Anacardium excelsum phytochemical analysis and in vitro antimicrobial activity against oral cavity microorganisms / Análisis fitoquímico y actividad antimicrobiana in vitro de Anacardium excelsum sobre microorganismos de cavidad bucal

ABSTRACT Infections of the oral cavity have a broad microbial etiological profile that varies according to each microenvironment in the mouth. Such infections often require antimicrobial treatment, which can lead to the development of resistance. There is thus a need to find new therapeutic strategies based on natural plant-derived compounds. The aim of this study was to determine the phytochemical nuclei and the antimicrobial effect of Anacardium excelsum leaf and stem extracts, and of fractions derived from the leaf extract, against Streptococcus mutans ATCC 25175, Staphylococcus aureus ATCC 35548, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 and Candida albicans ATCC 10231. The plant material was collected from the Quindío Botanical Garden (Calarcá, Quindío-Colombia), located at an altitude of 1500 meters above sea level. Hydroalcoholic extracts of A. excelsum leaves and stems, and fractions of the hydroalcoholic leaf extract, were obtained by percolation extraction. Phytochemical nuclei were identified by thin layer chromatography. The antimicrobial activity of the extracts and fractions (at concentrations of 2, 5, 10, 20 and 40 mg / ml) against the five ATCC reference strains was evaluated using the well diffusion technique on Mueller-Hinton agar. The leaf extract showed no antimicrobial activity against E. coli, but it did show antimicrobial activity against S. mutans, S. aureus, E. faecalis and C. albicans, at a concentration of 10 mg/ml, with zones of inhibition of 9 to 11 mm. The ethyl acetate and acetone fractions obtained from A. excelsum leaf extract had greatest antimicrobial activity at 10 mg/ml. In conclusion, (1) the A. excelsum leaf extract, and the ethyl acetate and acetone fractions obtained from the leaf extract, had the greatest antimicrobial activity on all the study microorganisms, and (2) the phytochemical nuclei in the fractions (ethyl acetate and acetone) were found to contain phenolic-type compounds, tannins, triterpene-type terpenes and steroidal-type terpenes, which might explain the antimicrobial activity observed.

RESUMEN Las infecciones de la cavidad bucal se caracterizan por presentar un amplio perfil etiológico microbiano que varía de acuerdo a cada microambiente en boca. En muchos casos estas infecciones requieren tratamiento antimicrobiano que puede conducir al desarrollo de resistencia. Estos hechos en conjunto generan la necesidad de buscar nuevas estrategias terapéuticas, provenientes de compuestos naturales derivados de plantas. El objetivo de este estudio fue determinar los núcleos fitoquímicos y el efecto antimicrobiano de extractos de hojas y tallos, y de fracciones derivadas del extracto de hojas de Anacardium excelsum contra Streptococcus mutans ATCC 25175, Staphylococcus aureus ATCC 35548, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 y Candida albicans ATCC 10231. El material vegetal se colectó del Jardín Botánico del Quindío (Calarcá, Quindío-Colombia), situado a una altura de 1500 msnm. Se obtuvieron extractos hidroalcohólicos de hojas y tallos, y fracciones a partir del extracto hidroalcohólico de hojas de A. excelsum mediante extracción por percolación. La identificación de los núcleos fitoquímicos fue realizado por cromatografía en capa delgada. La evaluación de la actividad antimicrobiana de extractos y fracciones, en concentraciones de 2, 5, 10, 20 y 40 mg/ml, frente a las 5 cepas de referencia ATCC, se realizó mediante la técnica de difusión con aplicación en pozo sobre agar Mueller-Hinton. El extracto de hojas no presentó actividad antimicrobiana sobre E. coli pero si sobre S. mutans, S. aureus, E. faecalis y C. albicans, en una concentración de 10 mg/ml, con halos de inhibición desde 9 a 11 mm, y las fracciones de acetato de etilo y acetona obtenidas del extracto de hojas de A. excelsum, presentaron mayor actividad antimicrobiana en una concentración de 10 mg/ml. En conclusión, 1. El extracto de hojas y las fracciones de acetato de etilo y acetona obtenidas del extracto de hojas de A. excelsum presentaron mayor actividad antimicrobiana sobre todos los microorganismos en estudio; 2. La evaluación de los núcleos fitoquímicos en las fracciones acetato de etilo y de acetona mostraron compuestos de tipo fenólico, taninos, terpenos del tipo triterpenos y terpenos del tipo esteroidal, que posiblemente expliquen la actividad antimicrobiana obtenida.

Genotipificación, niveles de expresión y estado físico del virus del papiloma humano en pacientes colombianos con cáncer de células escamosas en la cavidad oral / Genotyping, levels of expression and physical status of human papilloma virus in oropharyngeal squamous cell carcinoma among Colombian patients

Introducción. Uno de los factores de riesgo del carcinoma de células escamosas en la cavidad oral es la infección por el virus del papiloma humano (HPV), cuyas prevalencias dependen de la región geográfica. Objetivo. Identificar los tipos del virus del papiloma humano más frecuentes en el cáncer de la cavidad bucal, sus niveles de expresión y el estado físico del genoma viral. Materiales y métodos. Se seleccionaron 46 pacientes que asistían a los servicios de cirugía de cabeza y cuello en Bogotá, Manizales y Bucaramanga. El examen histopatológico de las muestras incluidas en el estudio demostró la presencia de carcinoma de células escamosas en la cavidad oral en todas ellas. Se extrajo el ADN para genotipificar el virus y determinar el estado físico de su genoma, y el ARN para determinar los transcritos virales mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. Resultados. La prevalencia del virus del papiloma humano en los tumores fue de 21,74% (n=10) y el tipo viral más frecuente fue el HPV-16 (nueve casos). La expresión viral del HPV-16 fue baja (una de 11 copias) y el estado físico predominante fue el mixto (ocho casos), con prevalencia de la disrupción en el sitio de unión de E1 y E2 (2525 a 3720 nucleótidos). Conclusión. En los pacientes con carcinoma de cavidad oral incluidos en este trabajo, la frecuencia del virus del papiloma humano fue relativamente baja (21,7 %) y el tipo viral más frecuente fue el HPV-16, el cual se encontró en forma mixta y con baja expresión de E7 , lo cual puede ser indicativo de un mal pronóstico para el paciente.

Introduction: One of the risk factors for squamous cell oropharyngeal carcinoma is infection with the human papilloma virus (HPV), with prevalences that vary depending on the geographical region. Objective: To identify the most frequent HPV viral types in oropharyngeal cancer, the levels of expression and the physical condition of the viral genome. Materials and methods: Forty-six patients were included in the study from among those attending head and neck surgical services in the cities of Bogotá, Manizales and Bucaramanga. In the histopathological report all study samples were characterized as oropharyngeal squamous cell carcinoma. DNA extraction was subsequently performed for HPV genotyping and to determine the physical state of the viral genome, as well as RNA to determine viral transcripts using real-time PCR. Results: HPV prevalence in tumors was 21.74% (n=10) and the most common viral type was HPV-16 (nine cases). Viral expression for HPV-16 was low (one of 11 copies) and the predominant physical state of the virus was mixed (eight cases), with disruption observed at the E1 - E2 binding site (2525 - 3720 nucleotides). Conclusion: The prevalence of HPV associated with oropharyngeal carcinoma among the Colombian study population was 21.7%, which is relatively low. The most frequent viral type was HPV-16, found in a mixed form and with low expression of E7 , possibly indicating a poor prognosis for these patients.

Biotipos y susceptibilidad antimicrobiana de S. mutans en niños con y sin caries dental / Biotypes and antimicrobial susceptibility of S. mutans in children with and without dental caries

Objetivos: investigar los biotipos de S. mutans aislados de niños con y sin caries dental y determinar su susceptibilidad antimicrobiana. Métodos: este estudio observacional descriptivo incluyó 206 niños entre los 3 y 5 años de dos preescolares en Bogotá, D. C., Colombia. Después de su aislamiento en agar Mitis Salivarius Bacitracina, las cepas S. mutans se identificaron por pruebas bioquímicas y se biotipificaron por el sistema api-ZYM. En todos los aislamientos se determinó por el método de dilución en agar la concentración inhibitoria mínima (CIM) de Penicilina, Amoxicilina, Cefazolina, Eritromicina, Clindamicina, Imipenem, Vancomicina y Teicoplanina. Resultados: Se encontró S. mutans en 30 de los 79 niños sin caries dental (38%) y en 56 de los 127 niños con caries (44,1%). Los niños con caries presentaron un recuento superior de S. mutans en comparación con los niños sin caries (p < 0,05). En total se identificaron 121 cepas de S. mutans en los 86 niños: 43 cepas en los 30 niños sin caries dental y 78 en los 56 niños con caries dental. Las 121 cepas fueron agrupadas en 38 biotipos: 24 en el grupo de caries y 14 en el grupo sin caries. En el grupo de caries los biotipos más frecuentes fueron el XV, XI, XII y XVII, respectivamente, con 26, 12, 11 y 4 cepas y en el grupo sin caries los biotipos más frecuentes fueron el XXVI, XX y XXXVI, respectivamente, con 14, 8 y 7 cepas. Todos los biotipos fueron altamente sensibles a los antimicrobianos evaluados; el 50 y 90% de las cepas S. mutans fueron inhibidas, respectivamente, por concentraciones menores a 0,12 y 1 µg/ml para todos los antimicrobianos estudiados. Para la penicilina, eritromicina e imipenem se obtuvieron los valores promedios más bajos de CIMs. Conclusiones: en la población objeto de estudio se encontró una gran diversidad biotípica, los aislamientos fueron altamente susceptibles a los antimicrobianos evaluados y en cada grupo de pacientes se identificaron patrones únicos que podrían indicar una colonización específica.

Objectives: The main objective was to investigate the biotypes of S. mutans isolated from children with and without dental caries and determine its antimicrobial susceptibility. Methods: this descriptive observational study included 206 children aged 3 to 5 years of two preschool institutions in Bogota-Colombia. After isolation on agar Mitis Salivarius Bacitracin, S. mutans strains were identified by biochemical tests and biotyped by the api-ZYM system. The minimal inhibitory concentrations (MICs) of the S. mutans isolates were evaluated against penicillin, amoxicillin, cefazolin, erythromycin, clindamycin, imipenem, vancomycin and teicoplanin by an agar dilution method. Results: S. mutans was found in 30 of the 79 children without dental caries (38%) and in 56 of the 127 children with caries (44.1%). Children with cavities had a higher count of S. mutans compared to children without caries (p < 0.05). A total of 121 strains of S. mutans were identified in 86 children: 43 strains in 30 children with dental caries and 78 in the 56 children with dental caries. The 121 strains were grouped into 38 biotypes: 24 in the group caries and 14 in the group without caries. In the group caries the most common biotypes were the XV, XI, XII and XVII, respectively, with 26, 12, 11 and 4 strains and the group caries the most common biotypes were the XXVI, XX and XXXVI, respectively, with 14, 8 and 7 strains. All biotypes were highly sensitive to all antimicrobials tested; 50 and 90% of S. mutans strains were inhibited by using concentrations lower than 0.12 and 1 µg/ml, respectively, for all antibiotics studied. The lowest MICs average values were obtained for penicillin, erythromycin and imipenem. Conclusions: In the study population a wide variety of biotypes was found, isolates were highly sensitive to antimicrobials evaluated and in each clinical group were identified unique patters that could indicate a specific colonization.

Antimicrobial activity of fractions and subfractions of Elaeagia utilis against microorganisms of importance in dental caries

La caries dental es una enfermedad infecciosa multifactorial que conduce a la destrucción del tejido duro dental. El principal objetivo de la investigación en plantas medicinales es la búsquedade compuestos con actividad antimicrobiana para su posterior uso en estrategias de prevención o control de enfermedades infecciosas. El objetivo de este estudio fue evaluar la actividad antimicrobiana de fracciones y subfracciones obtenidas de la planta Elaeagia utilis contra Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus y Lactobacillus acidophilus. El materialvegetal fue colectado en la ciudad de Albán (Cundinamarca-Colombia) situada a una altitud de 2245 metros sobre el nivel del mar. Mediante el método de maceración en frio de hojas de E. utilis se obtuvieron dos extractos, uno en éter de petróleo y otro en etanol. Del extracto etéreo se obtuvieron fraccionesmediante cromatografía en columna al vacío y al extracto etanólico se le realizó fraccionamiento líquido/líquido continuo. La evaluación de la actividad antimicrobiana de las fracciones ysubfracciones se realizó por el método de difusión en pozo. A una concentración de 10 mg/pozo, múltiples fracciones obtenidas de los dos extractos presentaron actividad antimicrobianasobre S. mutans, S. sobrinus y L. acidophilus. De las fracciones del extracto etanólico se destaca la fracción diclorometano, por presentar mayor actividad antimicrobiana, razón por lo cual se subfracciona y se obtienen tres subfracciones con actividad inhibitoria.La subfracción más activa fue eOH:H2O (Bp) con una concentración mínima inhibitoria de 0.1 mg/pozo sobre las 3bacterias en estudio. En esta subfracción se determinaron terpenos, sesquiterpenlactonas y compuestos fenólicos simples. En conclusión, en este estudio se presenta el potencial antimicrobiano de fracciones y subfracciones obtenidas de extractos dehojas de E. utilis contra microorganismos de importancia encaries dental.

Dental caries is a multifactorial infectious disease that leads tothe destruction of dental hard tissue. The main goal of researchinto medicinal plants is to seek compounds with antimicrobialactivity for subsequent use in prevention strategies and controlof infectious diseases. The aim of this study was to evaluate theantimicrobial activity of fractions and subfractions obtainedfrom Elaeagia utilis against Streptococcus mutans, Streptococ-cus sobrinus and Lactobacillus acidophilus. The plant materialwas collected in the town of Alban (Cundinamarca, Colombia),which is located at an altitude of 2245 meters above sea level.Two extracts were obtained by cold maceration of E. utilis leavesin (a) petroleum ether extract and (b) ethanol extract. Fractionswere obtained from the petroleum ether extract by column vacu-um chromatography, and from the ethanol extract by continuousliquid / liquid partitioning. The antimicrobial activity of frac-tions and subfractions was evaluated by the well diffusionmethod. At a concentration of 10 mg /well, several fractions fromboth extracts showed antimicrobial activity against S. mutans, S.sobrinus and L. acidophilus. Among the ethanol extract frac-tions, the dichloromethane fraction had notably greaterantimicrobial activity. It was sub-partitioned, yielding three sub-fractions with inhibitory activity, of which the most active wasMeOH: H2O (Bp) with minimum inhibitory concentration 0.1mg /well on the 3 study bacteria. Terpenes, sesquiterpenlactonesand simple phenolic compounds were identified in it. In conclu-sion, this study shows the antimicrobial potential of fractionsand subfractions obtained from extracts of E. utilis leaves againstbacteria that are important in dental caries.

Presence and antimicrobial profile of Gram-negative facultative anaerobe rods in patients with chronic periodontitis and gingivitis

La periodontitis crónica es una enfermedad infecciosa multifactorial hacen parte de la microflora subgingival. En los últimos años se han realizado estudios para valorar la presencia de bacilos Gramnegativos anaerobios facultativos (enterobacterias) y suimportancia en el desarrollo y rogresión de la periodontitis crónica. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de enterobacterias en pacientes con periodontitis crónica y gingivitis y conocer la susceptibilidad antimicrobiana de los aislamientosclínicos. Se realizó un estudio observacional y descriptivo en elque se incluyeron 64 pacientes con periodontitis crónica y 22 pacientes con gingivitis. Las muestras tomadas en el surco gingival con conos de papel se depositaron en caldo tioglicolato, seincubaron durante 4 horas a 37 oC y se resembraron finalmente en Agar MacConkey. En la identificación de las bacterias se utilizó el sistema API-20E (Biomerieux, France) y la susceptibilidadantimicrobiana se realizó por el método de difusión en disco. En los dos grupos se identificaron 29 especies enterobacterianas, 7 en el grupo con gingivitis y 22 en el grupo con periodontitis crónica. En el grupo de periodontitis crónica las especies masfrecuentes fueron: K. oxytoca n=5, S. liquefaciens n=4 y K.pneumoniaey E. coli con n=3. En el grupo con gingivitis, Erwiniasp tuvo la mayor frecuencia (n=2). Los aislamientos clínicos presentaron níveles muy bajos de sensibilidad a los B-lactamicosampicilina y amoxicilina/ ac.clavulanico, 17.2 y 27.6 por ciento, y la mayor sensibilidad a ciprofloxacina. En conclusión, la alta frecuencia de enterobacterias en pacientes con periodontitis debe conducir a la prevención y a desarrollar terapias mecánicas y antimicrobianas en las cuales se tengan en cuenta, como parte del tratamiento periodontal, los perfiles antimicrobianos reportados.

Antimicrobial potential of extracts from Stevia Rebaudiana leaves against bacteria of importance in dental caries

En los últimos años, se ha evaluado la actividad antimicrobiana de extractos obtenidos de jojas de Stevia rebaudiana Bertoni sobre un gran número de microorganismos de importancia encaries dental. El objetivo de este estudio fue evaluar la actividad antibacteriana de extractos de hojas de Stevia rebaudiana Bertoni sobre microorganismos cariogénicos. A partir de hojas secas de Stevia rebaudiana Bertoni convertidas en polvillo seobtuvieron los extractos en dichos solventes. La evaluación de la actividad antimicrobiana de los 5 extractos sobre las 16 cepas bacterianas de los géneros Streptococcus (n=12) y Lactobacillus(n=4) se realizó por el método de difusión en pozo. Las concentraciones mínimas inhibitorias (CMI) de los extractos de hexano, metanol, etanol, acetato de etilo y cloroformo, sobre las 16 cepas bacterianas fueron respectivamente de 30 mg/ml, 120 mg/ml, 120 mg/ml, 60 mg/ml y 60 mg/ml, respectivamente. Los halos de inhibición determinados a las CMIfueron variables, el de menor valor fue 9 mm y el de mayor fue de 17.3 mm. Nuestros resultados, sugieren que los halos de inhibición en el extracto de hexano son semejantes a los obtenidos para el etanol y metanol, sin embargo, la CMI (30 mg/ml) es menor. En las 4 especies de Lactobacillus los halosde inhibición obtenidos entre 13 y 17.3 mm, son ligeramente mayores en los extractos de acetato de etilo y cloroformo, sugiriendo que fueron los microorganismos más susceptibles.

Anticariogenic activity of the active fraction from isertia laevis against S. mutans and S. sobrinus: comparison of two extraction methods

Dental caries is considered a multi-factorial, infectious, chronic, localized, post-eruptive, transmissible disease that leads to the destruction of dental hard tissue. The recognition of Streptococcus mutans as the major bacterial species involved in dental caries has led to the implementation of prevention and control measures for eliminating or reducing it in oral cavity. The main goal of research on medicinal plants is the search for substances or compounds with antimicrobial activity. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of fractions obtained by two methods from Isertia laevis against S. mutans and S. sobrinus. The plant material was collected in Medina (Colombia), at an elevation of 550 meters above sea level. From the ethanol extract of leaves of I. laevis, fractions were obtained by two methods: extraction by column vacuum chromatography (CVC) and extraction by continuous liquid / liquid partitioning (CLLP). The evaluation of the antimicrobial activity of fractions against S. mutans and S. sobrinus was performed by well diffusion and bioautography assays. From the CVC technique, only the methanol and methanol-dichloromethane fractions showed activity against S. mutans and S. sobrinus, with a minimum inhibitory concentration of 2 mg/well. From the CLLP technique, only the dichloromethane fraction showed activity against both microorganisms, with a minimum inhibitory concentration of 1 mg/well. Compounds C1 and C2 were isolated from the three active fractions, and showed a minimum inhibitory concentration of 0.4 mg/well for S. mutans and S. sobrinus, with zones of inhibition measuring 6.5 and 6.2 mm, respectively. In conclusion: 1) the three active fractions of I. laevis showed activity against S. mutans and S. sobrinus, 2) compounds C1 and C2 were present equally in the three active fractions showing activity against the two bacteria, 3) compounds C1 and C2 may be triterpenoid and/or steroidal saponin structures, and 4) the two extraction methods lead equally to obtaining the active fractions.

La caries dental es considerada una enfermedad infecciosa multifactorial, cronica, localizada, poseruptiva y transmisible que conlleva a la destruccion del tejido dental duro. El claro reconocimiento de Streptococcus mutans como la principal especie bacteriana implicada en caries dental, ha conducido a la implementacion de medidas de prevencion y control para la eliminacion o disminucion de este microorganismo en cavidad oral. El objetivo fundamental de la investigacion en plantas medicinales, es la busqueda de sustancias o compuestos con actividad antimicrobiana para ser utilizadas en el control o prevencion de enfermedades infecciosas. En este sentido, en salud bucal muchas sustancias obtenidas de plantas han mostrado actividad antimicrobiana. El objetivo de este estudio fue evaluar la actividad antimicrobiana de fracciones obtenidas de la planta Isertia laevis mediante dos metodologias contra S. mutans y S. sobrinus. El material vegetal se colecto en el municipio de Medina (Cundinamarca- Colombia) situado a una altura de 550 metros sobre el nivel del mar. A partir del extracto etanolico de hojas de I. laevis se obtuvieron fracciones mediante dos metodologias, extraccion por cromatografia en columna al vacio (CCV) y extraccion por fraccionamiento liquido/liquido continuo (FLLC). La evaluacion de la actividad antimicrobiana de las fracciones frente a S. mutans y S. sobrinus se realizo por el metodo de difusion en pozo y bioautografico. De las fracciones obtenidas por CCV, solamente las fracciones metanol y metanol-diclorometano presentaron actividad antimicrobiana sobre S. mutans y S. sobrinus, con una concentracion minima inhibitoria de 2 mg/pozo. De las fracciones obtenidas por FLLC solamente la fraccion diclorometano presento actividad antimicrobiana sobre S. mutans y S. sobrinus, con una concentracion minima inhibitoria de 1 mg/pozo. De las 3 fracciones activas se aislaron los compuestos C1 y C2, que presentaron una concentracion minima inhibitoria de 0.4 mg/pozo tanto para S. mutans como para S. sobrinus con halos de inhibicion, respectivamente, de 6.5 y 6.2 mm. En conclusion, 1. Las fracciones metanol y diclorometano obtenidas por CCV y la fraccion diclorometano obtenida por FLLC de hojas de I. laevis presentaron actividad antimicrobiana sobre S. mutans y S. sobrinus; 2. Los compuestos C1 y C2 presentes por igual en las tres fracciones activas tuvieron accion inhibitoria sobre las dos bacterias en evaluacion; 3. Las pruebas quimicas cualitativas para los compuestos C1 y C2 indican que posiblemente corresponden a estructuras de saponinas triterpenicas y/o esteroidales; y 4. Las dos metodologias de extraccion conducen por igual a la obtencion de las fracciones activas.

Genotypic profiles by AP-PCR of Streptococcus mutans in caries-active and caries-free preschoolers

Streptococcus mutans, an acidogenic and aciduric microorganism that colonizes the oral cavity is recognized as the main causal agent of dental caries. Epidemiological studies have shown a strong correlation between the number of S. mutans in the oral cavity and prevalence and incidence of caries. At present, different genotypic and phenotypic methods are known to determine the profiles of settling and epidemiological distribution of S. mutans. The aim of this study was to investigate the profiles of S. mutans isolated from children with and without dental caries by using the AP-PCR (arbitrarily primed polymerase chain reaction) and api-Zym methods. In the AP-PCR method, random DNA segments of the target bacterium are amplified with single primers of arbitrary sequence. The api-Zym system (bioMerieux, Marcy-letoile, France) is a phenotypic micro-method that allows simultaneous detection of 19 enzymatic activities from bacterial inoculum. A transversal observational study was conducted, which finally included 120 3- to 5- year-old children (75 with and 45 without dental caries), who attended a preschool institution in Bogota (Colombia). S. mutans was isolated from 15 of the 45 children without dental caries (33.3%) and from 31 of the 75 children with caries (41.33%). In the 46 children, 69 S. mutans isolates were identified: 24 isolates in the 15 children without dental caries and 45 isolates in 31 children with dental caries. With api-Zym system, 36 different phenotypes were detected: 22 in the caries group and 15 in the caries-free group. The phenotype XX was present in both groups. With the AP-PCR method, 27 different fingerprinting profiles were identified: 22 for the caries group and 9 of the healthy group; the two groups of patients shared four of these genomic profiles. In conclusion, the information shows a great diversity in S. mutans genotypes and phenotypes in the population studied.

La caries dental es considerada una enfermedad infecciosa multifactorial que conlleva a la destruccion del tejido dental duro. Streptococcus mutans, un microorganismo acidogenico y acidurico que normalmente se encuentra colonizando la cavidad oral, es considerado el principal microorganismo asociado al desarrollo de esta enfermedad. Estudios epidemiologicos han mostrado una fuerte correlacion entre el numero de unidades formadoras de colonias de S. mutans en la cavidad oral y la prevalencia e incidencia de caries dental. El hecho de reconocer a S. mutans como el microorganismo cariogenico mas importante, ha conducido al diseno de medidas preventivas y de control tendientes a eliminarlo o reducir su presencia en la cavidad oral. En la actualidad se utilizan diferentes metodos fenotipicos y genotipicos para demostrar la heterogeneidad y variabilidad genetica de cepas S. mutans presentes en la cavidad oral. El objetivo de este estudio fue explorar la utilidad de la tecnica APPCR en el: 1. conocimiento del genotipo en aislamientos clinicos de S. mutans provenientes de ninos con y sin caries, y 2. en el establecimiento de diferencias en los perfiles de tipificacion en comparacion con la tecnica fenotipica Api-ZYM. En el metodo AP-PCR fragmentos del DNA de la bacteria son amplificados con primers simples que se anidan al azar. El sistema api-Zym es un micro-metodo semicuantitativo de investigacion que permite detectar rapida y simultaneamente 19 actividades enzimaticas a partir de pequenas cantidades de inoculo de la bacteria. En este estudio observacional descriptivo se incluyeron finalmente 120 ninos de 3 a 5 anos de un preescolar en Bogota (Colombia). Se encontro S. mutans en 15 de los 45 ninos sin caries dental (33.3%) y en 31 de los 75 ninos con caries (41.33%). En total se identificaron 69 aislamientos de S. mutans en los 46 ninos: 24 en los 15 ninos sin caries dental y 45 en los 31 ninos con caries dental. Con el sistema Api-Zym se determinaron 36 fenotipos: 22 en el grupo de caries y 15 en el grupo sin caries. Los dos grupos solamente presentaron en comun el fenotipo XX. Con el metodo AP-PCR se identificaron 27 perfiles, 22 en el grupo con caries y 9 en el grupo sin caries; ambos grupos de pacientes compartieron 4 perfiles genomicos. En conclusion, la informacion muestra una gran diversidad en perfiles de genotipos y fenotipos de S. mutans en la poblacion objeto de estudio, los cuales en algunos casos se complementan para establecer con claridad diferencias intra e inter-individuo.

Antagonistic action of indigenous Streptococcus mutans strains

Dental caries is an infectious process which ultimately destroys the tooth. Streptococcus mutans is considered to be the main agent causing this disease. If microorganisms with antagonistic action on S. mutans were found, they might provide a way of avoiding or controlling the disease. Within the framework of the Oral Microbial Ecology approach, the aim of this project was to identify S. mutans strains with antagonistic effect upon S. mutans. Saliva samples were taken from 66 children and cultured on Blood agar and Mitis Salivarius Bacitracin agar. They were incubated at 37oC in anaerobic atmosphere for 48 hours, after which bacteria were counted and biochemical tests performed on colonies compatible with S. mutans. Antagonistic effect was determined using the double layer in agar technique. In children without and with caries, the frequency of S. mutans was 91.7% and 96.7%, respectively. In the group of patients without caries, only two strains had no antagonistic action, and three strains had full antagonistic action (100%), while the rest showed different kinds of inhibitory action. In the group of patients with caries, only 5 strains had no antagonistic action, 32 strains had full antagonistic action (100%) and the rest had variable inhibitory action. To conclude, 112 S. mutans strains with high antagonistic potential were identified, which, after other requirements are fulfilled, could be used in caries prevention or control strategies.

La caries dental es un proceso infeccioso que termina en la destruccion del diente. Streptococcus mutans es considerado el principal agente causal de esta enfermedad. La busqueda de microorganismos con accion antagonica sobre S. mutans puede ser una alternativa con la cual se pueda evitar o controlar esta enfermedad. Este proyecto enmarcado dentro de la linea de Ecologia Microbiana Oral, tuvo como objetivo identificar cepas S. mutans con efecto antagonico. Se tomaron muestras de saliva en 66 ninos y se cultivaron en Agar Sangre y Agar Mitis Salivarius Bacitracina. Despues de la incubacion a 37oC en anaerobiosis durante 48 horas, se hizo el recuento bacteriano y las colonias compatibles con S. mutans fueron sometidas a pruebas bioquimicas. La determinacion del efecto antagonico se realizo utilizando la tecnica de doble capa en agar. En los ninos sin caries y con caries la frecuencia de S. mutans fue, respectivamente, 91.7% y 96.7%. En el grupo de pacientes sin caries solo dos cepas no tuvieron ninguna accion antagonica, tres cepas tuvieron accion antagonica completa (100%), y las restantes presentaron diferentes modalidades de inhibicion. En el grupo de pacientes con caries solo 5 cepas no tuvieron ninguna accion antagonica, 32 cepas tuvieron accion antagonica completa (100%) y las demas cepas tuvieron actividad inhibitoria variable. En conclusion, se identificaron 112 cepas S. mutans con gran potencial antagonico, las cuales despues de cumplir con otros requerimientos podrian ser utilizadas en estrategias de prevencion o control de la caries dental.

Bacteriocins in S. mutans strains isolated from children with and without dental caries: biotypes and sensitivity to antibiotics

El objetivo de este estudio fue determinar la producción debacteriocinas en cepas de Streptococcus mutans aisladas de niños preescolares con y sin caries dental. Con este fin en sedeterminó el índice ceod y se tomó saliva no estimulada en 53 niños con edades entre 3 y 5 años. Las muestras de saliva se cultivaron en Agar Mitis Salivarius Bacitracina para el aislamiento selectivo y recuento de S. mutans, y se incubaron en anaerobiosis durante 2 días a 37°C. Las cepas de S. mutans aisladas se biotipificaron con el sistema enzimático Api-ZYM (bioMérieux; Marcy-lE´toile, Francia). La detección de bacteriocinas se realizó de acuerdo a la técnica de doble capa enagar infusión cerebro corazón y las concentraciones mínimas inhibitorias de los aislamientos fueron evaluados contra la penicilina, amoxicilina, cefazolina, eritromicina, clindamicina,imipenem y vancomicina, por el método de dilución en agar. La experiencia de caries dental en esta población fue de 66 por ciento (35/53) y el índice ceod promedio fue de 3.2 (rango 2-6).S. mutans fue aislado en 33 de los 53 niños incluidos en el estudio (62 por ciento). Las 33 cepas de S. mutans aisladas se agruparon en 10 biotipos. Ocho (24 por ciento) de las 33 cepas evaluadas produjeron bacteriocinas, 6 de estas cepas provinieron de pacientescon caries y las otras dos de pacientes sin caries. Todos los 33 aislamientos de S. mutans fueron altamente sensibles a los antibacterianos evaluados.

Formacion de biocapas por Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium sobre cateteres intravasculares / Bacterial biofilm formation on surfaces of intravascular catheters

La formación de biocapas por bacterias en la superficie de los catéteres intravasculares es un evento muy importante en la patogénesis y evolución de infecciones asociadas con el uso de estos dispositivos médicos. Los objetivos de este estudio fueron desarrollar biocapas y evaluar los eventos de adhesión y colonización "in vitro " de Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium sobre catéteres intravasculares de teflón, poliuretano y vialón. Con este fin se utilizaron dos cepas, una de Enterococcus faecalis y una Enterococus faecium, en las que se determinó la susceptibilidad a antibióticos y la producción de P-lactamasas. Para la formación de biocapas se hicieron cortes de los catéteres y se pusieron en contacto con inocules independientes de 3 x IOS UFC/mI de Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium, y se incubaron a 37ºC durante diferentes tiempos. Los resultados muestran que las dos cepas objeto de estudio presentaron resistencia a ampicilina, baja resistencia a gentamicina y sensibilidad a vancomicina; además de ser productoras de P-lactamasas de amplio espectro. El Enterococcus faecalis se adhiere mucho mejor que Enterococcus faecium a los catéteres intravasculares evaluados en este estudio. La mejor adherencia y formación de biocapas tanto de Enterococcus faecalis como de Enterococcus faecium se dio sobre el catéter intravascular de teflón. En conclusión se sugiere que a la hora de escoger un catéter intravascular, deberá ser de material de vialón ya que en él es donde los dos enterococos se adhieren muy mal, lo que conduciría a una deficiente formación de biocapas que evitaría complicaciones como endocarditis