Establecimiento e implementación de un protocolo simplificado de expansión y cultivo de Células Madre de Pulpa Dental Humana (DPSCh) / Estabelecimento e implementação de um protocolo simplificado para expansão e cultura de células-tronco da polpa dentária humana (DPSCh) / Establishing and implementing a simplified protocol for the expansion and culture of human dental pulp stem cells (hDPSCs)

Resumen Objetivos: Establecer e implementar un protocolo simplificado de extracción, aislamiento primario y cultivo de células madre derivadas de la pulpa dental humana (DPSCh). Analizar cuantitativamente y cualitativamente las células aisladas. Metodología: 10 terceros molares sanos donados por pacientes que concurrieron a la Facultad de Odontología, UdelaR y otorgaron su consentimiento escrito fueron procesados antes de las 48 hs. Se realizó la fractura de la pieza para la obtención del tejido pulpar y se procesó por el método explante. Se analizó viabilidad celular y expresión de marcadores por citometría de flujo en pasajes 4 y 12 y se corroboró mediante inmunocitoquímica. Resultados: Las células obtenidas presentaron una vitalidad mayor al 90% en todos los pasajes, observándose una morfología característica y expresión de marcadores de células madre mesenquimales CD90, C105, CD73, CD29 y 166 mediante citometría de flujo en ambos pasajes. Conclusiones: Se logró establecer un protocolo de aislamiento y expansión celular, con alta tasa de éxito de una población de DPSCh.

Resumo Objetivos: Estabelecer e implementar um protocolo simplificado para a extração, isolamento primário e cultura de células-tronco da polpa dentária humana (DPSCh). Analise as células isoladas quantitativa e qualitativamente. Metodologia: 10 terceiros molares saudáveis ​​doados por pacientes que frequentaram a Faculdade de Odontologia UdelaR e deram consentimento por escrito foram processados ​​antes de 48 horas. A fratura da peça foi realizada para obtenção do tecido pulpar e processada pelo método do explante. A viabilidade celular e a expressão do marcador foram analisadas por citometría de fluxo nas passagens 4 e 12 e confirmadas por inmunocitoquímica. Resultados: As células obtidas apresentaram viabilidade superior a 90% em todas as passagens, observando uma morfologia característica e expressão dos marcadores de células-tronco mesenquimais CD90, C105, CD73, CD29 e 166 por citometría de fluxo em ambas as passagens. Conclusões: Foi possível estabelecer um protocolo de isolamento celular, com alta taxa de sucesso e segurança para isolar o DPSCh.

Abstract Objectives: To establish and implement a simplified protocol for the extraction, primary isolation, and culture of human dental pulp stem cells (hDPSCs). To analyze the isolated cells quantitatively and qualitatively. Methodology: Ten healthy third molars were donated by patients who attended the School of Dentistry, UdelaR, and gave their written consent. The teeth were processed within 48 hours. The teeth were sectioned to obtain the pulp tissue and processed with the explant method. Cell viability and marker expression were analyzed by flow cytometry at passages 4 and 12 and verified by immunocytochemistry. Results: The cells obtained had a vitality greater than 90% in all passages. We found the characteristic morphology and the expression of CD90, C105, CD73, CD29 and 166 mesenchymal stem cell markers by flow cytometry in both passages. Conclusion: It was possible to establish a cell isolation protocol that is highly successful and safe to isolate hDPSC.

Tratamiento complementario de heridas crónicas con factor de crecimiento estimulante de colonias de granulocitos. A propósito de dos casos clínicos / Granulocyte Colony-Stimulating Growth Factor complementary treatment in chronic wounds. Report of two cases / Tratamento complementar de feridas crônicas com colônias de granulócitos estimulantes do fator de crescimento. Cerca de dois casos clínicos

RESUMEN: Introducción: Independientemente de su etiología, las heridas crónicas, representan un desafío terapéutico debido a que muchas veces son refractarias a tratamientos convencionales. Es por este motivo que en los últimos años se han desarrollado de forma creciente estrategias complementarias en el área de la medicina regenerativa, como: terapias con células madre, ingeniería de tejidos, plasma rico en plaquetas y factores de crecimiento aplicados en las heridas crónicas. Dichas terapias complementarias han mostrado ciertos beneficios en la cicatrización de heridas complejas. Materiales y métodos: Se presentan dos casos clínicos de pacientes con heridas crónicas de diferente etiología, refractarias al tratamiento con cura avanzada de heridas, las cuales recibieron de forma complementaria factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF; Filgen®). Se realizaron inyecciones locales de G-CSF a una dosis de 300 mcg/ml en piel peri úlcera en forma semanal completando dos series de cuatro inyecciones cada una. Resultados. Ambos casos presentaron una reducción en el área de las mismas alcanzándose la cicatrización total en un paciente y una reducción del 37% en el otro luego de dos series. El procedimiento fue bien tolerado y no se reportaron efectos adversos relacionados al mismo. Conclusiones: Los resultados obtenidos en estos pacientes mostraron beneficios en la cicatrización con la aplicación del G-CSF. Se requieren de ensayos clínicos controlados que permitan establecer el rol de dicho factor en el tratamiento de las mismas. Por este motivo nuestro grupo de trabajo se encuentra desarrollando un protocolo que permita evaluar este aspecto.

ABSTRACT: Introduction: Regardless of their etiology, chronic wounds, represent a therapeutic challenge because they are often refractory to conventional treatments. Due to this observation, in the last few years, new complementary strategies have emerged in the area of regenerative medicine, including stem cell therapeutics, tissue engineering, platelet rich plasma, and growth factors applied to chronic wounds. These complementary therapies have shown certain benefits in healing of complex wounds. Materials and methods: We present two clinical cases of patients with chronic wounds of different etiology, refractory to advanced and conventional wound treatments, which received complementary granulocyte colony-stimulating growth factor (G-CSF; Filgen®). Local injections with G-CSF were administered weekly in periulcer skin at a dose of 300 mcg/ml, completing two series of four injections each. Results: Both cases showeda reduction in their areas, reaching to total healing inone patient, and a reduction of 37% in the other one after two series of treatment. The procedure was well tolerated and no adverse effects were detected. Conclusions: The results obtained with these patients showed a benefit in cicatrization with the administration of G-CSF. Controlled clinical trials are needed to establish the role of G-CSF in these wounds. Thus, our group is developing a protocol to evaluate this aspect.

RESUMO: Introdução: Independentemente da sua etiologia, as feridas crônicas representam um desafio terapêutico porque muitas vezes são refratárias aos tratamentos convencionais. É por esta razão que nos últimos anos foram desenvolvidas estratégias complementares na área da medicina regenerativa, tais como: terapias de células estaminais, engenharia de tecidos, plasma rico em plaquetas e fatores de crescimento aplicados a feridas crônicas. Tais terapias complementares mostraram certos benefícios na cicatrização de feridas complexas. Materiais e métodos: Dois casos de pacientes com feridas crónicas de diferentes etiologias, refractárias ao tratamento com a cura da ferida avançado, que receberam complementaria factor estimulante forma de colónias de granulócitos (Filgen® FEC-G) presente. As injeções locais de G-CSF foram feitas a uma dose de 300 mcg / ml na pele peri úlcera, semanalmente, completando duas séries de quatro injeções cada. Resultados: Ambos os casos mostraram uma redução na área do mesmo atingindo a cicatrização total em um paciente e uma redução de 37% no outro após duas séries. O procedimento foi bem tolerado e nenhum efeito adverso relacionado a ele foi relatado. Conclusões: Os resultados obtidos nestes pacientes mostraram benefícios na cura com a aplicação de G-CSF. Ensaios clínicos controlados são necessários para estabelecer o papel desse fator no tratamento deles. Por esse motivo, nosso grupo de trabalho está desenvolvendo um protocolo que nos permite avaliar esse aspecto.