Presencia de marcadores de las vías de activación de los macrófagos en periodontitis crónica / Presence of markers of activation pathways of macrophages in chronic periodontitis

La periodontitis crónica es una patología infecciosa, causada por un complejo de especies bacterianas, que afecta principalmente los tejidos de inserción de los dientes. La respuesta inmune-inflamatoria producida se caracteriza por la presencia de un infiltrado inflamatorio, en el cual los macrófagos representan entre 5 al 30 por ciento. Es sabido que los macrófagos se activan mediante dos vías: Clásica y Alterna, caracterizadas por la presencia de marcadores indirectos: IFN-y e IL-6 para la vía clásica e IL-4 para la vía alterna, ampliamente abordados. Recientemente, se ha descrito a la subunidad A del factor XIII de la coagulación (FXIII-A) como un buen marcador de la vía alterna. El objetivo de este estudio consiste en determinar la presencia de IFN-y, IL-6, FXIII-A e IL-4 como marcadores de las vías de activación de los macrófagos, en pacientes con periodontitis crónica. Para tal efecto, se realizó inmunohistoquímica y Western-Blot para los cuatro marcadores junto a CD-68, marcador de macrófagos, en 18 biopsias de tejido periodontal sano y 18 con periodontitis crónica. Se detectó la presencia de IFN-y, IL-6, IL-4 y FXIII-A junto a CD68+, en todas las muestras de pacientes sanos y con periodontitis. Los resultados obtenidos sugieren que al estar presente IFN-y, IL-6, IL-4 y FXIII-A, los macrófagos se activarían a través de ambas vías, lo cual, produciría una respuesta tanto proinflamatoria (Th1) como antinflamatoria (Th2). Son necesarios más estudios para determinar si existe una vía preferencial de activación.

Periodontitis is a chronic infectious disease caused by a bacterial species complex, which affects mainly the insertion tissues of the teeth. The immune-inflammatory response produced is characterized by an inflammatory infiltrate in which macrophages represent between 5 to 30 percent. It is known and has been widely discussed that macrophages are activated in two ways: Classical and Alterna, characterized by the presence of indirect markers: IFN-y and IL-6 for the classical pathway and IL-4 for the alternative pathway. Recently the subunit A of the clotting factor XIII (FXIII-A) has been described as a good marker of the alternative pathway. The objective of this study is to determine the presence of IFN-y, IL-6, IL-4 and FXIII-A as markers of the macrophage activation pathways in patients with chronic periodontitis. To this end, we performed immunohistochemistry and Western blot for the four markers with CD68 macrophage marker, in 18 healthy periodontal tissue biopsies and 18 with chronic periodontitis. We detected the presence of IFN-y, IL-6, IL-4 and FXIII-A with CD68 +, in all samples of healthy patients and periodontitis. The results suggest that when present, IFN-y, IL-6, IL-4 and FXIII-A, activate macrophages through both routes, which would produce a proinflammatory response (Th1) as antiinflammatory (Th2). Further studies are necessary to determine whether there is a preferential pathway activation.

Asociación entre niveles de TNF-a en fluido crevicular gingival de dientes con periodontitis apical asintomática / Levels of TNF-a increase in gingival crevicular fluid of teeth with asymptomatic apical periodontitis

Introducción: Como consecuencia de necrosis pulpar séptica, el ingreso de productos bacterianos en el periápice induce la producción de citoquinas pro-inflamatorias como el Factor de Necrosis Tumoral (TNF)- a, que entre otras funciones participa en la diferenciación y activación de los osteoclastos para inducir reabsorción ósea, fenómeno característico de la periodontitis apical asintomática (PAA). El fluido crevicular gingival (FCG) ofrece un gran potencial como fuente de factores asociados con la actividad osteoclástica. El objetivo del presente estudio fue determinar los niveles de TNF- a en FCG de dientes con PAA y controles sanos contralaterales. Métodos: Se incluyeron 14 pacientes en la Clínica de Endodoncia de la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile con diagnóstico clínico de PAA y se obtuvieron muestras de FCG con tiras de papel a partir de los dientes afectados y sanos contralaterales por un periodo estandarizado de 30 segundos. Se determinaron las concentraciones de proteínas totales mediante el método del ácido bisciconitico y los niveles de TNF- a, mediante ensayo ELISA. Los datos se analizaron con Test-t pareado utilizando el programa StataV11. Resultados: Se detectaron niveles de TNF- a significativamente mayores en el FCG de dientes con PAA estandarizados, tanto por 30 segundos de toma de muestra como por mg de proteínas totales. Conclusiones: Este estudio provee evidencia preliminar de que los niveles de TNF- a en el FCG reflejan la presencia de PAA y podría ser de utilidad como complemento al diagnóstico clínico y monitoreo del estado de salud o enfermedad de los tejidos perirradiculares.

Introduction: As a consequence of septic pulp necrosis, the entry of bacterial products into periapical tissues induces the release of pro-inflammatory cytokines, such as the tumor necrosis factor (TNF)- a. This pleiotropic cytokine is involved in the differentiation and activation of osteoclasts to induce bone resorption, a hallmark of asymptomatic apical periodontitis (AAP). Gingival crevicular fluid (GCF) has a great potential as a source of factors associated with osteoclastic activity. The aim of this study was to determine the levels of TNF- a in GCF of teeth with PAA and contralateral healthy controls. Methods: A total of 14 patients with clinical diagnosis of AAP were enrolled from the Clinic of Endodontics, Faculty of Dentistry, Universidad de Chile during 2009 and 30-second GCF samples were obtained with paper strips from AAP teeth and contralateral healthy controls. Total protein concentration and TNF- a levels were determined through bisciconitic acid method and ELISA assay, respectively. Paired t test and StataV11 software were used for statistical analysis. Results: Levels of TNF- a were significantly higher in GCF from teeth with AAP than controls when standardized by either 30s of sampling and total protein content. Conclusions: The present study provides preliminary data supporting that TNF- a levels in GCF reflect periapical status. Screening of TNF- a levels in GCF might represent a useful side-diagnostic tool to the monitoring of the apical status.

Presencia de linfocitos T reguladores en periodontitis crónica / Presence of T regulatory cells in chronic periodontitis

La enfermedad periodontal requiere de un hospedero susceptible para su desarrollo y progresión. Dentro de las características del hospedero se encuentra la respuesta T reguladora, que otorga tolerancia frente a antígenos propios, participa durante las enfermedades infecciosas limitando el daño tisular, sin disminuir la respuesta antibacteriana. El presente estudio tiene por objetivo determinar la presencia, reclutamiento y función de Tregs en pacientes con periodontitis crónica. En 10 biopsias de tejido periodontal sano y con periodontits crónica se realizó inmunohistoquímica para marcadores (CD4, CD25, Foxp3), quimioquinas (CCL17, CCL22) y citoquinas (TGF-B, IL-10) de Tregs. Además de Western-Blot para detectar las citoquinas. Los resultados obtenidos sugieren una posible asociación entre células Tregs y la infección periodontal, ya que se confirma su reclutamiento y presencia. Sin embargo, son necesarios más estudios del posible desbalance con su contraparte pro-inflamatoria Th17, que expliquen en parte la compleja etiopatogenia de la enfermedad periodontal.

Periodontal disease requires a susceptible host to initiation, development and progression. T regulatory response is one of these inmunoregulatory characteristics of the susceptible host, which provide tolerance, tissular protection during infection without impairing the control of periodontopathogens. The aim of this study is to determinate the presence, homing and function of T regulatory cells (Tregs) in patients with chronic periodontitis. Ten biopsies were taken from pockets, the presence of Tregs markers (CD4, CD25, Foxp3), chemokines (CCL17, CCL22) and cytokines (TGF-p, IL-10) were determinate by immunohistochemistry. Cytokines also were detected with Western-Blot. Our results suggest a possible association between Tregs and periodontal infection, confirming homing and presence of Tregs. However, further studies are required to determine the possible imbalance with pro-inflammatory part Th17, that might explain the complex etiopathogenesis of periodontal disease.