Competitive-IgY- Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (CIgY-ELISA) to detect the cytokinins in Gerbera jamesonii plantlets

A competitive hyper-immune yolk Immunoglobulin Y - Enzyme Linked Immune Sorbent Assay (CIgY-ELISA), was developed as an alternative method to detect zeatin and 2ip in plantlets of gerbera. The endogenous level of hormones in the plantlets in vitro of gerbera with one or six weeks after replication was determined with competitive IgY-ELISA set to detect between 1 and 100 pmoles of plant hormone for each 1.0 g tissue. The plantlets of six weeks presented sprouts and root, while the plantlets of one week presented only sprouts. The CIgY-ELISA was set with high independent variables values of sensitivity/specificity of 96/89 percent for zeatin and 94/78 percent for 2ip, with high values of reproducibility (up to 90 percent) for both the cytokinins. Zeatin content varied from 2.2 to 2.8 pmoles.g-1 and from 2.7 to 3.3 pmoles.g-1 on the plantlet with one and six weeks, respectively. The 2ip content did not vary and was detected near the detection limit in all the assays. It was concluded that the observed capabilities of CIgY-ELISA were putative and the competitive assay was a highly robust and stable method, which could be used for the studies on plant physiology for endogenous cytokinins.

Histopatologia e imuno-histoquímica de camundongos C57BL/6 infectados por Toxoplasma gondii cepa ME-49 e alimentados com micotoxinas / Histopatology and immunohistochemistry of C57BL/6 mice infected with Toxoplasma gondii ME-49 strain and fed with mycotoxins

A avaliação do curso da infecção por Toxoplasma gondii em camundongos alimentados com micotoxinas, utilizando a histopatologia e imuno-histoquímica, demonstrou a ocorrência de lesões mais acentuadas nos animais infectados e expostos às toxinas. Diferentes quadros de inflamação e necrose encefálica e hepática mostraram que a associação entre parasitismo e a ingestão das micotoxinas causou agravamento nas lesões. A fumonisina B1(FB1, isolada ou associada a outras micotoxinas) foi responsável por alterações celulares como gigantismo nuclear, hipertrofia celular e células atípicas em tecido hepático. A FB1 foi também relacionada com quadros de desmielinização em tecido cerebral. A presença de cistos ou formas livres da cepa ME-49 de T. gondii foi constatada tanto em animais controle quanto nos alimentados com micotoxinas, mostrando que a cepa do parasita, nesta linhagem C57BL/6 de camundongos, apresenta formas características de fase aguda e crônica da infecção.

The course of toxoplasmosis in mice fed with mycotoxins was evaluated by histopatology and immunohistochemistry. The most severe lesions was seen in animals infected by T. gondii and fed on mycotoxins, when they were compered with control animals. Encephalitis, hepatitis, necrosis foci in the brain and liver showed that the association parasite infection and micotoxicosis aggravated the lesions. The fumonisin B1(isolated or in adiccion to others mycotoxins) was responsable for cellular alteration like nuclear enlargement, cellular hypertrophy, and atypical cells in hepatic tissue. This mycotoxin was also related to brain desmyelinization. The presence of cysts or free parasites was observed in control and intoxicated animals. This result showed that ME49 strain of T. gondii, in C57BL/6 mice, can display typical forms of acute and chronic infection.

Perfil leucocitário de frangos de corte tratados com ocratoxina A / Leucocytes of broilers chickens treated with ochratoxin A

Alterações leucocitárias provocadas pela administração única de baixa dose de ocratoxina A foram avaliadas em 120 pintos deum dia da linhagem comercial de corte Hiyeld/Rezende. Os animais foram separados em três grupos experimentais: grupo 1(n=40) sem tratamento; grupo 2 (n=40) tratado com 40mg/Kg ocratoxina A e grupo 3 (n=40) tratado com solução salinatamponada. As amostras de sangue foram obtidas e analisadas no dia da aplicação, aos sete, 14 e 21 dias de vida. Foiobservada uma redução significativa (p<0,01) de leucócitos mononucleares (linfócitos e monócitos) nas aves tratadas comocratoxina A, caracterizando toxidez aguda decorrente da exposição à baixa dose da micotoxina em aves neonatas, após umaúnica exposição.

Leucocytes dysfunction caused by the administration of a single low dose of ochratoxin A (OTA) was evaluated in 120 one day oldchicks from broiler line HIYIELD/REZENDE. The study was carried out in three groups of animals: group 1 (n=40) with treatedanimals; group 2 (n=40) with animals treated with OTA and group 3 (n= 40), which received a phosphate buffered saline (PBS).Blood samples were obtained and analyzed in the same day of inoculation, and at seven, 14th and 21st days old. A significantreduction of mononuclear leukocytes was observed in the birds treated with OTA, suggesting an acute toxicity as a result of theexposure to a single low dose of OTA in neonatal chicks.

Dinâmica populacional de células mielóides durante o curso de inflamação crônica em camundongos C57BL/6 infectados com Toxoplasma gondii / Population dynamics of myeloid cells during the course of chronic inflammation in C57 BL/6 mice infected with Toxoplasma gondii

Fagócitos mononucleares (M°) e polimorfo-nucleares neutrófilos (PMN) foram analisados durante o curso da infecção por Toxoplasma gondii em camundongos C57 BL/6, fêmeas, portadores de inflamações crônicas focais induzidas por material inerte. A dinâmica populacional de células mielóides dirigidas ao suporte inerte foi medida a partir do quarto dia após inoculação intraperitonial de 90-100 cistos de T. gondii, ao longo de vinte dias, e comparada com o percentual relativo de leucócitos sangüíneos. Observou-se uma diminuição do percentual de PMN e um aumento significativo de M° no sangue dos animais infectados. A infecção assintomática por T. gondii em camundongos resultou em um maior esforço do sistema mielóide na produção de células destinadas a combater focos inflamatórios, tornando-as menos aptas a responder adequadamente a diferentes fontes de infecção crônica. A mudança na maturidade e nas proporções normais de células mielóides indicou haver um bloqueio da extrusão de quimiocinas responsáveis pela atração quimiotática de PMN com comprometimento da resolução de focos inflamatórios durante infecções crônicas e assintomáticas por Toxoplasma gondii.

Elisa de captura com IgY para quantificação de acetato de lupeol em Vernonia scorpioides lam. Pers (asteraceae) / Capture IgY-elisa to quantify lupeol acetate in Vernonia scorpioides lam. Pers (asteraceae)

O presente experimento descreve, pela primeira vez, a elaboração de um ensaio imunoenzimático (ELISA de captura) com anticorpos IgY para a detecção e quantificação de acetato de lupeol (LAc) em Vernonia scorpioides Lam. Pers (Asteraceae). Anticorpos anti-LAc, obtidos partir do soro das aves e gemas de seus ovos, após imunização com o conjugado acetato de lupeol-cBSA, foram concentrados em coluna contendo LAc-BSA acoplado a sepharose. A eficácia da metodologia de detecção imunológica foi de 97 por cento, com índices de sensibilidade e especificidade de 99 por cento e 95 por cento, respectivamente com limites de detecção do ensaio entre 0,02µg.g-1 (inferior) e 10 µg.g-1 (superior). A robustez do método foi atestada pela sua elevada reprodutibilidade (entre 94,75 por cento e 96,81 por cento), e pelo baixo coeficiente de variação interna (4,22 ± 1,03 por cento) nas condições de execução descritas.

Effect of citrinin and in association with aflatoxin B1 on the infectivity and proliferation of Toxoplasma gondii in vitro

Macrophages exposed to 10 mug/mL citrinin (CTR) or 0.01 mug CTR mixed with 0.04 mug aflatoxin B1 (AFB1) for a period of 2 h at 37ºC, were infected with 10(6) Toxoplasma gondii tachyzoites/muL. The parasites were treated with mycotoxins (2 h at 37ºC) before being added to the macrophage culture. The number of tachyzoites was quantified 2, 24, 48, 72 and 96 h after infection. During the first 2 hours, 59 percent infectivity was observed in the control. After exposure to CTR or the mixture of toxins (CTR-AFB1), macrophages were infected with 77.5 percent and 75 percent of the inoculated tachyzoites, respectively. Similarly, 72.3 percent of the cells were infected when cultured together with previously treated parasites. The treatment with CTR-AFB1 gave rise to 2.9 times more tachyzoites than the control at 72 h. An increased number of parasites was recovered from macrophages exposed to CTR after 96 h, and to CTR-AFB1 after 72 h of culture; The number of tachyzoites recovered from the supernatant was 1.94 and 2.06 times higher, respectively, than in the control (5 x 10(5) ± 0.054 /mL).

Ocratoxina A, aflatoxina B1 e citrina como agentes moduladores da produçäo de anticorpos em aves e mamíferos / Ochratoxin A, aflatoxin B1 and citrinin aas modulators agents of antibodies production in poultry and mammalian

O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de demonstrar os efeitos causados pela associaçäo entre ocratoxina A, aflatoxina B1 e citrinina, sobre a resposta imunitária adaptativa de aves e mamíferos, a fim de determinar se estas micotoxinas poderiam levar à modulaçäo do sistema imune. A toxicidade relativa de cada micotoxina, bem como de suas associaçöes, foi determinada em células esplênicas de galinhas e camundongos, onde se observou a secreçäo primária de anticorpos (IgM) contra eritrócitos de carneiro, após quatro horas de exposiçäo às micotoxinas. Os ensaios foram realizados na presença e na ausência de soro heterólogo proveniente de animais adultos normais, a fim de determinar possíveis interaçöes entre o complemento presente no soro, com a açäo tóxica das micotoxinas. Observou-se uma notável depressäo imunológica nos grupos tratados com a associaçäo entre citrina e aflatoxina B1, porém, na presença de soro heterólogo, houve uma imunoestimulaçäo. Os resultados sugerem uma possível interferência de fatores inespecíficos, os quais estäo presentes no soro proveniente de animais adultos normais, cuja atividade poderia amenizar ou até mesmo neutralizar a açäo imunomodulatória das micotoxinas, sugerindo a possibilidade de imunoterapia.

Supressäo da resposta imunitária humoral causada por citrinina efeito imunotóxico da citrinina / Humoral immunoresponse discontinuance caused by citrinin

O presente trabalho foi realizado com a finalidade de avaliar o efeito imunotóxico causado por exposiçäo a baixas doses de citrinina (2,5mg.Kg(-1)). Para tanto, lotes de cinco camundongos albinos foram expostos à micotoxina antes, durante e após imunizaçäo com antígeno inerte (eritrócitos de carneiro - SRBC). Sete dias após tratamento, os animais foram sangrados e os títulos de anticorpos anti-SRBC e de complemento foram determinados, em relaçäo a um grupo controle näo intoxicado. Observou-se que a citrinina causou diminuiçäo nos títulos de anticorpos primários de todos os grupos de animais intoxicados. A intoxicaçäo antes e após à imunizaçäo provocou uma diminuiçäo nos títulos médios de anticorpos específicos equivalente a 87,5 por cento. A exposiçäo simultânea a imunizaçäo gerou uma diminuiçäo de 75 por cento. Houve, também, uma marcante reduçäo nos níveis de complemento circulante, detectada nos animais previamente intoxicados (93,75 por cento), ou intoxicados juntamente com a imunizaçäo (87,5 por cento). Os efeitos relativos da citrinina sobre populaçöes linfocitárias e sobre os processos inflamatórios e de apresentaçäo de antígenos também foram discutidos.

Humoral immune response in cattle experimentally infested with larvae of Dermatobia hominis

Foram estudadas as alteraçöes imunológicas em um grupo de seis bovinos infestados, experimentalmente, com 60 larvas de primeiro ínstar (L1) de Dermatobia hominis por animal, enquanto que outro grupo de seis animais foi utilizado como controle. Amostras de sangue tomadas, semanalmente, durante a infestaçäo experimental, foram analisadas para se detectar anticorpos anti-L1, anti-L2 e anti-L3 de D. hominis, utilizando-se a técnica de ELISA, na qual utilizou microplacas contendo amostras de soro dos animais e preparaçöes antigênicas de L1, L2 e L3. Observou-se nos animais infestados, o aparecimento de anticorpos anti-L1 desde o primeiro até o 21§ dia pós-infestaçäo (DPI) e após o 42§ DPI, enquanto que os anticorpos anti-L2 foram detectados no 21§ DPI, e no período do 35§ ao 49§ DPI, seguido de declínio até atingirem valores semelhantes aos animais controles. Näo se detectaram níveis expressivos de anticorpos para antígenos de L3. Os níveis de anticorpos anti-L1 dos animais infestados revelaram absorbância (D.O.) alta, ou seja, acima de 1,.500 a 492nm quando comparado ao valor médio de 0,096 obtido nos animais controles, o que também ocorreu com os níveis de anticorpos anti-L2 no 21§ DPI, nos quais dois animais apresentaram valores de D.O. de 0,450 e 0,900 a 492nm, em relaçäo ao valor discriminante (cut-off) estimado em 0,110 dos animais controles. Verificou-se um aumento dos níveis de anticorpos anti-L2 em quatro animais que também apresentaram resposta contra antígenos de L1. Os resultados obtidos com a técnica de ELISA, pressupondo-se uma prevalência de 50 por cento, quando comparados com a técnica padräo de imunodifusäo dupla, revelaram uma concordância de 98 por cento. Discutiu-se ainda a associaçäo entre infestaçäo e presença de anticorpos específicos.

Inhibition of fungal growth by extracts of Vernonia Scorpioides (Lam.) pers

As propriedades antifúngicas de extratos obtidos a partir de folhas e caules de Vernonia scorpioides (Lam.) Pers., foram testadas para Penicillium citrinum. Os extratos foram testados pelo método de difusäo em agar, nas concentraçöes de 1mg. 3mg e 5 mg para cada 100 ml de diluente, em poços escavados no centro de placas de Petri. Extratos clorofórmicos e hexâmicos obtidos a partr de caules foram extremamente eficientes, originando halos de inibiçäo com 40,0, 50,0 e 80,0mm, respectivamente. O desenvolvimento de hifas, na presença desses extratos mostrou-se incipiente. Os extratos de folhas verdes também apresentaram efeitos semelhantes, embora de menor intensidade, uma vez que originaram halos de inibiçäo entre 10 e 15mm de diâmetro para Aspergillus alutaceos (ochraceus) e entre 15 e 20mm de diâmetro para Penicillinium citrinum. Concluiu-se que que os extratos ativos de V. scorpioides exercem uma açäo fungicida, uma vez que näo se conseguiu, a partir dos tratamentos, realizar subcultivos em meio Czaoeck-Dox isento de inibidores. Através dos expectros no infravermelho dos extratos ativos, observou-se a existência de sinais, característicos do estiramento de carbonilas lactânicas (com absorçäo entre 1750cm e 1770cm) ativas, indicando a presença provável de lactonas sesquiterpênicas, possíveis responsáveis pela atividade observada