Biomarcador da modificaçäo oxidativa da LDL in vivo / Biomarker LDL's oxidative modification in vivo

As modificaçöes oxidativas da lipoproteína de baixa densidade (LDL) säo consideradas um fator importante para o desenvolvimento da aterosclerose. Estas modificaçöes ocorrem in vivo, originando uma sub-traçäo denominada de LDL, eletronegativa (LDL-). O monitoramento clínico da LDL- é de extrema importância, mas estava sendo limitado pela dificuldade para detecçäo desta partícula em fluídos biológicos. Neste estudo desenvolveu-se novas metodologias para detectar a LDL- no plasma, utilizando-se um anticorpo monoclonal anti-LDL- humana (3D1036) e avaliar a resposta imune humoral relacionada à LDL-. A LDL- plasmática foi analisada através de um ELISA com detecçäo por quimioluminescência com boa sensibilidade (<1,0µg/mL) e precisäo (CVintra=6,44 ñ 1,15 porcento e CVinter=8,59 ñ 3,42 porcento). As análises dos auto-anticorpos anti-LDL- evidenciaram a presença de uma resposta imune específica para LDL- em humanos e em coelhos. A determinaçäo da LDL-, abre novas perspectivas para o monitoramento das modificaçöes oxidativas endógenas da LDL em estudos clínicos e de intervençäo que utilizam um elevado número de amostras. Além disto, a detecçäo dos auto-anticorpos anti-LDL- demonstra o potencial imunogênico desta partícula. Portanto, a detecçäo da LDL- e dos auto-anticorpos anti-LDL- abre novas perspectivas para o monitoramento dos fatores de risco para a aterosclerose vinculados às reaçöes oxidativas

Monoclonal antibodies against low density lipoprotein with various degrees of oxidative modifications

Oxidative processes leading to the generation of oxidized low density lipoprotein (oxLDL) particles have been suggested to be an important factor in the pathogenesis of atherosclerosis. After initiation of the oxidative process, LDL undergoes a progressive protein and lipid fragmentation. To understand this process and the role of oxLDL in various diseases of inflammatory origin, we have generated mouse monoclonal antibodies against copper-oxidized human LDL. Mice were immunized intrasplenically and after one intravenous boost the spleen cells were fused with the Sp2/0 hybridoma fusion partner. The hybridoma clones obtained after selection and cloning were analyzed for reactivity against oxLDL with various degrees of copper-mediated oxidative modifications. Three hybridoma clones were purified and further characterized. The following observations were made: 1) the intrasplenic route of immunization, avoiding the use of mycobacterial adjuvants, yielded a high frequency of positive clones; 2) the individual hybridomas reacted against LDL with various degrees of oxidative modifications; 3) the monoclonal antibodies could be used in ELISA and to detect oxLDL in immunohistochemical tissue staining, and 4) the monoclonal antibodies also detected oxLDL from hamsters and rabbits. We conclude that these monoclonal antibodies could be useful to further investigate the role of oxLDL in inflammation and in the immune response.