients. We made a prospective study of five cases of measles in children with HIV infection during a community outbreak, and there were typical as well as atypical forms of the disease, including one case with negative serology. There were pulmonary complications, but none of the patients died. The anti-retroviral treatment may have contributed to the decrease in measles morbidity in these pediatric AIDS patients.

Developmental milestones of vertically HIV infected and seroreverters children: follow up of 83 children

The aim of the study was to detect neurological abnormalities in human immunodeficiency virus (HIV) infected children. This was achieved by a prospective evaluation, from November/1995 to April/2000, of 43 HIV infected children (group I) and 40 HIV seroreverters children (group II) through neurological exam and neurodevelopmental tests: Denver Developmental Screening Test (DDST) and Clinical Adaptive Test / Clinical Linguistic and Auditory Milestone Scale (CAT/CLAMS). A control group (III), of 67 children, were evaluated by CAT/CLAMS. Hyperactivity, irritability and hypotonia were the findings on neurological examination, without statistical differences between group I and II. On CAT/CLAMS, the group I developmental quotient (DQ) was significantly lower than the other groups. The same occurred in DDST, with group I presenting significantly more failures than group II. Nineteen HIV children of group I had brain computed tomographic scan, with abnormalities in three of them (basal ganglia calcification, white matter hypodensity and asymmetry of lateral ventricles). We conclude that in HIV infected children a neurodevelopment delay occur early in the disease, and it can be detected by screening tests

Aneurisma de artéria cerebral em criança com síndrome da imunodeficiência adquirida: relato de caso / Cerebral arterial aneurysm in a child with acquired immunodeficiency syndrome: case report

A dilataçäo aneurismática dos vasos do polígono de Willis é manifestaçäo incomum da infecçäo pelo vírus da imunodeficiência adquirida (HIV), tendo sido relatados, até o momento, 15 casos na literatura. O presente estudo tem por objetivo relatar um novo caso dessa apresentaçäo rara, além de revisar aspectos importantes relacionados à mesma. Um paciente, do sexo masculino, 6 anos de idade, com síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) de transmissäo perinatal e tetraparesia, desenvolveu sintomas caracterizados por episódios de crises distônicas. A tomografia computadorizada de crânio, que inicialmente era normal, mostrou dilataçäo aneurismática dos vasos do polígono de Willis. A revisäo de literatura demonstra que os principais achados patológicos em casos similares, säo, principalmente, fibrose de camada média com destruiçäo da lâmina interna e hiperplasia da íntima. A etiologia da vasculite näo é conhecida, acreditando-se que o vírus da varicela-zoster e o próprio HIV possam estar relacionados à mesma. Conclui-se que, apesar de incomum, tal complicaçäo apresenta grande importância pelo fato dos aneurismas colocarem esses pacientes em grupo de alto risco para acidentes vasculares. A sobrevida relatada na literatura é de menos de 6 meses após o diagnóstico da arteriopatia aneurismática cerebral

Avaliaçäo do teor de lipídios em queijos Minas Frescal industrializados e artesanais e em ricotas comercializados na regiäo de Botucatu/SP / Lipid level evalution in industrialized and handmade Minas Frescal cheese and rocottas from the region of Botucatu/SP

Este trabalho teve por objetivo avaliar o teor de lipídios em 23 marcas de queijos Minas Frescal industrializados, 9 de queijos artesanais e 10 de ricotas comercializadas na regiäo de Botucatu/SP. Para avaliaçäo de lipídios foi utilizado o método de Gerber. As informaçöes contidas nas embalagens de cada produto foram comparadas com os resultados obtidos. Todas as marcas de queijo Minas Frescal apresentaram teor de lipídios acima do declarado nas embalagens (16-18 por cento). Entre os queijos artesanais, de um total de 9 marcas, 4 apresentavam uma média de teor de lipídios de 16 por cento, semelhantes ao indicado nas embalagens dos queijos Minas Frescal industrializados. Já as ricotas, todas as marcas analisadas apresentavam teor de lipídios (por cento) ora do padräo estabelecido. Frente aos resultados obtidos, torna-se necessário um maior controle sobre a produçäo industrial brasileira destes tipos de queijos. (AU)

This present work aims to evaluate the level of lipids out of the total of mass, within 12 different Minas Frescal industrialized brands and 10 varieties of Ricotta from the region of Botucatu/ SP. Information included on the packages of each product were compared with the results in order to know whether the consumer is being well informed or not. The Gerber method was used to evaluate the lipids. Results were submmited to statistical analysis using the "F Test of Variance Analysis" and Tukey test. Industrialized varieties of Minas Frescal cheese showed, in 7 out of the 12 brands, a lipid level (%) fitting the established average standard, however, none of them matched the information described in their respective packages (16%-18%). Among the handwork cheeses, 5 out of 9, matched the established standard for Minas Frescal cheeses. The ricottas, all the 10 brands analyzed here did not match the established average standard of lipids grade (%). Face to the obtained results, it's up to the population to demand a more effective control of the imdustrialized Brazilian production.(AU)