Establecimiento de un material de referencia de trabajo para interleucina-2 recombinante / Establishment of a working reference material for recombinant interleukin-2

La interleucina-2 es una glicoproteína humana de 133 aminoácidos que resulta vital para obtener una respuesta inmunológica efectiva. En el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología ha podido obtenerse por vía recombinante a partir de una cepa de Escherichia coli. Para el control de la calidad de cada lote producido se hizo necesaria la elaboración de un material de referencia de trabajo. En esta publicación se describen los pasos seguidos en la obtención del lote candidato y la preparación del material de referencia como tal. Se demostró que el patrón de trabajo preparado es homogéneo para el uso en las técnicas analíticas de control de calidad de la interleucina-2 y se predijo una pérdida de actividad inferior al 5 por ciento anual mediante un estudio de estabilidad acelerada. Se obtuvieron valores adecuados para la pureza del material de referencia, evaluada por electroforesis y para la actividad biológica, que se estableció con trazabilidad al material de referencia internacional para este producto

Expresión de receptores para el interferon alfa en lineas celulares procedentes de tumores humanos: relación con el efecto antiproliferativo / Alpha interferon (IFN) membrane receptor expresion was studied in human tumor cell lines

Se analizó la expresión de receptores de membrana para el interferón (IFN) alfa en cuatro líneas celulares procedentes de tumores humanos de diferentes orígenes como linfoma de Burkitt (células Daudi), adenocarcinoma de cervix (células HeLa), carcinoma de laringe (células HEp-2) y glioblastoma grado III-IV (células GL-5). El número de receptores expresados por células en cada caso no fue indicativo de la sensibilidad al efecto citostático del IFN alfa-2b. Sin embargo, el análisis de la afinidad del complejo IFN receptor según el procedimiento de Scatchard, mostró una correspondencia con dicho efecto. Las células Daudi, que expresaron alrededor de 1927 receptores por células con una alta afinidad (Kd=3.30x10-10M) resultaron ser las células sensibles al efecto antiproliferativo del IFN alfa-2b observándose una inhbición del crecimiento celular de alrededor del 30 por ciento en presencia de solamente 1.6pg/ml de la sustancia. Las células HeLa, que expresaron una mezcla de receptores de alta (Kd=3.36x10-10M) y de baja afinidad (Kd=3.21x10-9M) también fueron sensibles al efecto antiproliferatico del IFN alfa-2b aunque en un menor grado cuando se comparó con el observado en células Daudi. En cambio, las células HEp-2 y GL-5 mostraron una sensibilidad muy limitada al efecto del IFN alfa-2b y expresaron receptores de afinidad baja (Kd=1.20x10-8M y KD=8.33x10-9M respectivamente). Por otra parte, losensayos de unión del IFN alfa-2b a linfocitos de sangre periferica de ocho individuos sanos arrojó un valor promedio de 433ñ166 receptores por célula y una Kd=3.68 2.66x10-10M, los cuales fueron usados como referencia de unión de este IFN a células normales y altamente diferenciadas. Estos resultados apoyan evidencias experimentales anteriores las cuales demuestran que la presencia del receptor de IFN per se no es predictivo en cuanto a sensibilidad a determinados efectos biológicos del mismo mientras que otros parámetros como la afinidad del complejo IFN-receptor si pudiera aportar algún valor pronóstico en cuanto a la sensibilidad al efecto citostático del IFN.