Estudio comparativo de la sensibilidad entre el cultivo y la reacción en cadena de la polimerasa para la detección de bordetella pertussis a partir de muestras de hisopado nasofaríngeo / Comparative study of culture and sensitivity polymerase chain reaction in the diagnosis of bordetella pertussis from nasopharyngeal swab specimens

La tosferina es una enfermedad infecciosa causada por Bordetella pertussis, que se diagnostica mediante el cultivo como técnica de referencia, la cual tiene como limitante una baja sensibilidad. Es debido a esto, que el presente trabajo se centró en evaluar a la técnica de PCR a punto final amplificando las secuencias IS481 y PT, como una metodología alternativa diagnóstica a partir de 100 muestras pareadas de hisopado nasofaríngeo de pacientes provenientes de distintas regiones de Venezuela. Dichas muestras pareadas constaron de un hisopado para realizar el cultivo bacteriano y el otro para la detección de ADN específico. La identificación microbiológica de B. pertussis incluyó el aislamiento del microorganismo en agar Regan-Lowe, identificación bioquímica y la confirmación por coaglutinación. El análisis de los resultados fue realizado empleando el programa SPSS 21.0.0., usando como herramienta estadística el test de McNemar. La sensibilidad obtenida por el protocolo de PCR a punto final fue 50%, en concordancia con reportes previos. De acuerdo al valor de p=0,002 obtenido, la detección de B. pertussis mediante los dos métodos presentó una diferencia para el diagnóstico de tosferina estadísticamente significativa, por lo que no es indiferente emplear ambas técnicas diagnósticas. Sin embargo, se recomienda emplear en forma combinada ambas metodologías para incrementar la probabilidad de realizar el diagnóstico.

Whooping cough is an infectious disease caused by Bordetella pertussis, diagnosed by culture as a reference technique, which has low sensitivity as limiting. It is because of this that the present work focused on evaluating the PCR technique endpoint amplifying IS481 and PT sequences, as an alternative methodology diagnostic from 100 paired samples of nasopharyngeal swabs from patients from different regions of Venezuela. Such paired samples comprised a swab for bacterial culture and the other for detection of specific DNA. Microbiological identification of B. pertussis included the isolation of the microorganism in agar Regan-Lowe, biochemical identification and confirmation by Coagglutination. The analysis of the results was performed using the SPSS program 21.0.0., as a statistical tool using the McNemar test. The sensitivity obtained by the PCR protocol endpoint was 50%, consistent with previous reports. According to the value of p = 0.002 obtained, detection of B. pertussis by the two methods showed a difference for the diagnosis of pertussis statistically significant, so it is not indifferent both diagnostic techniques employed. However, it is recommended to use both methods in combination to increase the likelihood of diagnosis.

KPC and VIM producing Enterobacter cloacae strain from a Hospital in Northeastern Venezuela / Enterobacter cloacae productor de KPC y VIM en un Hospital del Noreste de Venezuela

An 83-year-old male patient is admitted to the central hospital in Cumaná, Venezuela with severe urinary infection, history of hospitalizations and prolonged antimicrobial treatments. A strain of Enterobacter cloacae was isolated showing resistance to multiple types of antibiotics (only sensitive to gentamicin), with phenotype of serine- and metallo-carbapenemases. Both, blaVIM-2 and blaKPC genes were detected in the isolate. This is the first report of an Enterobacteriaceae species producing both KPC carbapenemase and VIM metallo carbapenemase in Venezuela. This finding has a great clinical and epidemiological impact in the region, because of the feasibility of transferring these genes, through mobile elements to other strains of Enterobacter and to other infection-causing species of bacteria.

En un paciente masculino de 83 años, que ingresó al Hospital de Cumaná, Venezuela, con diagnóstico de infección urinaria severa, antecedentes de hospitalización y diferentes tratamientos antimicrobianos durante largos periodos de tiempo, se aisló una cepa de Enterobacter cloacae, la cual evidenció resistencia a múltiples tipos de antibióticos (solo sensible a gentamicina) y con fenotipo de carbapenemasas de tipo serina y metalobetalactamasa. Los genes blaVIM-2 y blaKPC fueron detectados en esta cepa. Este representa el primer reporte de una especie de Enterobacteriaceae productora simultánea de carbapenemasa KPC y metalobetalactamasa VIM en Venezuela. Esto tiene un gran impacto clínico y epidemiológico en la región por la posibilidad de transferencia de estos genes a otras cepas de Enterobacter u otras especies bacterianas causantes de infecciones, por medio de elementos móviles.

Diseminación de enterobacterias productoras de carbapenemasas tipo KCP en Venezuela / Spread of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae type KCP in Venezuela

La resistencia a carbapenems en la familia Enterobacteriaceae constituye un problema creciente a nivel mundial, siendo el mecanismo de mayor impacto clínico, epidemiológico y microbiológico, la producción de serino-carbapenemasas KPC. Investigar la presencia de carbapenemasas tipo KPC en aislados de Enterobacterias resistentes a carbapenems, provenientes de diversos centros de salud a nivel nacional, durante el período mayo 2010 - junio 2011. En esta investigación se analizaron 91 aislados de Enterobacterias: K pneumoniae (48), E. cloacae (30), E. aerogenes (4), E. coli (2), C. koseri (1), C. freundil (6), con resistencia a carbapenems provenientes de 14 centros de salud. La susceptibilidad antimicrobiana se evaluó siguiendo los criterios de la CLSI 2011. La detección fenotípica de carbapenemasas se realizó mediante el test de Hodge modificado y evaluando la sinergia con el ácido 3-aminofenilborónico 300 µg/disco. Se realizó el Test de Hodge "doble modificado" a los aislados de Enterobacter y Citrobacter. La detección genotípica de carbapenemasas se llevó a cabo mediante PCR utilizando iniciadores para el gen blaKPC. Todos los aislados presentaron a los deinhibición < 22 mm para meropenem y ertapenem. El 95% de los aislados resultaron positivos para el test de Hogde modificado, el test con ácido borónico, y para el gen blaKPC. En el test de Hodge "doble modificado", se observó 100% de positividad. La resistencia a carbapenems mediada por Carbapenemasas KPC, se ha incrementado en los últimos años en el país y el carácter plasmídico de estas enzimas les permite su fácil diseminación entre diversos géneros de Enterobacterias.

Resistance to carbapenems is the family Enterobacteriaceae is a growing problem around the world, being production of KPC serino-carbapenemase, the mayor impact clinical, epidemiological and microbiological mechanism. To investigate the presence of KPC carbapenemases in isolates of Enterobacterias resistant to carbapenems, from various health centers nationwide, during the period May-2010 June 2011. In this study were analyzed 91 Enterobacterias isolates: K. pneumoniae (48), E. cloacae (30), E. aerogenes (4), E. coli (2), C. koseri (1), C. freundii (6), with resistance to carbapenems from 14 health centers. Antimicrobial susceptibility was evaluated according to the criteria of the CLSI 2011. Phenotypic detection of carbapenemases was performed by Modified Hodge Test and it was evaluated the synergy with the 3-aminophenylboronic 300 µg/disc. Test were done with "double Modified" Hodge to Enterobacter and Citrobacter isolates. Genotypic detection of carbapenemases was performed out by using PCR primers for the gene blaKPC. All isolated showed inhibition zones <22 mm for meropenem and ertapemen. The 95% of the isolates were positive for Hogde Modified Test, test with boronic acid, and to blaKPC gene. By performing "Double Modified" Hodge`s essay , we observed a 100% of positivity. Resistance to carbapenems mediated by KPC carbapenemases has increased in the last few years in the country, and plasmidic characterization of these enzymes allows easily dissemination among different genera of Enterobacteriaceae.