Optimización de cultivos de hepatocitos humanos para estudios de citotoxicidad / Optimization of human hepatocyte cultures for citotoxicity studies

Los cultivos de hepatocitos entregan un valioso acercamiento al estudio de las funciones metabólicas específicas del hígado, evaluación de citotoxicidad. No existen líneas humanas inmortales con función normal. La inmortalización de hepatocitos humanos con el método UCHT1(medio de cultivo condicionado por células tumorales de tiroides) permitirá prolongar la sobrevida y función de estos, siendo útil para evaluar funcionalidad y citotoxicidad. Objetivo: Optimizar el cultivo de hepatocitos humanos. Metodología: En cultivos primarios de hepatocitos humanos, se agregó medio UCHT1 cultivando en superficies de colágeno, polilisina, gelatina y matrigel. Como control positivo, se utilizó línea Gherschenson (GER) para evaluar curva de crecimiento y producción de Glucógeno (PAS). Se evaluó citotoxicidad (LIVE/DEAD) en hepatocitos GER expuestos a Metotrexato (10, 100 y 1000 mM) a 24, 48 y 72 hrs. Resultados: Se realizó 3 cultivos primarios. Fue efectiva la utilización de Polilisina y Colágeno. Duración 8 meses. No se ha realizado la curva de crecimiento, ni evaluación de funcionalidad en hepatocitos humanos. La línea GER tiene un crecimiento exponencial (tiempo duplicación: 36 hrs). Se observó producción de glucógeno en condiciones de diferenciación hasta 120 hrs. La citotoxicidad por Metotrexato tiene una curva dosis dependiente, significativa en todas las concentraciones (p<0,001) (CL50 a 1000 mM a 24 hrs). Conclusiones: Se logró establecer una línea primaria de hepatocitos humanos. La polilisina y el colágeno han optimizado el establecimiento de cultivos primarios. El método PAS permitió evaluar producción de glucógeno (diferenciación). Los valores de citotoxicidad demostraron un efecto dosis dependiente en las condiciones experimentales. Logrando estandarizar el método para evaluación futura de líneas celulares humanas.

Background: Hepatocyte cultures are a valuable tool to study specific metabolic liver functions and cytoxicity. Human hepatocyte cell lines with normal function do not exist. Immortalization of human hepatocytes with a rat thyroid cell line (UCHT1) allows long-term survival and function of these cells, becoming useful to evaluate functionality and cytotoxicity. Aim: To optimize long-term culture of human hepatocytes. Material and Methods: UCHT1 media was added to primary cultures of human hepatocytes, seeding in collagen, gelatin, matrigel and polilisine surfaces. Gherschenson cell line (GER) was used as a positive control to evaluate the growth curve and Glycogen production (PAS). Cytotoxicity was evaluated (LIVE/ DEAD) in GER hepatocytes exposed to Metotrexate (10, 100 and 1000 µM) 24, 48 and 72 hrs. Results: Three primary cultures were made. The use of Polilisine and Collagen was effective. Cultures were kept for 8 months. Growth curves or evaluation of functionality in human hepatocytes, were not carried out. GER cell line had an exponential growth (duplication time: 36 hrs). Production of glycogen in differentiation conditions was observed up to 120 hrs. Cytotoxicity by Metotrexate had a dose dependent curve with a 50% lethal dose calculated as 1000 µM at 24 hrs. Conclusions: A primary line of human hepatocytes was obtained. Polilisine and collagen optimized the establishment of primary cultures. PAS method allowed the evaluation of glycogen production (differentiation). Cytotoxicity demonstrated a dose dependent effect in experimental conditions.

Efecto de la fortificación de la harina con ácido fólico sobre la evolución de las tasas de prevalencia al nacimiento de malformaciones congénitas en los hospitales chilenos del ECLAMC / Effects of folic acid fortification in the rates of malformations at birth in Chile

Background: The effects of folic acid fortification on neural tube defects is well known. Other reports show a beneficial effect of the fortification on orofacial clefts, urinary malformations and defects caused by limb reduction. Aim: To determine the changes in prevalence of congenital malformations after the start of flour folic acid fortification in Chile. Material and methods: The rates of 22 malformations occurring in the maternity of the University of Chile Clinical Hospital and other Chilean hospitals participating in the Latin American Collaborative Study of Congenital Malformations (ECLAMC) were compared before and after the start of flour folic acid fortification. Results: After the start of folic acid fortification a significant reduction in the rates of anencephalia, spina bifida and diaphragmatic hernia, was observed. The rates of all other malformations remained stable or increased. The rates of all malformations at the University of Chile Clinical Hospital had a steady increase until 2005 and were significantly higher than in the rest of hospitals participating in ECLAMC. Conclusions: Folic acid fortification was associated with an expected reduction in rates of spina bifida and anencephalia and an unexpected reduction in the rates of diaphragmatic hernia.

Pólipos endometiiales: manejo con histeroscopia quirúrgica y correlación histológica / Endometrial polyps: management with surgical hysteroscopy and histological correlation

Se presenta la experiencia quirúrgica en 160 pacientes con diagnóstico ecográfico de pólipo endometrial. Se evalúan las características epidemiológicas, clínicas y la correlación histológica. La edad promedio fue de 50 años, se analizaron las variables diferenciándolas en premenopáusicas o post menopáusicas, y presencia de síntomas. En todos los subgrupos la incidencia fue igualmente alta para los pólipos endometriales, seguida en frecuencia por los leiomiomas, hiperplasia endometrial y endometrio proliferativo, entre otros. Se encontraron 3 casos de adenocarcinoma endometrial, todos en el subgrupo de las pacientes postmenopáusicas sintomáticas. El procedimiento fue bien tolerado, y sin complicaciones. Destacamos a la histeroscopia como el estándar dorado por su alta sensibilidad y especificidad en el diagnóstico de pólipo endometrial.

The surgical experience in 160 patients with echographic diagnostic of endometrial polyps, are analyzed. Clinical and pathological characteristics are evaluated. The patient average age was 50 years old; variables were analyzed differentiating them in pre menopausal or post menopausal, according to the presence of symptoms. In all sub-groups the incidence was equally high for the endometrial polyps, followed in frequency by leiomyomas, endometrial hyperplasia and endometria proliferative among others. Three cases of endometrial adenocarcinoma were found, all in the sub-group of the symptomatic post menopausal patients. The procedure was well tolerated, without complications. We emphasized the hysteroscopy procedure as the gold standard by its high sensitivity and specificity in the endometrial polyp diagnosis.

Dos inhibidores de recaptación de serotonina en eyaculación precoz / 2 serotonin reuptake inhibitors in premature ejaculation

La eyaculación precoz es muy frecuente, pero sólo consultan aquellos hombres que lo sienten como problema. Los inhibidores de la recaptacción de Serotonina actuan a nivel de la vesícula sináptica impidiendo la recaptación del neurotransmisor, permitiendo así una mayor utilización por la neurona sináptica