Gene expression of Paracoccidioides virulence factors after interaction with macrophages and fibroblasts

BACKGROUND Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis with high prevalence in Latin America that is caused by thermodimorphic fungal species of the Paracoccidioides genus. OBJECTIVES In this study, we used quantitative polymerase chain reaction (qPCR) to investigate the expression of genes related to the virulence of Paracoccidioides brasiliensis (Pb18) and P. lutzii (Pb01) strains in their mycelial (M) and yeast (Y) forms after contact with alveolar macrophages (AMJ2-C11 cell line) and fibroblasts (MRC-5 cell line). METHODS The selected genes were those coding for 43 kDa glycoprotein (gp43), enolase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), 14-3-3 protein (30 kDa), phospholipase, and aspartyl protease. FINDINGS In the Pb18 M form, the aspartyl protease gene showed the highest expression among all genes tested, both before and after infection of host cells. In the Pb18 Y form after macrophage infection, the 14-3-3 gene showed the highest expression among all genes tested, followed by the phospholipase and gp43 genes, and their expression was 50-fold, 10-fold, and 6-fold higher, respectively, than that in the M form. After fibroblast infection with the Pb18 Y form, the 14-3-3 gene showed the highest expression, followed by the phospholipase and aspartyl protease genes, and their expression was 25-fold, 10-fold, and 10-fold higher, respectively, than that in the M form. Enolase and aspartyl protease genes were expressed upon infection of both cell lines. After macrophage infection with the Pb01 Y form, the 14-3-3 gene showed the highest expression, followed by the phospholipase and aspartyl protease genes, and their expression was 18-fold, 12.5-fold, and 6-fold higher, respectively, than that in the M form. MAIN CONCLUSIONS In conclusion, the data show that the expression of the genes analysed may be upregulated upon fungus-host interaction. Therefore, these genes may be involved in the pathogenesis of paracoccidioidomycosis.

Fungal-host interactions: insights into microRNA in response to Paracoccidioides species

BACKGROUND Paracoccidioides spp. causes paracoccidioidomycosis (PCM), an important and frequent systemic mycosis that occurs in Latin America. The infectious process begins with contact between the fungus and lung cells, and the molecular pattern of this interaction is currently poorly understood. MicroRNAs (miRNAs) are small non-coding RNAs that regulate the gene expression in many biological processes, including in the infections. OBJECTIVE This study aimed to analyse the expression of miRNAs in lung cells as response to infection by Paracoccidioides spp. METHODS A quantitative real-time polymerase chain reaction (RT-qPCR) based screening was employed to verify differentially expressed miRNAs in human lung cells infected with three different species; Paracoccidioides lutzii, Paracoccidioides americana, and Paracoccidioides brasiliensis. Furthermore, the in silico predictions of target genes and pathways for miRNAs were obtained. FINDINGS The results showed that miRNAs identified in the lung cells were different according to the species studied. However, based on the predicted targets, the potential signaling pathways regulated by miRNAs are common and related to adhesion, actin cytoskeleton rearrangement, apoptosis, and immune response mediated by T cells and TGF-β. MAIN CONCLUSIONS In summary, this study showed the miRNAs pattern of epithelial cells in response to infection by Paracoccidioides species and the potential role of these molecules in the regulation of key pathogenesis mechanisms of PCM.

Essential oils and major compounds of Hedychium coronarium Koenig (Zingiberaceae) against pathogenic yeast of Candida and Cryptococcus genus / Óleos essenciais e compostos majoritários de Hedychium coronarium Koenig (Zingiberaceae) contra leveduras patogênicas dos gêneros Candida e Cryptococcus

Among the major causative agents of invasive fungal infections stands out the opportunistic yeasts of Candida and Cryptococcus. Regarding the problem of the high incidence of infections by these agents and the difculty of treating the low stockpile of antifungal drugs and the high toxicity of most therapies, the search for new antifungal compounds has been highlighted in recent decades. Hedychium coronarium, popularly known as "lírio-do-brejo" or "gengibre-branco" features several previously reported biological activities, including antimicrobial activity. Compound 1.8-cineole is the major compound in essential oil extracted from roots of H. coronarium, while caryophyllene oxide presents itself as the major in essential oil extracted from leaves of this plant. Our data show strong antifungal activity of compounds, against species of Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida krusei, Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii, with minimal inhibitory concentration and minimal fungicidal concentration equal to 0.2 % (v/v) for essential oil extracted from roots, while the essential oil extracted from leaves showed no activity against yeasts. The caryophyllene oxide showed higher antifungal activity for Cryptococcus spp. Thus, our results showed that the essential oil of rhizome is a promising antifungal agent against pathogenic yeasts.(AU)

Candida spp e Cryptococcus spp estão classifcadas entre os maiores causadores de infecções fúngicas invasivas em pacientes imunocomprometidos. Diante a alta incidência destas infecções por estes agentes e a difculdade do sucesso no tratamento, decorrente do baixo arsenal de fármacos antifúngicos e da alta toxicidade presente na maioria dos esquemas terapêuticos, a busca por novos compostos antifúngicos tem sido alvo de diversos estudos nas últimas décadas. Hedychium coronarium, popularmente conhecido como "lírio-do-brejo" ou "gengibre-branco", apresenta diversas atividades biológicas já descritas, entre elas a atividade antimicrobiana. O composto 1.8-Cineol é o composto majoritário presente no óleo essencial extraído de raízes de H. coronarium e o composto óxido de cariofleno é o composto majoritário extraído das folhas desta planta. Nossos resultados mostram que os compostos extraídos de H. coronarium apresentam forte atividade contra Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida krusei, Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, com valores de concentração inibitória minima e concentração fungicida minima igual a 0,2 % (v/v) para o óleo essencial extraído das raízes, enquanto que o óleo essencial extraído das folhas, não mostrou atividade contras as leveduras. O composto óxido de cariofleno mostrou maior atividade antifúngica para Crytopcoccus spp. Assim, nossos dados mostraram que o óleo essencial extraído das raízes de H. coronarium, é um agente antifúngico promissor contra leveduras patogênicas.(AU)

Influence of the Paracoccidioides brasiliensis 14-3-3 and gp43 proteins on the induction of apoptosis in A549 epithelial cells

The fungal strain Paracoccidioides brasiliensis remains viable inside of epithelial cells and can induce apoptosis in this population. However, until now, the molecules that participate in this process remained unknown. Thus, this study evaluated the contribution of two P. brasiliensis molecules, the 14-3-3 and glycoprotein of 43 kDa proteins, which had been previously described as extracellular matrix adhesins and apoptosis inductors in human pneumocytes. Accordingly, epithelial cells were treated with these molecules for different periods of time and the expression of the apoptosis regulating-proteins Bak, Bax, Bcl-2, p53 and caspases were evaluated by terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labelling, flow cytometry and real-time polymerase chain reaction analysis. Our results demonstrated that treatment with these molecules induces apoptosis signalling in pulmonary epithelial cells, showing the same pattern of programmed cell-death as that observed during infection with P. brasiliensis. Thus, we could conclude that P. brasiliensis uses these molecules as virulence factors that participate not only in the fungal adhesion process to host cells, but also in other important cellular mechanisms such as apoptosis.

Environmental isolation, biochemical identification, and antifungal drug susceptibility of Cryptococcus species

Introduction The incidence of opportunistic fungal infections has increased in recent years and is considered an important public health problem. Among systemic and opportunistic mycoses, cryptococcosis is distinguished by its clinical importance due to the increased risk of infection in individuals infected by human immunodeficiency virus. Methods To determine the occurrence of pathogenic Cryptococcus in pigeon excrement in the City of Araraquara, samples were collected from nine environments, including state and municipal schools, abandoned buildings, parks, and a hospital. The isolates were identified using classical tests, and susceptibility testing for the antifungal drugs (fluconazole, itraconazole, voriconazole, and amphotericin B) independently was also performed. After collection, the excrement samples were plated on Niger agar and incubated at room temperature. Results A total of 87 bird dropping samples were collected, and 66.6% were positive for the genus Cryptococcus. The following species were identified: Cryptococcus neoformans (17.2%), Cryptococcus gattii (5.2%), Cryptococcus ater (3.5%), Cryptococcus laurentti (1.7%), and Cryptococcus luteolus (1.7%). A total of 70.7% of the isolates were not identified to the species level and are referred to as Cryptococcus spp. throughout the manuscript. Conclusions Although none of the isolates demonstrated resistance to antifungal drugs, the identification of infested areas, the proper control of birds, and the disinfection of these environments are essential for the epidemiological control of cryptococcosis. .

Anti dermatophytic therapy: prospects for the discovery of new drugs from natural products

Millions of people and animals suffer from superficial infections caused by a group of highly specialized filamentous fungi, the dermatophytes, which only infect keratinized structures. With the appearance of AIDS, the incidence of dermatophytosis has increased. Current drug therapy used for these infections is often toxic, long-term, and expensive and has limited effectiveness; therefore, the discovery of new anti dermatophytic compounds is a necessity. Natural products have been the most productive source for new drug development. This paper provides a brief review of the current literature regarding the presence of dermatophytes in immunocompromised patients, drug resistance to conventional treatments and new anti dermatophytic treatments.

Candida parapsilosis complex water isolates from a haemodialysis unit: biofilm production and in vitro evaluation of the use of clinical antifungals

Candida parapsilosis, currently divided into three distinct species, proliferates in glucose-rich solutions and has been associated with infections resulting from the use of medical devices made of plastic, an environment common in dialysis centres. The aims of this study were (i) to screen for Candida orthopsilosis and Candida metapsilosis (100 environmental isolates previously identified as C. parapsilosis), (ii) to test the ability of these isolates to form biofilm and (iii) to investigate the in vitro susceptibility of Candida spp biofilms to the antifungal agents, fluconazole (FLC) and amphotericin B (AMB). Isolates were obtained from a hydraulic circuit collected from a haemodialysis unit. Based on molecular criteria, 47 strains were re-identified as C. orthopsilosis and 53 as C. parapsilosis. Analyses using a formazan salt reduction assay and total viable count, together with microscopy studies, revealed that 72 strains were able to form biofilm that was structurally similar, but with minor differences in morphology. A microtitre-based colorimetric assay used to test the susceptibility of fungal biofilms to AMB and FLC demonstrated that the C. parapsilosis complex displayed an increased resistance to these antifungal agents. The results from these analyses may provide a basis for implementing quality controls and monitoring to ensure the microbiological purity of dialysis water, including the presence of yeast.

Antimicrobial activity of Pterogyne nitens Tul., Fabaceae, against opportunistic fungi / Atividade antimicrobiana de Pterogyne nitens Tul., Fabaceae, contra fungos oportunistas

As part of our ongoing research on antifungal agents from Brazilian flora, eight extracts and twelve fractions from Pterogyne nitens Tul., Fabaceae, were screened for antimicrobial activity against four opportunistic fungi species (Candida albicans, Candida krusei, Candida parapsilosis and Cryptococcus neoformans) using a broth microdilution method. The present investigation reveals that P. nitens extracts and fractions were more effective against C. krusei and C. parapsilosis than against C. neoformans. The growth of C. albicans was moderately affected by all tested extracts and fractions. The strongest effects were observed for n-butanol fractions from branches (MIC = 15.6 μg/mL) and roots (MIC = 31.2 μg/mL) against C. krusei. Additionally, the chromatographic fractionation of the n-butanol fraction from branches afforded four guanidine alkaloids; N-1,N-2,N-3-triisopentenylguanidine (1), described for the first time in the Fabaceae family, and nitensidines A-C (2-4), which showed moderate activity towards C. krusei (MIC = 62.5 μg/mL) and C. parapsilosis (MIC = 31.2 μg/mL).

No contexto de nossas pesquisas por novos agentes antifúngicos obtidos da flora brasileira, oito extratos e doze frações de Pterogyne nitens Tul., Fabaceae, foram submetidos ao ensaio antifúngico pelo método de microdiluição, contra quatro espécies de fungos oportunistas, Candida albicans, Candida krusei, Candida parapsilosis e Cryptococcus neoformans. Este trabalho revelou que os extratos e frações de P. nitens foram mais ativos contra C. krusei e C. parapsilosis quando comparados a C. neoformans, sendo que o crescimento de C. albicans foi moderadamente afetado por todos os extratos e frações. As atividades mais potentes foram observadas para as frações n-butanólica dos galhos (CIM = 15,6 μg/mL) e raízes (CIM = 31,2 μg/mL) contra C. krusei. Adicionalmente, a fração n-butanólica dos galhos foi submetida ao fracionamento cromatográfico, resultando no isolamento de quatro alcaloides guanidínicos, sendo N-1,N-2,N-3-tri-isopentenilguanidina (1), descrito pela primeira vez em espécies da família Fabaceae e nitensidinas A-C (2-4), os quais apresentaram atividade antifúngica moderada contra C. krusei (CIM = 62,5 μg/mL) e C. parapsilosis (CIM = 31,2 μg/mL).

Induction of apoptosis in A549 pulmonary cells by two Paracoccidioides brasiliensis samples

Paracoccidioidomycosis presents a variety of clinical manifestations and Paracoccidioides brasiliensis can reach many tissues, most importantly the lungs. The ability of the pathogen to interact with host surface structures is essential to its virulence. The interaction between P. brasiliensis and epithelial cells has been studied, with particular emphasis on the induction of apoptosis. To investigate the expression of different apoptosis-inducing pathways in human A549 cells, we infected these cells with P. brasiliensis Pb18SP (subcultured) and 18R (recently isolated from cell culture and showing a high adhesion pattern) samples in vitro. The expressions of Bcl-2, Bak and caspase 3 were analysed by flow cytometry and DNA fragmentation using the TUNEL technique. Apoptosis of human A549 cells was induced by P. brasiliensis in a sample and time-dependent manner. Using an in vitro model, our data demonstrates that caspase 3, Bak, Bcl-2 and DNA fragmentation mediate P. brasiliensis-induced apoptosis in A549 cells. The overall mechanism is a complex process, which may involve several signal transduction pathways. These findings could partially explain the efficient behaviour of this fungus in promoting tissue infection and/or blood dissemination.

Genetic diversity and antifungal susceptibility testing of Trichosporon asahii isolated of Intensive Care Units patients / Diversidade genética e suscetibilidade a antifúngicos de Trichosporon asahii isolado de pacientes de Unidades de Terapia Intensiva

Trichosporon asahii is an opportunistic pathogen, associated with a high mortality rate in immunocompromised patients. In this study, ten isolates, recovered from oral cavity and urine of patients in Intensive Care Units (ICU) over six months, were identified by classical and molecular methods, typed by RAPD and tested in vitro for susceptibility to fluconazole, itraconazole, 5-flucytosine and amphotericin B. A total agreement between the identification of Trichosporon sp by PCR based on sequences of the Internal Transcribed Spacer Regions (ITS) and on the sequences of small-subunit (SSU) ribosomal DNA (rDNA) was found. Randomly amplified of polymorphic DNA (RAPD), with primers P6 and M13, was used to determine the genomic profiles. The dendogram analysis indicated that almost all strains showed similarity >0.9 among them and all strains were multidrug-resistant. This study brings new results on the identification and genotyping of T. asahii isolated from Brazilian ICU patients and information about their antifungal drugs susceptibility.

Trichosporon asahii é um patógeno oportunista que apresenta altos índices de mortalidade em pacientes imunocomprometidos. No presente trabalho, dez cepas foram isoladas da cavidade bucal e urina de pacientes internados na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) por seis meses. Todos os isolados foram identificados por métodos clássicos e moleculares, tipados por RAPD e testados in vitro quanto à sensibilidade ao fluconazol, itraconazol, 5-fluorocitosina e anfotericina B. Houve concordância total entre a identificação de Trichosporon sp por PCR baseado na seqüência da região ITS (Internal Transcribed Spacer) e na seqüência da subunidade menor do DNA ribossômico (rDNA). Os perfis genéticos foram determinados por RAPD utilizando dois iniciadores P6 e M13. A análise do dendrograma mostrou que a maioria das amostras apresentou alta similaridade entre elas (>0.9) e todas foram multidrogas resistentes. Este estudo traz novos resultados em relação à identificação e genotipagem de isolados brasileiros de T. asahii em pacientes internados em UTI, bem como dados sobre o perfil de sensibilidade aos antifúngicos.

Estudo de colonização por Candida sp. na cavidade oral de indivíduos soropositivos e soronegativos para HIV-1 no Noroeste Paulista, Brasil / Candida sp. in the oral cavities of HIV-1 serum positive and serum negative individuals from the Northeastern São Paulo State region, Brazil

Este estudo avaliou Candida sp. isolada da mucosa orofaríngea e sua sensibilidade antifúngica em 52 portadores do HIV/Aids, residentes na Região Noroeste Paulista e respectivos controles. Para tanto, foram utilizados testes clássicos, o “kit” API20IDAUX e a disco difusão para: anfotericina B, fluconazol, itraconazol e cetoconazol. O isolamento de Candida sp. foi maior (p < 0,05) em pacientes e controles, sendo o índice de colonização/infecção superior entre usuários de próteses dentárias, em ambos os grupos (p < 0,05). A freqüência de espécies “não-albicans” não diferiu (21%) nesses grupos. Todas as cepas obtidas foram sensíveis a anfotericina B, enquanto uma cepa de C. albicans foi resistente a todos os azóis. Treze por cento das cepas foram resistentes ao fluconazol, em ambos os grupos. Nossos resultados mostram que o grupo HIV/Aids é mais colonizado por Candida sp. que os soronegativos para este vírus, sem mudança na proporção Candida albicans/“não-albicans” ou no perfil de resistência aos azóis.

Genotyping, serotyping and determination of mating-type of Cryptococcus neoformans clinical isolates from São Paulo State, Brazil

The basidiomycetous yeast Cryptococcus neoformans is an important fungal pathogen mainly in immunocompromised patients. In this study, 47 clinical isolates of C. neoformans from regions of São Paulo State were studied serologically by using the Crypto Check Iatron RM 304-K kit, their genetic diversity was estimated by PCR-fingerprinting with a microsatellite-specific sequence (GACA)4, RAPD with primer 6 (Amersham Pharmacia Biotech), PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of the phospholipase B gene (PLB1) digested with AvaI and mating type analysis by PCR. All 47 strains isolated from HIV positive patients included in this study were serotype A and MATalpha. The majority of the isolates (45/47) were VNI and only two were VNII by PCR-fingerprinting and PCR-RFLP analysis. High degree of homogeneity was observed when (GACA)4 was used, being highly correlated (> 0.9). In contrast, the RAPD analysis was more heterogeneous with higher number of molecular profiles. By PCR-RFLP, no new molecular type was found, enhancing the suggestion that the differences based on conserved gene as PLB1, can be resultant of ongoing divergent evolution within the C. neoformans complex, into the current eight subtypes. Our results furnish new information on the molecular epidemiology of C. neoformans in the southeast region of Brazil.

Cryptococcus neoformans, pertencente à classe dos basidiomicetos, é um importante patógeno, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Neste estudo, 47 isolados clínicos de C. neoformans de várias regiões do Estado de São Paulo foram avaliados quanto aos sorotipos e ao mating-type por PCR. A diversidade genética foi analisada por PCR-fingerprinting com a seqüência iniciadora específica para regiões microssatélite (GACA)4, RAPD com o iniciador 6 (Amersham Pharmacia Biotech) e por RFLP do gene PLB1 digerido com AvaI. Todos os isolados foram obtidos de pacientes HIV positivos e identificados como sorotipo A e MATalfa. A maioria dos isolados pertencia ao tipo molecular VNI (45/47) e apenas dois foram VNII quando analisados por PCR-fingerprinting e PCR-RFLP. Homogeneidade alta foi obtida com o iniciador (GACA)4, com a maioria dos isolados apresentando correlação alta (> 0.9). Os resultados do RAPD, por sua vez, revelaram maior heterogeneidade com número maior de perfis moleculares. Por PCR-RFLP, nenhum tipo molecular novo foi encontrado, realçando a idéia de que em genes conservados como PLB1, as diferenças podem ser resultantes de divergências evolutivas dentro do complexo C. neoformans, separando os isolados nos oito subtipos moleculares já estabelecidos. Nossos resultados fornecem novas informações sobre a epidemiologia molecular de C. neoformans na região sudeste do Brasil.

Monitoramento de fungos anemófilos e de leveduras em unidade hospitalar / Monitoring of airborne fungus and yeast species in a hospital unit

OBJETIVO: Monitorar e caracterizar fungos anemófilos e leveduras de fontes bióticas e abióticas de uma unidade hospitalar. MÉTODOS: As coletas foram realizadas mensalmente e em dois períodos, do centro cirúrgico e unidades de terapia intensiva adulto e neonatal em hospital de Araraquara, Estado de São Paulo. Para coleta de fungos anemófilos foi utilizado amostrador tipo Andersen de simples estágio. A pesquisa de leveduras foi feita das mãos e de orofaringe de profissionais de saúde, bem como de superfícies de leitos e de maçanetas das áreas críticas. RESULTADOS: Foram recuperados do centro cirúrgico 32 gêneros de fungos anemófilos e 31 das unidades de terapia intensiva. Os gêneros mais freqüentemente isolados foram Cladophialophora spp., Fusarium spp., Penicillium spp., Chrysosporium spp. e Aspergillus spp. Durante o período de estudo, houve reforma e implantação de uma unidade dentro do hospital, que coincidiu com o aumento na contagem de colônias de Cladophialophora spp., Aspergillus spp. e Fusarium spp. Leveduras foram encontradas em 39,4 por cento dos profissionais de saúde (16,7 por cento das amostras dos espaços interdigitais, 12,1 por cento do leito subungueal e 10,6 por cento da orofaringe) e, em 44 por cento das amostras do mobiliário, com predomínio do gênero Candida (C. albicans, C. guilliermondii, C. parapsilosis e C. lusitaniae) seguido por Trichosporon spp. CONCLUSÕES: Observou-se número relativamente elevado de fungos anemófilos (potencialmente patogênicos) em áreas especiais e níveis expressivos de leveduras em fontes bióticas e abióticas. O monitoramento microbiológico ambiental deve ser realizado, principalmente em salas especiais com pacientes imunocomprometidos, sujeitos à exposição de patógenos do meio ambiente, assim como, advindos de profissionais de saúde.

Strain differentiation of Trichophyton rubrum by random amplification of polymorphic DNA (RAPD)

Trichophyton rubrum é um importante agente causal de dermatomicose. Os métodos de tipagem molecular têm sido recentemente desenvolvidos para responder questões sobre epidemiologia e auxiliar no esclarecimento de recidivas, após o tratamento. As seqüências aleatórias 1- (5'-d[GGTGCGGGAA]-3') e 6- (5'-d[CCCGTCAGCA]-3') foram usadas para tipagem molecular deste fungo por RAPD produzindo variabilidade intraespecífica. Cinco padrões foram observados entre os 10 isolados de T. rubrum, com ambas as seqüências. Foi concluído que a análise por RAPD pode ser utilizada para estudos epidemiológicos.

Adesäo e invasäo de Paracoccidioides brasiliensis em cultura de células vero / Adherence and invasion of Paraccidioides brasiliensis (isolate 18) to Vero cells

A capacidade de aderir e invadir tecidos do hospedeiro tem sido imputada como importante mecanismo de patogenicidade. Neste trabalho foi estudado o processo de adesäo e invasäo de P. brasiliensis amostra 18, fase L, as culturas celulares da linhagem Vero, usando várias técnicas de microscopia. P. brasiliensis aderiu às células Vero após 30 minutos e formas intracitoplasmáticas apareceram após 5 horas de infecçäo. As células Vero apresentaram modificaçöes na presença do fungo, comportando-se como célula fagocítica, formando protusöes e projeçöes citoplasmáticas em dedo de luva, na tentativa de interiorizar o fungo. O fungo aderido às células exibiu padräo de reconhecimento semelhante ao de culturas com os soros anti-"cell-free" e anti-gp 43. Ambos os antígenos distribuíram-se regularmente na parede fúngica, de maneira específica, e a gp 43 foi mais evidente na conexäo entre as células mäe e filha e também nas proximidades da interaçäo fungo-célula. Células de P. brasiliensis näo foram observadas intracelularmente após tratamento com citocalasina D, sugerindo que um dos mecanismos que o fungo utiliza durante o processo de invasäo e via microfilamentos de actina. Por meio deste trabalho, informaçöes relevantes sobre os processos de adesäo e p emvolvimento do citoesqueleto durante a invasäo puderam ser demonstradas, podendo auxiliar no entendimento da patogênese de P. brasiliensis.

Candidíase vulvovaginal com episódios de repetiçäo: epidemiologia e biotipagem de isolados de Candida albicans / Recurrent vulvovaginal candidiasis: biotyping and epidemiology of Candida albicans isolates

Na presente pesquisa, os resultados das avaliaçöes microbiológicas das secreçöes vaginais para presença de leveduras por exame a fresco/coloraçäo de Gram e cultura foram positivos, respectivamente em 69,4 por cento e 87,1 por cento. Cento e nove isolados de Candida sp foram recuperados de secreçöes vaginais, cavidade bucal, fezes e urina de 29 pacientes com candidíase vulvovaginal em vários episódios de repetiçäo. Foram identificados 86,2 por cento como C. albicans, 3,7 por cento com C. glabrata, 3,7 por cento com C. guilliermondi e 6,4 por cento como C. famata. O biótipo 177 foi mais freqüente nas secreçöes vaginais (46,8 por cento) nas fezes (53,8 por cento), na urina (50 por cento) e cavidade bucal (43,7 por cento). Pelo sistema killer foram diferenciados seis tipos de C. albicans com predominância do biótipo 888 em 87,2 por cento das amostras de secreçöes vaginais, 100 por cento em fezes, 88,9 por cento em urina e 68,7 por cento da cavidade bucal. Todos isolados de Candida albicans pertenciam ao sorogrupo A.

Fatores envolvidos na patogênese fúngica / Virulence factors in the fungal pathogenesis

Progresso considerável vem ocorrendo no estudo de fatores que contribuem para a patogenicidade dos fungos. Este artigo sumariza alguns dos fatores de virulência potenciais e sua contribuiçäo à patogênese. O papel de vários fatores, como: aderência aos tecidos do hospedeiro, variabilidade fenotípica, toxinas e enzimas, é discutido, assim como o provável papel das proteínas de choque térmico. Combinaçöes destas propriedades, mais do que sua açäo isolada, podem servir como mecanismo de virulência nos fungos.

Correlaçäo entre produçäo de proteinase e patogenicidade de cepas de C. albicans isoladas de águas recreacionais / Correlative relationship between proteinase production and pathogenicity of various straisn of Candida albicans from recreational waters

Cepas de Candida albicans isoladas de águas recreacionais, representadas por seis biótipos, todas sorotipo "A", foram avaliadas quanto à produçäo de proteinase, e este parâmetro correlacionado com a virulência para camundongos. O teste foi realizado pela inoculaçäo intravenosa em camundongos. O fígado e os rins destes animais foram removidos 6, 24 horas, 3, 7, 14, 21 e 28 dias após a inoculaçäo com C. albicans; triturados, homogeneizados e plaqueados em meio adequado. Colônias leveduriformes foram contadas e os resultados expressos em unidades formadoras de colônia (U.F.C.) por órgäo. A atividade de proteinase - observada em 37 por cento das cepas - foi identificada como um polipeptídeo de 44 kDa empregando-se eletroforese em gel de poliacrilamida, ao qual se incoporou substrato adequado. Houve diferenças estatisticamente significativas entre a presença ou ausência de proteinase e capacidade de colonizaçäo de fígado e rins. Amostra proteinase positiva produziu infecçäo fatal em 21 dias, enquanto camundongos inoculados com cepa deficiente näo morreram até o 28§ dia. Estes resultados evidenciam que a atividade de proteinase é um dos fatores de virulência associados à C. albicans e a sua expressäo em cepas isoladas de águas recreacionais tem comportamento semelhante ao de espécimes clínicos

Characterization of plasmid-related antigen of Yersinia enterocolitica by immunological techniques

Yersínia enterocolitica tem sua virulência relacionada a plasmídeo de 40-48-MDa que codifica proteínas que podem ser expressas nas membranas ou excretadas no meio de cultura. Procurou-se determinar o perfil dessas proteínas em cepas de Y. enterocolitica com e sem o plasmídeo de 40-48-MDa, através de gel de poliacrilamida com SDS (SDS-PAGE). Procurou-se também estudar as condiçöes ótimas de cultura de bactérias para expressäo dessas proteínas e finalmente analisá-las empregando a técnica de Immunoblot e utilizando anti-soro preparado com a amostra com e sem plasmídeo. Esses estudos resultaram na demonstraçäo da ocorrência, entre outros, de uma proteína de 38-kDa, presente apenas na cepa com plasmídeo e que era excretada quando o cultivo era realizado a 37ºC em meio de MOX

Estudo comparativo (in vitro) da açäo de diluiçöes e dinamizaçöes de Kalium iodatum sobre culturas de Aspergillus fumigatus / Comparative in-vitro study of the effect of dilution and dinamizations of Kalium iodatum on Aspergillus fumigatus culture

Entre os inúmeros medicamentos homeopáticos de origem mineral estäo os sais de potássio e entre estes últimos, o iodeto de potássio (Kalium expectorante, como fonte de iodo e como antifúngico