Prevalencia de Bartonella henselae en donantes de sangre y riesgo de transmisión sanguínea en Chile / Prevalence of Bartonella henselae in blood donors and risk of blood transmission in Chile

Resumen Introducción: Bartonella henselae es el agente causal de la enfermedad del arañazo del gato en personas inmunocompetentes y de la angiomatosis bacilar y peliosis hepatis en inmunocomprometidos. En Chile la prevalencia de anticuerpos contra B. henselae en niños y adolescentes sanos es de 13,3%, en personas con riesgo ocupacional 60,5% y en gatos 85,6%. No existen datos publicados respecto de la seroprevalencia en donantes de sangre en nuestro país, por lo que determinar si B. henselae se encuentra presente en la sangre de los donantes al momento de la donación es muy importante, ya que este microorganismo puede sobrevivir hasta 35 días en los eritrocitos almacenados en banco de sangre a 4 °C. Objetivo: Determinar la prevalencia de B. henselae en donantes de sangre. Metodología: Se analizaron 140 muestras de sangre de donantes, para detectar la presencia de B. henselae, utilizando la técnica de la reacción de polimerasa en cadena (RPC). Resultados: Se obtuvo 13,6% de los donantes de sangre con RPC positiva para la B. henselae. La secuencia de los fragmentos amplificados presentó una identidad por sobre 98% con respecto a secuencias de B. henselae de referencia. Conclusión: El riesgo de transmisión sanguínea debiera ser considerado en un país con alta seroprevalencia de infección por B. henselae.

Background: Bartonella henselae is the causal agent of cat scratch disease in immunocompetent persons and bacterial angiomatosis in immunocompromised patients. In Chile, the prevalence of antibodies against B. henselae in healthy children and adolescents is 13.3%, in persons with occupational risk 60.5%, and in cats 85.6%. There are no published data regarding the seroprevalence in blood donors in our country, so determining if B. henselae is present in the blood of donors at the time of donation is very important, since this microorganism can survive up to 35 days in the red blood cells stored in a blood bank at 4 °C. Objective: To determine the prevalence of B. henselae in blood donors. Methodology: 140 donor blood samples were analyzed to detect the presence of B. henselae, using the polymerase chain reaction technique. Results: 13.6% of the blood donors with positive polymerase chain reaction for B. henselae were obtained. The sequence of the amplified fragments showed an identity of over 98% with respect to B. henselae reference sequences. Conclusion: The risk of blood transmission is due to a country with high B. henselae infection.

Evaluación de la técnica Xpert® MTB/RIF para la detección de Mycobacterium tuberculosis complex en muestras extra-pulmonares / Evaluation of Xpert® MTB/RIF technique for Mycobacterium tuberculosis complex detection in extra-respiratory specimens

Resumen La tuberculosis (TBC) extra-pulmonar alcanza al 26,2% de los casos totales de TBC en Chile. El cultivo es el método estándar de oro, pero es lento. La técnica Xpert® MTB/RIF permite detectar Mycobacterium tuberculosis complex (MTBc) por RPC en tiempo real en menos de 3 h, sin embargo, ha sido validada sólo para muestras respiratorias. El objetivo de este estudio fue determinar la utilidad de la prueba Xpert® MTB/RIF en la detección de MTBc en muestras extra-pulmonares en comparación con un estándar de oro combinado consistente en un cultivo de micobacterias positivo (medio sólido y líquido) y/o un método molecular validado positivo (q-RPC, Cobas® TaqMan-MTB). Se analizaron 50 muestras extra-pulmonares, de las cuales 25 fueron definidas positivas y 25 negativas para MTBc en base a estándar de oro combinado. Las 25 muestras definidas positivas tuvieron un resultado positivo por Xpert® MTB/RIF; de las 25 muestras definidas negativas, 24 tuvieron un resultado negativo y una de ellas un resultado positivo. Se obtuvo una concordancia global entre Xpert® MTB/RIF y el estándar de oro combinado de 98%. La prueba Xpert® MTB/RIF fue capaz de detectar 12 casos de TBC extra-pulmonar con baciloscopia negativa y 3 casos con cultivo negativo. El método Xpert® MTB/RIF ha demostrado tener una sensibilidad similar al q-RPC para detectar MTBc en muestras extra-pulmonares y permite reducir sustancialmente el tiempo de diagnóstico.

Extra-pulmonary tuberculosis (TB) represents the 26.2% of total TB cases in Chile. Culture is the gold standard method, but the process is extremely slow. Xpert®MTB/RIF technique detects Mycobacterium tuberculosis complex (MTBc) through real time PCR in less than 3 h. However, it has been validated only for respiratory specimens. We aimed to determine the performance of Xpert®MTB/RIF test in detecting MTBc in extra-respiratory specimens compared with a combined gold standard consisting in a positive (liquid and solid) mycobacterial culture and/or a positive validated molecular method (q-RPC, Cobas®TaqMan®-MTB). Fifty extra-respiratory specimens were analyzed, from which 25 were positive and 25 negative for MTBc based on the combined gold standard. The 25 positive specimens had a positive result by Xpert®MTB/RIF; from the 25 negative specimens, 24 had a negative result and one had a positive result. We obtained an overall concordance of 98% between Xpert®MTB/RIF and the combined gold standard. Xpert®MTB/RIF test was able to detect 12 smear-negative specimens and 3 culture-negative specimens, all of them corresponding to extra-pulmonary TB cases. Xpert®MTB/RIF showed similar sensitivity to q-RPC in detecting MTBc in extra-respiratory specimens. This procedure allowed a substantial reduction in the time of diagnosis.

Presencia de Bordetella holmesii en brote epidémico de coqueluche en Chile / Presence of Bordetella holmesii in an outbreak of pertussis in Chile

The incidence of whooping cough in Chile ranges from 4.1 and 7.5 per hundred thousand inhabitants. B. pertussis detection is performed by Real Time PCR (Q-PCR) directed to the insertion sequence IS481. However, this sequence is also found in the genome of B. bronchiseptica and B. holmesii. The latter is also a respiratory pathogen whose clinical features are similar to B. pertussis. However, it is important to differentiate between these species because in immunosuppressed patients B. holmesii is more likely to cause bacteremia and is less susceptible to erythromycin. The goal of this work is to measure prospectively and retrospectively the presence of B. holmesii in samples reported positive for B. pertussis in the period 2010-2011. During this period, 1994 nasopharyngeal specimens entered the laboratory for Bordetella sp. PCR, of which 224 were positive. The analysis by Q-PCR directed to the recA gene of B. holmesii of all 224 positive samples determined a prevalence of B. holmesii of 0.6% (12/1994). Because of its more aggressive behavior in immunosupressed patients and its different resistance pattern, routine screening of B. pertussis and B. holmesii is currently performed for all samples in which Bordetella sp PCR is initially detected.

La incidencia de coqueluche en Chile varía entre 4,1 y 7,5 por 100.000 habitantes. La detección de Bordetella pertussis se realiza por RPC-tiempo real (Q-RPC) dirigida a la secuencia de inserción IS481. Sin embargo, esta secuencia se encuentra también en el genoma de B. bronchiseptica y B. holmesii. Este último es también un patógeno respiratorio que produce un cuadro similar a B. pertussis. Sin embargo, es importante diferenciar entre estas especies porque en pacientes inmunosuprimidos B. holmesii tiene mayor tendencia a causar bacteriemia y además es menos susceptible a eritromicina. El objetivo de este trabajo es determinar, prospectiva y retrospectivamente, la presencia de B. holmesii en muestras informadas positivas para B. pertussis en el período 2010-2011. Durante ese período ingresaron al laboratorio 1. 994 muestras de hisopado nasofaríngeo para RPC de Bordetella sp., de las cuales 224 fueron positivas. El análisis por Q-RPC dirigido al gen recA de B. holmesii de las 224 muestras positivas determinó una prevalencia de B. holmesii de 0,6% (12/1994). Debido al comportamiento más agresivo en inmunosuprimidos y al patrón de resistencia de B. holmesi, se decide incorporar la detección de rutina de B. pertussis y B. holmesii en todas las muestras en que se detecta inicialmente la presencia de Bordetella sp.

Impacto de la espectrometría de masas por MALDI-TOF MS en la identificación rápida de bacterias aeróbicas y anaeróbicas de importancia clínica / Impact of mass spectrometry by MALDI-TOF MS for the rapid identification of aerobic and anaerobic bacteria of clinical importance

Background: MALDI-TOF MS (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization -Time of Flight Mass Spectrometry) technology, recently introduced in the microbiology laboratory has proven to be a precise and rapid method for bacterial identification. Objective: To evaluate the performance, costs associated and turnaround time of MALDI-TOF in a routine laboratory. Material and Method: Five hundred and sixty one clinical isolates (281 aerobes and 280 anaerobes) previously identified by conventional methods were evaluated. Discordances were resolved by means of 16S rRNA sequencing. Results: MALDI-TOF identified 95, 7% of the aerobes isolates and 86, 4% of the anaerobes. The groups with better performance were the enterobacteriacea and Bacteroides spp with 95% and 100% identification at the species level. The error rate of MALDI-TOF and conventional methods compared to sequencing was 0, 39% and 9, 4% respectively. The costs associated were 8 times lower with a turnaround time of 6 hours. Conclusion: MALDI-TOF proved to be simple, precise and less expensive technology compared to the traditional methods.

Introducción: La tecnología MALDI-TOF MS (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry) incorporada recientemente en el laboratorio de microbiología ha demostrando ser un método rápido y preciso para la identificación bacteriana. Objetivo: Evaluar el desempeño de MALDI-TOF para la identificación de aislados clínicos, comparar los costos asociados y el tiempo en la entrega de resultados en un laboratorio de rutina. Material y Método: Se evaluaron un total de 561 aislados de pacientes (281 aeróbicos y 280 anaeróbicos estrictos) identificados previamente por métodos convencionales, los que fueron identificados por MALDI-TOF. Las discordancias fueron resueltas mediante secuenciación del 16S ARNr. Resultados: MALDI-TOF identificó adecuadamente a 95,7% de los aislados aeróbi-cos y 86,4% de los anaeróbicos estrictos, observándose el mayor porcentajes de identificación a nivel de especie en los grupos de enterobacterias y Bacteroides spp (95 y 100% respectivamente). La tasa de error de MALDI-TOF y métodos convencionales vs secuenciación fue de 0,39 y 9,4%, respectivamente. El costo asociado por identificación fue ocho veces menor que el de los métodos tradicionales con una demora promedio de seis horas en la entrega de resultados. Conclusión: MALDI-TOF mostró ser una tecnología simple, precisa y de menor costo que los métodos tradicionales.