Desarrollo de la produccion de inmunoglobulinas humanas especificas. III Produccion de un lote de prueba de inmunoglobulina especifica antitetanica. / Development of the production of specific human immunoglobulinas.III. Production of a test batch of antitetanic specific immunoglobulins

Se presenta un estudio para la preparacion a escala de laboratorio de inmunoglobulina humana hiperinmune antitetanica. El plasma hiperinmune se obtuvo inmunizando voluntarios con 2 esquemas de vacunacion distintos, lograndose un titulo promedio de 42,72 Ul/ml de plasma. El fraccionamiento se llevo a cabo por el metodo 6 y 9 de Cohn original. A partir de un plasma con una potencia de 39 Ul/ml se llego a una inmunoglobulina con 220 Ul/ml lo qual representa una concentracion de 5.64 veces el titulo inicial. El rendimiento a lo largo del proceso fue de 20% menos de lo reportado en otras plantas fraccionadoras lo cual se considero relativamente aceptable en una etapa inicial del trabajo. El estudio permite concluir que se cuenta con la tecnologia necesaria en el Instituto Nacional de Higiene, para la elaboracion de este producto a mayor escala

Elaboracion de una preparacion nacional de referencia de antitoxina tetanica liofilizada. / Preparation of National Standard of lyophylized tetanus antitoxin

El objectivo de este trabajo fue elaborar una preparacion de referencia de antitoxina tetanica liofilizada. El producto se preparo a partir de gamma globulina humana hiperinmune concentrada conteniendo 367 (ul/ml). La formulacion del producto fue calculada para contener 25 Ul/ampula y 5 Ul/ml al ser reconstituido con 5 ml de diluente. Se uso sacarosa como suporte y glicina como estabilizador durante la liofilizacion. La prueba de potencia del producto liofilado se efectuo mediante un estudio en colaboracion en el que participaron 3 laboratorios. Los resultados muestran que se tiene un producto de facil resuspensibilidad, esteril, con bajo contenido de humedad residual y una potencia de +/- 0.013 (desviacion estandar promedio entre los diferentes laboratorios). Con ello, podemos concluir que el producto puede ser usado como preparacion nacional de referencia

Desarrollo de la produccion de inmunoglobulinas humanas especificas. I.Titulacion de la antitoxina tetanica en el proceso de obtencion de la inmunoglobulina humana normal. / Development of the production of specific human immunoglobulins. I. Titration of tetanus antitoxin during the process for obtention of human normal immunoglobulin

Este es un estudio preliminar en el desarrollo de inmunoglobulinas especificas. En este primer trabajo se determino el titulo de antitoxina tetanica por el metodo de Ipsen en varias etapas del proceso de produccion de inmunoglobulina humana normal inespecifica por las tecnicas 6 y 9 de Cohn a partir de plasma. El estudio se efectuo en tres lotes de produccion (A, B y C). Los niveles de antitoxina en unidades internacionales de antitoxina por mililitro (UIA/ml) de cada lote, desde la materia prima hasta el producto terminado, fueron: lote A: 0.069, 0.102, 3.251 y 5.848; B; 0.140, 0.177 y 12.53; lote C:0.182 0.204, 0.331 y 3.31. Tambien se estudiaron las variaciones de volumen del producto, la concentracion de proteinas y la pureza electroforetica en cada etapa. El fraccionamiente por el metodo 6 y 9 de Cohn aumento entre 18 y 89.5 veces la potencia del producto. Estos aumentos estan de acuerdo con los requerimientos minimos de la Organizacion Mundial de la Salud que fijan un aumento minino de 10 veces

Desarrollo de la produccion de inmunoglobulinas humanas especificas. II.Comparacion de tecnicas para titulacion in vivo e in vitro de antitoxina tetanica. / Development of the production of specific human immunoglobulins. II. Comparison of techniques for in vivo and in vitro titration of tetanus antitoxin

Se compararon tres metodos para titulacion in vivo e in vitro para la determinacion cuantitativa de antitoxina tetanica en el laboratorio, con objeto de seleccionar un metodo practico para control de donadores hiperinmunizados con toxoide tetanico, en el proceso de produccion de inmunoglobulina humana antitetanica. El metodo de hemaglutinacion con globulos humanos sensibilizados con cloruro de cromo da una (excelente correlacion con la neutralizacion in vivo (r= 0.926), mejor que ELISA (r= 0.823), por lo que se considera adecuada para este trabajo

Evaluacion de cepas de Bordetella utilizadas en la produccion de vacuna antipertussis en cultivo estacionario. / Evaluation of Bordetella pertussis strains used in the production of pertussis vaccine in stationary culture

El objetivo de este trabajo fue estudiar cada una de las cepas involucradas en la produccion de la vacuna pertussis en lo referente a pruebas de toxicidad y potencia con la finalidad de reducir al minimo el numero de ellas para la produccion de dicha vacuna. Las cepas estudiadas fueron las 10,536, 22,490, 22,402, 54,47 y 12, a partir de las cuales se obtuvo un lote de vacuna en cultivo estacionario. Los resultados muestran que los lotes producidos con las cepas 10,536, 22,490 y 12 son atoxicos, de potencia superior a 8 UP/ml y estables durante dos anos. Las otras cepas son de baja potencia o bien inestables en un periodo de dos anos. La toxicidad de la cepa 54 almacenada a + 4oC se conserva durante un ano y se destoxifica a los dos anos con disminucion de la actividad protectora. En conclusion, para producir esta vacuna en cultivo estacionario se decidio usar solo las cepas 10,536, 22,490 y 12

Actividad biologica de la vacuna pertussis preservada con analogos estructurales del tiomersal. / Biological activity of pertussis vaccine preserved with structural analogs of thiomersal

Estudiamos el efecto de varios analogos del tiomersal sobre la actividad biologica de dos vacunas pertussis producidas una en cultivo estacionario y otra en cultivo sumergido. La prueba de proteccion activa en el raton se efectuo para analizar el efecto. Tambien se determino la concentracion de los diferentes analogos en la vacuna completa, sobrenadante y el paquete celular. Los resultados muestran que existen diferencias en la actividad biologica de la vacuna tratada con los diferentes analogos y se observo ademas que estos compuestos se encuentram en concentraciones diferentes en las tres fracciones estudiadas

Mezcla optima de vacuna pertussis elaborada por fermentacion. / Optimal concentration in mixtures of pertussis vaccine produced by fermentation

Con el objeto de lograr una vacuna atoxica y potente antigenicamente se efectuo un estudio para determinar la concentracion optima en la que deben mezclarse las cepas de B. pertussis 134 y 509 que se utilizan en la elaboracion de la vacuna pertussis producida por proceso de fermentacion. Se prepararon 15 lotes que incluyen las cepas individuales y sus respectivas mezclas.Las pruebas efectuadas a cada lote fueron: opacidad, esterilidad, toxicidad y potencia. La primera tuvo una variacion minima entre lotes; la esterilidad fue satisfactoria en todos los casos; la toxicidad se determino siguiendo el metodo de Pittman y van Ramshorts, en que se mide el incremento de peso del raton. Se observo que la toxicidad moderada que existe cuando la concentracion de cada cepa es de 100% tiende a anularse cuando se mezclan dichas cepas a diferentes concentraciones. La prueba de proteccion en el raton se efectuo por el metodo de Kendrick, encontrando que no hay diferencias significativas por lo que se refiere a la potencia para mezclas de ambas cepas en cualquier proporcion

Liofilizacion de vacuna pertussis para uso como preparacion de referencia / Lyophilization of pertussis vaccine to be used as reference

En este trabajo se liofilizo vacuna pertussis sola y con los siguientes soportes: sacarosa al l.5%, manitol al 5%, glicina al 5% y glutamato de sodio al 1.5%, con la finalidad de obtener una vacuna que cubriera los requisitos fisicoquimicos y biologicos necesarios para establecer una preparacion interna de referencia de la vacuna pertussis en el Instituto Nacional de Higiene. La vacuna liofilizada con manitol al 5% presento un aspecto homogeneo, rapida resuspensibilidad, atoxica para el raton y conserva la inmunogenicidad que tenia como vacuna liquida en la prueba de proteccion activa en el raton. Los resultados permiten considerar que el producto puede ser usado como una preparacion interna de referencia para la prueba de potencia de la vacuna pertussis

Relacion experimental entre leucocitos y otros factores de Bordetella pertussis / Experimental relationship between leukocytosis and other factors of Bordetella pertussis

Se estudiaron la dosis y la via de inoculacion en el raton con respecto al factor promotor de leucocitosis (FPL) en la vacuna pertussis. Tambien se investigo la relacion del FPL con el factor sensibilizante a la histamina (FSH), el factor que causa baja ganancia de peso en el raton (FBGP) y el antigeno protector (AP).Durante la inmunizacion, la leucocitosis aumento em forma proporcional a la dosis. En el desafio, la leucocitosis disminuyo al aumetar la dosis. Al injeyectar a ratones con cuatro unidades de opacidad (UOP) por via intraperitoneal (IP) y subcutanea (SC) se presento la leucocitosis mas alta al quinto dia de la inmunizacion induciendose mayor leucocitosis por la via IP. Por la via intravenosa (IV) cuatro UOP matan a todos los ratones y con 1.6 UOP la leucocitosis fue tan alta como en la via IP al tercer dia de la inmunizacion. La inoculacion de cinco UOP de vacuna toxica induce mayor leucocitosis que la vacuna atoxica.Los resultados sugieren una estrecha relacion entre el FPL, FSH, FBGP y el AP en la vacunas pertussis

Relacion experimental entre el factor sensibilizante a la histamina y el antigeno protector de Bordetella pertussis / Experimental relationship between the histamine sensitizing factor and Bordetella pertussis protective antigen

Con cinco lotes liquidos de vacuna pertussis y dos lotes liofilizados se estudio la relacion entre la prueba de factor sensibilizante a la histamina (UFSH) y la potencia del producto en el Instituto Nacional de Higiene. Se encontro una relacion de 1.76 a 2 UFSH por cada unidad de potencia.Dado que la prueba de UFSH es mas economica y mas rapida que la prueba de potencia, se sugiere su empleo como prueba orientadora para el control de la produccion sin sustituir la prueba oficial de potencia para la liberacion de los lotes

Factores que afectan la potencia en la producion de vacuna tifoidica / Factors affecting the potency in the production of typhoid vaccine

Se estudiaron las etapas del proceso de produccion de la vacuna tifoidica para explicar la baja potencia de lotes producidos anteriormente en el Instituto Nacional de Higiene. Se encontro que durante el proceso existia perdida del antigeno Vi, el cual es importante en la evaluacion de la potencia de la vacuna en el raton. Se ensayaron algunas modificaciones al metodo de produccion en cultivo estacionario:cambio de medios de cultivo, adicion de iones de Ca + + y Mg + + como estabilizadores y recuperacion del antigenos Vi por el metodo de Jarvis readicionandolo al paquete celular. La adicion de los estabilizadores y el antigeno Vi a la vacuna incremento la potencia a limites superiores a los establecidos por las normas de produccion

Liofilizacion de vacuna tifoidica fenolizada / Lyophylization of typhoid vaccine produced with phenolization

Se prepararon dos lotes de vacuna tifoidica fenolizada concentrada para liofilizarla. Se probaron vacunas simples y con soportes: glicina, manitol, glicina/sacarosa Basandose en el aspecto, en inocuidad, y la potencia, se decidio liofilizar la vacuna sin soporte. Al productor liofilizar se le hicieron pruebas de control fisico quimico y biologico, obteniendo un producto que resuspendido con 20 ml de solucion salina isotonica contiene 10 bacterias/ml, es homogeneo en el envase del lote, es inocuo al raton, tiene resuspensibilidad rapida y una potencia de 14.2 unidades protectoras/ml. Estos resultados permiten considerar que se tiene un producto estable para ser empleado como una preparacion de referencia para la prueba de potencia de vacuna lifoidica fenolizada. A continuacion debera realizarse un estudio en colaboracion para establecerla como preparacion nacional de referencia

Seleccion biologica de Bordetella pertussis y Salmonella schottmuelleri empleando raton diabetico. / Biological selection of Bordetella pertussis and Sallmonella schottmuelleri using diabetic mices

Por inoculacion de ratones diabetizados con alizana y recuperacion de los microorganismos inoculados, se logro incrementar la virulencia de una cepa de Bordetella pertussis y se aumento la antigenicidad para reacciones de aglutinacion de una cepa de Salmonella schottmuelleri