Estandarización de un ensayo inmunoenzimático para la detección de anticuerpos anti-ADN doble cadena en el lupus eritematoso sistémico / Standardization of an immunoenzymatic assay to detect anti-double-stranded DNA antibodies in systemic lupus erythematosus

Introducción: los anticuerpos anti-ADN doble cadena son un marcador serológico diagnóstico de lupus eritematoso sistémico (LES). El ensayo inmunoenzimático en fase sólida es una técnica rápida y rentable para su detección. Objetivo: estandarizar un ELISA que detecte anti ADN doble cadena para el diagnóstico del lupus. Métodos: los pasos que se siguieron para la estandarización incluyeron la preparación de controles, la sensibilización de la fase sólida, la selección de los amortiguadores y conjugado del ensayo, la evaluación de las condiciones de reacción y la determinación del nivel de corte. Además se realizó el estudio de inespecificidades. Se probaron 5 tipos de placas de poliestireno y se compararon ADN plasmádico de E.coli, pUC19 y ADN genómico humano como antígenos de recubrimiento. Se evaluó el efecto de la poli-L-lisina y la irradiación de la placa con luz ultravioleta, en la fijación del antígeno. El valor de corte del ensayo se determinó por el método del valor límite. Resultados: se observó disociación del antígeno cuando no se utilizó poli-L-lisina en el pretratamiento de la placa y la irradiación con luz UV no favoreció la unión del ADN a la fase sólida. No se encontraron diferencias significativas (p=0,710) entre ambos ADN, en el recubrimiento. El valor de corte (K=3) permitió clasificar como positivas 28 muestras (63,6 porciento) de pacientes con LES. Conclusiones: el método estandarizado, con el empleo de ADN plasmádico, permitió la detección de anticuerpos anti-ADN doble cadena en pacientes con lupus

Introduction: anti-double-stranded DNA antibodies are a diagnostic serological marker for systemic lupus erythematosus (SLE). The solid-phase immunoenzymatic assay is a rapid, cost-effective technique for their detection. Objective: Standardize an ELISA detecting anti-double-stranded DNA for the diagnosis of lupus. Methods: the standardization process included the following steps: preparation of controls, sensitization of the solid phase, selection of buffers and assay conjugate, evaluation of reaction conditions and determination of the cut-off level. A study of unspecificities was also conducted. Five types of polystyrene plates were tested, and a comparison was made of E. coli (pUC19) plasmid DNA and human genomic DNA as coating antigens. An evaluation was conducted of the effect of poly (L-lysine) and irradiation of the plate with ultraviolet light upon antigen fixation. The assay cut-off value was determined by the limit value method. Results: antigen dissociation was observed when poly (L-lysine) was not used in the pretreatment of the plate and UV light irradiation did not foster DNA binding to the solid phase. No significant differences were found (p=0.710) between the two DNA coatings. The cut-off value (K=3) made it possible to classify 28 samples of patients with SLE as positive (63.6 percent). Conclusions: the method standardized with the use of plasmid DNA enabled detection of anti-double-stranded DNA antibodies in patients with lupus

Relación de laappoptosis y autoinmunidad / Apoptosis and autoimmunity relationship

Los estudios sobre la apoptosis han experimentado un vertiginoso desarrollo en los últimos años. Con el objetivo de revisar el papel de la apoptosis en el sistema inmune y su posible relación con la autoinmunidad, se estudiaron 25 documentos referentes al tema. Se describen los factores genéticos, inductores e inhibidores de la apoptosis así como sus mecanismos bioquímicos en los linfocitos. Se hace referencia a la importancia de la muerte celular programada en el sistema inmunológico y su función en la patogenia de algunas enfermedades autoinmunes.

Apoptosis studies have progressively developed in recent years.With the objective to revise the apoptosis role of the immunological system and its possible relation with the autoimmunity, 25 documents refer to this topic, were studied. The genetic factors, inductors and inhibitors of the apoptosis, as well as its biochemical mechanisms in the lymphocytes, are described. The importance of the planned cell death in the immunological system and its function in the pathogeny of some autoimmune illnesses, are mentioned.

Carácter de la sensibilización en pacientes politransfundidos en espera de trasplante renal con alelos hla a1, b8 y dr3 / Character of sensitivization in renal petransplantation blood transfused patients with HLA; B8 and DR3 allelomorphs

Se realizó un estudio descriptivo para determinar el rango de transfusiones involucrado en el carácter de la respuesta de sensibilización en receptores con alelos A1, B8, DR3 y combinaciones. La muestra fue de 71 pacientes con IRCt con alelos A1, B8, DR3, A1B8 o xDR3 (A1DR3, B8DR3 o A1B8DR3), correspondientes a la lista de espera del Programa Nacional de Trasplante Renal en Cuba, en los meses de octubre y noviembre de 2005 en el Hospital Universitario Manuel Ascunce Domenech. Se calculó porcentaje de sensibilización medio actual (PSM) en cada grupo de alelos, para intervalos de 1-10, 11-20 y más de 20 transfusiones. Se consideró no respondedor al PSM de hasta 10 por ciento y respondedor de 11-100 por ciento. En el intervalo de 11-20 transfusiones coincidieron los dos extremos de la respuesta, se halló PSM tipo no respondedor en pacientes con alelos A1B8 (6.1 por ciento) y xDR3 (0.0 por ciento), mientras que aquellos con alelos B8 o DR3, mostraron PSM tipo respondedor y significativamente más altos (52.5 por ciento y 56.9 por ciento, respectivamente), que para menores cantidades de transfusiones. Los pacientes menos respondedores se correspondieron con las combinaciones alélicas A1B8 y xDR3, fundamentalmente con 11-20 transfusiones. El carácter respondedor se asocia a los alelos B8 y DR3, generalmente cuando el rango de transfusiones es menor a 10. Estos resultados son útiles para trazar protocolo transfusional en los pacientes en espera de trasplante según su tipaje HLA