Evaluation of thymic lymphocyte loss of broiler using Digital Analysis of the Lymphoid Depletion System (ADDL) / Avaliação de perda de linfócitos do timo em frangos usando análise digital do sistema de depleção linfóide (ADDL)

The thymus is a lymphoid organ and usually evaluated for the degree of lymphocyte loss with subjective histological techniques. This study aimed to adapt and to apply of the digital analysis of the lymphoid depletion system (ADDL) in the thymus in order to obtain a more accurate analysis. Glucocorticoid was used to induce immunosuppression in 55 broilers at 21 days of age; other 15 broilers were the control group. After euthanasia of the broilers, postmortem examination was made. Both thymic chains were collected and six lobes were selected for histological examination of the degree of lymphocyte depletion (scores 1 to 5) and for submission to all stages of processing by the ADDL system. The artificial constructed neural networks (ANN) obtained 94.03% of correct classifications. In conclusion, it was possible to adopt objective criteria to evaluate thymic lymphoid depletion with the ADDL system.(AU)

O timo é um órgão linfóide, que é normalmente avaliado para o grau de perda de linfócitos a partir de técnicas histológicas subjetivas. Este trabalho teve como objetivo a adaptação e aplicação do sistema de análise digital de depleção linfóide (ADDL) para o timo, a fim de tornar sua análise mais acurada. Glicocorticóides foram utilizados a fim de induzir imunossupressão em 55 aves de 21 dias de idade. Outras 15 aves formaram o grupo controle. Posteriormente, para cada um dos aves, realizou-se a eutanásia e necropsia. Ambas as cadeias do timo foram coletadas e foram selecionadas seis lóbulos para processamento histológico, análise quanto ao grau de depleção linfocitária (escores de 1-5) e submissão a todas as fases do processamento pelo sistema ADDL. Observou-se que a rede neural artificial (RNA) construída obteve 94,03% de classificações corretas. Em conclusão, foi possível adotar critérios objetivos para avaliar a depleção linfóide tímica utilizando o sistema ADDL.(AU)

Diagnóstico molecular de Leptospira spp em matrizes suínas descartadas / Molecular diagnosis of Leptospira spp in culled sows

O diagnóstico da leptospirose foi efetuado através de método molecular, histopatológico e sorológico em 30 matrizes suínas, descartadas, no Rio Grande do Sul, Brasil. Os objetivos foram comparar a eficiência dos 3 métodos, verificar a sensibilidade de um método de PCR que utiliza um primer único baseado na seqüência de um elemento repetitivo do genoma de Leptospira interrogans, bem como verificar a possível detecção de leptospiras em vários tecidos , incluindo o trato genital. Os animais foram selecionados com base no teste de algutinação microscópica para incluir tanto animais negativos como positivos e com baixos e altos títulos sorológicos. As maiores freqüências (90% dos animais positivos) e títulos (100 a 800) foram observados para L. interrogans serovar bratislava. Leptospiras foram detectadas por histopatologia em apenas 9 matrizes, todas com altos títulos (pelo menos 100). Um produto de PCR de 438 bp foi observado em todos os animais (fragmentos de 25 rins, 24 úteros e 9 avidutos). Produtos de PCR similares foram obtidos em DNA de culturas de leptospiras patogênicas, enquanto a não patogênica, L. patoc apresentou um padrão distinto. Nenhum produto de amplificação de DNA de Leptospira spp foi detectado em DNA de culturas de Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella sp, Streptococcus sp and Staphylococus aureus, ou de sangue de dois leitões. O método molecular foi, assim , específico e o mais eficiente para detectar baixos níveis de patógeno, sendo capaz de difernciar leptospiras patogênicas e não patogênicas.

Leptospirosis diagnosis was performed through molecular, histopathological and serological tests in 30 culled sows in Rio Grande do Sul, Brazil. The objectives were to compare the efficiency of the three methods, to verify the sensitivity of a PCR methodology using a single primer based on the sequence of a repetitive element of Leptospira interrogans genome, as well as to verify the possible detection of Leptospira in several tissue including the genital tract of sows. The animals were selected based on the microscopic agglutination test in order to have sows with negative and positive results, presenting low and higher serologic titers. The higher frequency (90% of the positive sows) and titers (100 to 800) was observed for L. interrogans serovar bratislava. Leptospira was detected by histopathology in nine sows only, all presenting higher serologic titers (at least 100). A PCR product of 438 bp was observed in all animals (25 kidneys, 24 uterus and 9 oviduct) fragments. Similar PCR product was obtained for DNA from cultures of other pathogenic leptospires, while the pattern observed for the non-pathogenic L. patoc was distinct. No Leptospira spp DNA amplification product was detected in Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella sp, Streptococcus sp and Staphylococcus aureus DNAs obtained from cultures, or in blood DNA samples of two piglets. The molecular system was therefore specific and the most effective to detect low pathogen levels, being able to differentiate pathogenic from non-pathogenic leptospires.

Laryngotracheitis: reproducibility of the disease and comparison of diagnostic methods

O vírus da laringotraqueíte (VLT) causa de leve a severa doença respiratório em galinhas, o propósito do nosso estudo foi usar um isolado brasileiro de VLT para reproduzir a doença em frangos através da infecção experimental e comparar três métodos de diagnóstico (nested PCR, isolamento viral e histopatologia) para detectar o VLT. Quarenta e oito frangos inoculados intratraquealmente com VLT e outros 48 com PBS, apresentaram sinais respiratórios leves 48 horas após a infecção (PI), mas nenhum sinal após o dia 10 PI. A cada dois dias, seis aves foram selecionados arbitrariamente do controle e do grupo infectado, sacrificados e as traquéias coletadas. Ambos nested PCR e isolamento viral detectaram o vírus do dia 2 até o dia 12 PI. No entanto, no dia 12 PI, a PCR detectou o DNA viral em 100% das amostras enquanto o isolamento viral detectou em somente 33% das amostras. Histopatologia da traquéia revelou corpúsculos de inclusão intranuclear nos dias 8 e 10 PI. Os resultados indicam que o VLT isolado de campo estudado é de baixa patogenicidade e que o protocolo de Nested PCR foi capaz de detectar amostras positivas por um período mais longo da infecção do que muitos testes de diagnósticos descritos.

Laryngotracheitis: reproducibility of the disease and comparison of diagnostic methods

Infectious laryngotracheitis virus (ILTV) cause mild to severe respiratory disease in chickens, the purpose of our study being to use Brazilian isolate of ILTV to reproduce ILTV disease in chickens by experimental infection and to compare three diagnostic methods (nested polymerase chain reaction (PCR), virus isolation, histopathology) for detection of ILTV. Forty-eight chickens intratracheally inoculated with ILTV and a further 48 with PBS, showing mild respiratory signs 48 hours post infection (PI) but no signs of infection after day 10 PI. Every 2 days PI, six birds were arbitrarily selected from the control and infected groups, sacrificed and the trachea collected. Both the nested PCR and virus isolation detected the virus from day 2 until day 12 PI. However, at day 12 PI, PCR detected ILTV DNA in 100% of the samples while the virus isolation method detected ILTV in only 33% of the samples. Tracheal histopathology showed intranuclear inclusion bodies on days 8 and 10 PI. The results indicate that the field-isolate of ILTV studied by us is of low pathogenicity and that our nested PCR protocol was able to detect positive samples over a longer infection period than many ILTV diagnostic test already described.

O vírus da laringotraqueíte (VLT) causa de leve a severa doença respiratório em galinhas, o propósito do nosso estudo foi usar um isolado brasileiro de VLT para reproduzir a doença em frangos através da infecção experimental e comparar três métodos de diagnóstico (nested PCR, isolamento viral e histopatologia) para detectar o VLT. Quarenta e oito frangos inoculados intratraquealmente com VLT e outros 48 com PBS, apresentaram sinais respiratórios leves 48 horas após a infecção (PI), mas nenhum sinal após o dia 10 PI. A cada dois dias, seis aves foram selecionados arbitrariamente do controle e do grupo infectado, sacrificados e as traquéias coletadas. Ambos nested PCR e isolamento viral detectaram o vírus do dia 2 até o dia 12 PI. No entanto, no dia 12 PI, a PCR detectou o DNA viral em 100% das amostras enquanto o isolamento viral detectou em somente 33% das amostras. Histopatologia da traquéia revelou corpúsculos de inclusão intranuclear nos dias 8 e 10 PI. Os resultados indicam que o VLT isolado de campo estudado é de baixa patogenicidade e que o protocolo de Nested PCR foi capaz de detectar amostras positivas por um período mais longo da infecção do que muitos testes de diagnósticos descritos.

Problemas locomotores em frangos de três linhagens do tipo corte: I. Aspectos clínicos, ocorrência de discondroplasia tibial e encurvamento do tibiotarso / Locomotor problems in broiler chickens of three commercial strains: I. Clinical aspects, occurrence of tibial dyschondroplasia and bowing of tibiotarsus

Estudou-se a ocorrência de problemas locomotores, discondroplasia tibial e encurvamento do tibiotarso em 18250 frangos do sexo masculino pertencentes a três linhagens do tipo corte (linhagem A: 6000 aves; linhagem B: 6250 aves e linhagem C: 6000 aves) criados nas mesmas condiçöes de manejo e alimentaçäo. Perturbaçöes locomotoras acorreram em 277 (1,5//) aves, näo se constatando diferenças significativas entre linhagens quanto ao número de indivíduos afetados: linhagem A, 90 (1,5//) casos; linhagem B, 103 (1,6//) casos e linhagem C, 84(1,4//) casos. Deformaçöes do tipo "valgus-varus" atingiram 220 (79,4//) animais após os 21 dias de idade. Artrite supurada ocorreu em 11 (4,0//) aves com problemas locomotores, isolando-se, na maioria dos casos, E. coli e Staphylococcus sp. Provas sorológicas foram negativas para Mycoplasma synoviae, Mycoplasma gallisepticum e reovírus (S-1133). Em 46 (16,6//) das 277 aves com problemas da locomoçäo, näo foram constatadas alteraçöes macroscópicas nos membros locomotores. Discondroplasia tibial foi diagnosticada a partir dos 28 dias de idade, em 12 (11,4//) de 105 espécimes clinicamente sadios e em 24 (30,0//) de 80 acometidos de distúrbiosda locomoçäo, näo havendo diferenças estatisticamente significativa entre linhagens quanto à suscetibilidade: linhagem A, 11 casos; linhagem B, oito casos e linhagem C, 17 casos. Encurvamento do tibiotarso afetou 29 (36,0//) de 80 aves com problemas locomotores, após a quinta semana de vida, nem sempre em associaçäo com discondroplasia tibial