RESUMO
As a preliminary step towards characterizing genes encoding ATP-binding cassette (ABC) transporters that confer pleiotropic drug resistance in Aspergillus, we used a PCR-based approach to isolate four DNA fragments corresponding to different ABC type transporter genes. DNA sequencing and Southern blot analysis confirmed that they were distinct genes, which were designated abcA-D. One of these genes, abcD, was cloned and characterized. It was found to have a predicted 1,452-amino acid translation product with a calculated molecular mass of 147,467 kDa. The abcD gene specifies a single transcript of approximately 5.0 kb; there was a two- to six-fold enhancement of mRNA levels following exposure to miconazole, camptothecin, methotrexate, and ethidium bromide
Assuntos
Aspergillus nidulans/genética , Farmacorresistência Fúngica Múltipla/genética , Transportadores de Cassetes de Ligação de ATP/genética , Antifúngicos/farmacologia , Aspergillus nidulans/efeitos dos fármacos , Aspergillus nidulans/metabolismo , Southern Blotting , DNA Fúngico/genética , Testes de Sensibilidade Microbiana , Dados de Sequência Molecular , Reação em Cadeia da Polimerase , Sequência de Aminoácidos/genética , Transportadores de Cassetes de Ligação de ATP/metabolismoRESUMO
In order to identify genes expressed in the pistil that may have a role in the reproduction process, we have established an expressed sequence tags project to randomly sequence clones from a Nicotiana tabacum stigma/style cDNA library. A cDNA clone (MTL-8) showing high sequence similarity to genes encoding glycine-rich RNA-binding proteins was chosen for further characterization. Based on the extensive identity of MTL-8 to the RGP-1a sequence of N. sylvestris, a primer was defined to extend the 5' sequence of MTL-8 by RT-PCR from stigma/style RNAs. The amplification product was sequenced and it was confirmed that MTL-8 corresponds to an mRNA encoding a glycine-rich RNA-binding protein. Two transcripts of different sizes and expression patterns were identified when the MTL-8 cDNA insert was used as a probe in RNA blots. The largest is 1,100 nucleotides (nt) long and markedly predominant in ovaries. The smaller transcript, with 600 nt, is ubiquitous to the vegetative and reproductive organs analyzed (roots, stems, leaves, sepals, petals, stamens, stigmas/styles and ovaries). Plants submitted to stress (wounding, virus infection and ethylene treatment) presented an increased level of the 600-nt transcript in leaves, especially after tobacco necrosis virus infection. In contrast, the level of the 1,100-nt transcript seems to be unaffected by the stress conditions tested. Results of Southern blot experiments have suggested that MTL-8 is present in one or two copies in the tobacco genome. Our results suggest that the shorter transcript is related to stress while the larger one is a flower predominant and nonstress-inducible messenger
Assuntos
Flores/genética , Proteínas de Plantas , Reprodução , Proteínas de Ligação a RNA , Nicotiana , Perfilação da Expressão Gênica , Biblioteca Gênica , Hibridização de Ácido Nucleico , Reprodução , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa , Análise de Sequência de Proteína , Análise de Sequência de RNA , Alienação Social , Estresse Fisiológico , Nicotiana , VirosesRESUMO
Existem quase 260.000 clones independentes, seqüenciados a partir da extremidade 5', no banco de dados do SUCEST (Sugarcane Expressed Sequence Tag), os quais foram obtidos a partir de 37 bibliotecas de cDNA preparadas de diferentes tecidos. Este grande número de etiquetas de seqüências expressas (ESTs) fornece uma oportunidade, sem precedentes em plantas, de realizar um 'digital differential screening' em bibliotecas de cDNA selecionadas. Geralmente, a freqüência de um determinado EST está correlacionada ao acúmulo de transcritos nos tecidos dos quais as bibliotecas de cDNA foram construídas, e desta forma, é possível comparar o transcriptoma completo de diferentes tecidos, usando uma análise computacional de um banco de dados de ESTs. Em nossa pesquisa, analisamos os ESTs de cana-de-açúcar de acordo com sua expressäo tecidual e identificamos mais de 1.000 putativos genes específicos de flor. O fato de que usando esta técnica fomos capazes de identificar homólogos em cana-de-açúcar, de vários genes previamente descritos como específicos de pólen, sustenta este método de estimar especificidade tecidual. Além disto, ESTs com similaridade a genes específicos de órgäos reprodutivos foram revelados, como por exemplo, o gene que codifica uma proteína meiótica essencial para a montagem do complexo sinaptonêmico e sinapse normal. Esta abordagem também permitiu a identificaçäo de muitas seqüências anônimas, específicas de flor, que säo boas candidatas para novos genes envolvidos com a reproduçäo de plantas. Este trabalho descreve a análise dos níveis de expressäo gênica de 24 clusters de ESTs, durante o desenvolvimento floral, usando um 'northern blot digital' construído a partir da contagem direta dos ESTs das bibliotecas näo-normalizadas de cDNAs de cana-de-açúcar.