Diagnóstico laboratorial da deficiência de ferro: [revisão] / Laboratory diagnosis of iron deficiency anemia: [review]

A deficiência de ferro é a causa mais comum de anemia e, em geral, o diagnóstico laboratorial é feito sem grandes dificuldades, usando-se testes simples e rotineiramente disponíveis pelos laboratórios em geral. A interpretação dos resultados, no entanto, deve ser feita cuidadosamente, tendo em mente as limitações e interferentes de cada reação. Nessa revisão serão apresentados os testes que auxiliam na investigação da deprivação de ferro, com algumas noções técnicas e comentários sobre a interpretação dos mesmos.

Iron deficiency is the most common cause of anemia and, in general, the diagnosis is easily established by simple tests that are routinely available in general laboratories. The interpretation of results, however, must be carefully carried out keeping in mind the limitations and interference in each reaction. This review presents the tests that assist in the investigation of iron deficiency, with some technical aspects and comments on their interpretation.

Fisiologia e metabolismo do ferro: [revisão] / Iron physiology and metabolism: [review]

O conhecimento sobre a fisiologia e metabolismo do ferro foi bastante incrementado nos últimos anos. A identificação de alguns genes e as repercussões quando de suas mutações, principalmente as relacionadas ao acúmulo de ferro, auxiliaram no entendimento dos mecanismos regulatórios responsáveis pela manutenção da homeostase desse nutriente essencial para numerosos processos bioquímicos. A função de diversas moléculas já está bem estabelecida, como da transferrina e seu receptor e, nas últimas décadas, novas moléculas têm sido identificadas, como a ferroportina, o transportador de metal divalente e hemojuvelina. Um elegante mecanismo de controle mantém o equilíbrio entre os processos de absorção do ferro, reciclagem, mobilização, utilização e estoque. Alterações no sincronismo desses processos podem causar tanto a deficiência como a sobrecarga de ferro, ambos com importantes repercussões clínicas para o paciente. Nessa minirrevisão serão abordados aspectos relacionados ao metabolismo do ferro e à participação de várias proteínas e mediadores envolvidos. Serão também apresentados os mecanismos regulatórios celular e sistêmico responsáveis pela disponibilidade do ferro em concentrações ideais para a manutenção de sua homeostase.

Knowledge of the iron physiology and metabolism has increased greatly over the last few years. The identification of genes and the consequences of mutations, especially those related to the accumulation of iron, have improved the understanding of the regulatory mechanisms responsible for maintaining homeostasis of this essential nutrient in many biochemical processes. The function of several molecules is well established, as in the case of transferrin and its receptor and, in recent decades, new molecules have been identified such as ferroportin, divalent metal transporter, hemojuvelin and hepcidin. An elegant control mechanism maintains the balance between the processes of iron absorption, recycling, mobilization, utilization and storage. Disturbances in the synchronism among those processes may lead either to iron deficiency or to iron overload, both of which have important clinical consequences. This mini-review attempts to describe aspects related to iron metabolism and the participation of several proteins and mediators involved in these mechanisms. Moreover, intracellular and systemic regulation mechanisms responsible for providing the most suitable iron concentration for iron homeostasis maintenance will be presented.

O hemograma: importância para a interpretação da biópsia / Blood cell analysis: the importance for biopsy interpretation

Os dados fornecidos pelo hemograma são essenciais dentro da investigação das doenças hematológicas. Os contadores automatizados constantemente têm incorporado novas tecnologias que permitem uma análise mais detalhada das células. Informações referentes tanto a aspectos quantitativos como morfológicos das células sanguíneas podem ser úteis na análise da medula óssea. Nessa minirrevisão alguns desses novos parâmetros são apresentados, como o RDW (distribuição da população de hemácias de acordo com o volume) e índices relacionados ao tamanho, grau de maturidade e conteúdo de hemoglobina dos reticulócitos. A interpretação dos histogramas de hemácias, leucócitos e plaquetas podem fornecer informações adicionais aos resultados numéricos. Outros parâmetros e índices plaquetários, como o volume plaquetário médio (VPM) e a fração de imaturidade das plaquetas (IPF) são introduzidos, embora não estejam ainda padronizados e devam ser usados com cautela. São ainda discutidas a quantificação das várias populações de leucócitos presentes na circulação sanguínea obtidas pelos sistemas automatizados, suas vantagens e limitações. Embora o desenvolvimento de sofisticados analisadores hematológicos tenha reduzido o número de revisões de lâminas de esfregaço sanguíneo, essa prática deve ser encorajada, uma vez que a observação microscópica das células é uma ferramenta importante na identificação de diversas patologias.

Examination of blood cells is an essential part of the hematological investigation. The introduction of new physical principles for cell analysis incorporated into automated cell counters has provided new information about blood cells. Data related to both quantification and cell morphology features observed in peripheral blood examinations may be helpful during bone marrow analysis. In this brief review some of these new parameters are presented, such as the red blood cell distribution width (RDW) and indices related to volume, immaturity and hemoglobin content of reticulocytes. The interpretation of graphic displays (histograms of red cells, white cells and platelets) can provide further information that is not available from the assessment of numeric data. Other parameters and platelet indices, such as the mean platelet volume (MPV) and immature platelet fraction (IPF) are introduced, although they are still not standardized and must be used with caution. The quantification of various white blood cell populations present in peripheral blood and the advantages and limitations of automated counts are considered. Although the development of sophisticated automated blood cell analyzers has reduced the number of blood smear examinations, this type of procedure should be encouraged as the smear is an important tool in the diagnosis of several pathologic conditions.

Metabolismo do ferro: uma revisão sobre os principais mecanismos envolvidos em sua homeostase: [revisão] / Iron metabolism: an overview on the main mechanisms involved in its homeostasis: [revision]

Um perfeito sincronismo entre absorção, utilização e estoque de ferro é essencial para a manutenção do equilíbrio desse metal no organismo. Alterações nesses processos podem levar tanto à deficiência como ao seu acúmulo de ferro, duas situações com repercussões clínicas e laboratoriais importantes para o paciente. Essa revisão aborda os diversos aspectos relacionados com a cinética do ferro, descrevendo as proteínas e mediadores nela envolvidos. Apresenta, ainda, como é feita a regulação intracelular e sistêmica do ferro que visa a manutenção de uma quantidade ótima de ferro para o metabolismo das células e, em especial, para uma perfeita hematopoiese.É discutido também o importante papel da hepcidina, como regulador da homeostase sistêmica. Será a apresenta da a relação entre a hepcidina e a resposta de fase aguda, e como as alterações na expressão da hepcidina podem contribuir com a fisiopatogênese da anemia de doença crônica.

The perfect synchronism of intestinal absorption, use and storage of iron is critical for maintaining a balance in the organism. Disorders in these processes may lead either to iron deficiency or to iron overload, both of which have important clinical and laboratorial consequences for the patient. This review describes aspects related to iron metabolism and the participation of several proteins and mediators in these mechanisms. Moreover, intracellular and systemic regulation is responsible for providing the optimal iron concentration for cellular metabolism and, in particular, for adequate hematopoiesis. The relationship between hepcidin and acute phase response is presented and how changes in hepcidin expression may be related to the physiopathogenesis of anemia of chronic disease.

Reticulocyte parameters in hemoglobinopathies and iron deficiency anemia

Flow cytometric reticulocyte analysis allows the evaluation of reticulocyte maturity. New reticulocyte parameters have been used in the diagnosis and management of anemias, in the bone marrow transplant setting and in the monitoring of iron replacement or erythropoiet in therapy. Reticulocyte numbers and maturation levels have been studied in different hemoglobinopathies and the results have been correlated with the degree of ineffective erythropoiesis. In order to verify differences in reticulocyte parameters in various types of anemias and to test the absolute number of immature reticulocytes as a possible discriminating factor among various types of anemias, reticulocyte counts were performed on 219 samples from patients with sickle cell anemia (SS) (n= 62), hemoglobin S trait (n=9), Sbeta thalassemia (n=7), hemoglobin SC disease (n=11), beta thalassemia trait (n=33) and iron deficiency anemia (n= 47), and non-anemic individuals (n= 50). Mean fluorescence index (MFI) was defined as representative of the degree of reticulocyte immaturity and it was evaluated as a percentage and in absolute values. Reticulocyte counts and MFI values were significantly higher in SS, Sbeta thalassemic and SC groups when compared to controls, but not different among the three anemia groups. Patients with hemoglobin S trait, iron deficiency anemia and beta thalassemia trait showed reticulocyte parameters similar to the non-anemic group. There was no difference between the b thalassemic trait and iron deficiency anemia in relation to any parameters. MFI in absolute numbers were significantly higher in anemias that develop with the hemolytic process, although this was not evident in MFI percentage values. Our results showed that the erythoid expansion in sickle cell diseases (SS, SC and Sb thalassemia) leads to an enhanced immature reticulocyte release from bone marrow and that the phenomena is more evident by the MFI counting in absolute figures than in percentages. We concluded that the assessment of reticulocyte maturity provides interesting data about the pathophysiology and erythopoietic response in different types of anemias

Laboratory assessment of iron status and reticulocyte parameters in differential diagnosis of iron deficiency anemia and heterozygous beta-thalassemia

Introduction:The soluble form of transferrin receptor (sTfR) has been pointed as a useful parameter to assess the iron status and erythropoiesis activity. Immature reticulocytes present high concentration of membrane transferrin receptor. We tested the correlation between sTfR and reticulocyte parameters in iron deficiency anemia (IDA) and heterozygous beta-thalassemia (hetero beta-thal) patients. Laboratory parameters related to iron status and reticulocytes were studied in order to establish their clinical value to distinguish both anemias. Material and Methods: Reticulocyte measurements were obtained using a semi-automated analyzer and serum concentration of sTfR was determined by an immunoenzymatic technique. Forty-nine IDA and 43 hetero beta-thal patients were studied. Results: Reticulocyte count and sTfR values were significantly higher in IDA than in hetero beta-thal group, but the best parameter to distinguish both anemias was sTfR index, obtained by the ratio sTfR/ferritin level. Transport compartment was better evaluated by transferrin dosage than by transferrin iron binding capacity (TIBC) determination. The association of serum iron with transferrin measurements (transferrin index) improved the accuracy of the transferrin test. Discussion: The correlation between highly immature reticulocytes and sTfR level was observed only in IDA group, suggesting that cellular iron deprivation is the main responsible factor for up regulation of the sTfR synthesis in immature red blood cells. High sTfR values in hetero beta-thal patients reflect a degree of ineffective erythropoiesis in this hemoglobinopathy. Conclusion: We concluded that sTfR, ferritin and transferrin measurements are useful and precise parameters to discriminate IDA from hetero beta-thal patients

Aspectos clínicos e o hemograma em crianças expostas ao HIV-1: comparação entre pacientes infectados e soro-reversores / Clinical aspects and complete blood counts in children exposed to HIV-1: comparison between infected patients and seroreverters

Objetivo:analisar evolutivamente aspectos clínicos e hematológicos de crianças expostas à transmissão vertical do HIV-1 e comparar as que se infectaram com aquelas que não se infectaram, ou soro-reversoras. Métodos:trata-se de estudo prospectivo, descritivo,longitudinal. Foram analisadas 79 crianças, filhas de mães infectadas pelo HIV-1, sob seguimento entre março de 1996 a novembro de 1997, no Ambulatóio de Imunodeficiência do Hospital de Clínicas da Unicamp. Resultados:houve comprometimento pôndero-estatural em ambos os grupos, sendo maior no soro-reversores. No grupo das crianças infectadas, 23 mães não fizeram terapia com AZT na gestação, 16 pacientes (61,5por cento) foram amamentados ao seio, quatro foram classificadas na categoria clínica N, sete na A, e 15 na B. Manifestações clínicas antes de um ano de idade ocorreram em 18 lactentes (69,2por cento). Anemia se manifestou em 73,1por cento das crianças infectadas, e em 41,5por cento das com soro-reversão (p<0,008). A comparação entre os grupos mostrou que as alterações mais frequentes nos infectados foram microcitose e hipocromia (p<0,05), linfopenia entre 15 e 18 meses (p<0,05), monocitose entre os 9 e 12 meses (p<0,05) e uma tendência de altos níveis de ferritina, mas sem significância estatística. Conclusões:anemia microcítica e hipocrônica ocorreu em ambos os grupos, sendo ferropriva entre os soro-reversores, e anemia de doença crônica, entre os infectados. Nesse referido grupo, monocitose e linfopenia foram manifestações precoces

Hb Köln [alfa2ß298(FG5) val-met] identified by DNA analysis in a Brazilian family

Hb Köln resulta da substituiçäo do aminoácido valina por metionina na posiçäo 98 da cadeia da hemoglobina. Embora seja a mais freqüente das hemoglobinas instáveis, possui poucas características que permitem distinguí-las sem a realizaçäo de análise estrutural da molécula. Com o objetivo de desenvolver um procedimento alernativo a análise proteíca, este trabalho descreve a identificaçäo da Hb Köln através de análise de DNA. Uma paciente branca, sexo feminino, 4 anos de idade, com icterícia desde o nascimento, foi analisada, apresentando uma banda anômala entre A2 e S em eletroforese em acetato de celulose, e migraçäo eletroforética semelhante a Hb C em gel de agar. Os testes de instabilidade térmica e de precipitaçäo pelo isopropanol foram positivos e foram observados corpúsculos de Heinz no sangue periférico. Os três exons do gene da globina foram seqüenciados e uma transiçäo de G A foi identificada na primeira posiçäo do codon 98. Essa alteraçäo näo cria ou abole nenhum sítio conhecido de enzima de restriçäo. Desta forma, a confirmaçäo da mutaçäo foi levada a efeito através de hibridizaçäo com oligonucleotídeos alelo-específicos, o que permitiu o estabelecimento de um método simples e rápido de identificaçäo de novos casos quando os dados clínicos e o padräo hematológico e eletroforético sugerem Hb Köln.

Avaliaçåo laboratorial do analisador hematológico COBAS ARGOS 5 DIFF: parâmetros globais e contagem diferencial leucocitária / Laboratorial evaluation of the COBAS ARGUS 5 DIFF analyser: complete blood count parameters and differential leukocyte count

O analisador hematológico COBAS ARGOS 5 DIFF foi por nós avaliado de acordo com o protocolo proposto pelo "International Committee for Standardization in haematology" (ICSH). AS contagens globais foram comparadas com as obtidas pelo COULTER T890 e as contagens diferenciais leucocitárias com os resultados da análise microscópica. O COBAS ARGOS emprega os princípios de impedância, citoquímica e transmissäo óptica para distinguir as 5 populaçöes leucocitárias. O equipamento também possui um sistema de alarmes para detectar anormalidades quantitativas e alteraçöes morfológicas presentes nos eritrócitos, leucócitos e plaquetas. Foram obtidos bons resultados nos testes de precisäo, "carry-over" e linearidade e as comparaçöes entre os equipamentos COBAS e COULTER foram excelentes. As correlacöes entre as contagens de linfócitos, neutrófilos e eosinófilos foram obtidas a partir da observaçäo de 150 amostras de sangue e os respectivos coeficientes de correlaçäo foram igualmente bons. As variaçöes observadas nas porcentagens de monócitos e basófilos foram similares às descritas nas avaliaçöes de outros instrumentos e näo representaram uma limitaçäo na utilizaçäo do aparelho. Bons resultados foram também observados entre o sistema de alarmes do aparelho e as anormalidades relatads ao exame do esfregaço sanguíneo, com 4,6 por cento de resultados falso negativos e 10 po cento de falso positivos. O equipamento é de fácil manuseio, é rápido e mostrou excelente desempenho. O alto nível de automatizaçäo resulta em uma significativa reduçäo na necessidade de avaliaçäo microscópica dos esfregaços sanguíneos

Utilidade do RDW e da interpretaçåo eritrocitária no diagnóstico das anemias / RDW utility and interpretation of erythrocyte distribution curve for anemia diagnoses

Os contadores hematológicos de última geraçåo fornecem novos parâmetros que podem ser úteis na diferenciaçåo laboratorial das anemias. Analisamos o valor do RDW (Red cell distribuition width) fornecido pelo COBAS ARGOS 5 DIFF 9ROCHE) na distinçåo entre anemia ferropriva (n=43) e beta talassemia heterozigótica (n=31), compararando-o com outras funçöes discriminantes, baseadas nos índices hematimétricos. Observamos que entre todas as fórmulas matemáticas utilizadas, baseadas nos índices hematimétricos. Observamos que entre todas as fórmulas matemáticas utilizadas, o RDW apresentou o melhor valor preditivo para anemia ferropriva (91,6 por cento), enquanto que na beta talassemia heterozigótica o melhor resultado (88,6 por cento) foi observado quando da combinaçåo do RDW com valores de VCM e Hb. A interpretaçåo do valor do RDW associado à curva de distribuiçåo volumétrica das hemácias foi analisada em diversos tipos de anemia e pudemos observar uma correlaçåo entre as alteraçöes sugeridas pela análise realizada pelo aparelho e as obtidas através da observaçåo microscópica. Os dados por nós obtidos indicam que a interpretaçåo cuidadosa dos dados fornecidos pela automaçåo podem auxiliar no esclarecimento diagnóstico das anemias, completando as informaçöes obtidas através da análise microscópica da série eritrocitária